本申请描述了用于检测抗－类脂抗体和诊断疾病（例如梅毒）的组合物、方法和装置。尤其是，描述了用于将类脂抗原（包括心磷脂、卵磷脂、和胆固醇）固定在固相支持体（例如，硝化纤维膜）上的方法。将类脂抗原固定在膜上的能力满足了对用于检测抗－类脂抗体的基于膜的试验法的长久已知的需要。还描述了用于同时进行梅毒密螺旋体和非密螺旋体检验的免疫测定装置。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测抗-类脂抗体的方法、免疫测定法和装置 相关申请的交叉引用本申请要求2005年6月21日提交的美国临时专利申请No. 60/693,120的优先权，该申请被全文并入本文作为参考。对政府支持的感谢本专利技术是由National Center for HIV, STD and TB Prevention, Division of AIDS, STD ， and TB Laboratory Research, Laboratory Reference and Research Branch Centers for Disease Control and Prevention(美国政府的机构)作出的。
本公开涉及使类脂抗原固定于固相支持体的方法和相关的免疫测 定法和免疫测定装置(例如，检测条、流通装置、或横向流动装置)，该 测定法和装置可用于例如检测抗-类脂抗体和/或诊断疾病(例如，梅毒)。专利技术背景梅毒是由梅毒螺旋体(Treponema pallidum)引起的性传播疾病 (STD)。全世界每年报告超过100,000例成年人梅毒病例。另外，该疾 病先天传播并且每年影响3,000名或更多的婴儿。梅毒感染的进程跨越 许多年并且可以产生多种临床表现，通过四个阶段对其进行表征。梅毒感染的初期发生在细菌感染之后的10-100天，并且特征在于 出现一处或多处下疳(红色、不流血、无痛性溃疡， 一般直径小于1 cm)。 下疳可以出现在生殖器或身体的其它地方上。下疳持续3-6周并且不经 治疗而痊愈，留下小的疤痕。感染者在这个阶段是有传染性的。梅毒感染的第二阶段特征在于可以覆盖身体的部分或全部的皮疹 样皮肤损伤。皮肤损伤通常是不痛的并且在最初的下疳发作之后的1-6 月出现。皮肤损伤可与疣、脓疮、或者溃疡相似。不经治疗，它们在 2-12周痊愈，无疤痕。在感染的这个阶段中也可发生发烧、咽喉痛、 虚弱、体重损失、淋巴结肿胀、和睫毛和/或部分眉毛的损失。另外， 症状可以发展为脑脊膜血管性梅毒，其特征在于遍布脑和脊髓的炎症 和/或脑脉管系统的变化。感染者在第二阶段也是有传染性的。这种疾病的下一个阶段是潜伏梅毒或隐藏阶段。在这个阶段过程中，感染者看起来己经病愈并且是无症状的。这个阶段在没有进行梅 毒治疗的人中有大约三分之二持续终身。在潜伏状态的第一年过程中， 可以发生第二阶段症状的复发。除了在复发过程中之外，感染者在这 个阶段过程中没有传染性；然而，在出现初期下疳的四年内潜伏感染 的母亲所生的小孩可能感染先天梅毒。第三级或晚期梅毒是未经治疗的感染的最后阶段。这个阶段可以 早在感染之后的一年发生，或者在其后的任何时候发生，10到20年是最常见的。以被称为梅毒瘤的损伤为特征的良性梅毒可以发生在骨、 皮肤、和内脏中。罕见死亡，但是可发生严重的毁容和疼痛。心血管 梅毒的特征在于主动脉的动脉瘤以及其它心血管问题，并且经常导致 死亡。神经病学并发症可以发生在梅毒的早期阶段以及表现为晚期阶 段的症状。在晚期阶段疾病中，神经梅毒可能是无症状的，或者患者 可具有严重的神经病学问题，例如可能的痴呆、精神错乱、活动性受 损、盲、聋、甚至死亡。梅毒的免疫应答包括产生以下物质(i)密螺旋体抗体，其是对梅 毒螺旋体(T. pallidum)抗原特异性的，和(ii)抗-类脂抗体，其识别从受 损的宿主细胞释放的类脂物质、脂蛋白样物质和可能的从密螺旋体释 放的心磷脂。梅毒筛选和诊断的主要依据是针对这两种抗体的任一种 或其二者的血清学检验。对于抗-类脂抗体的检验(经常称为"非密螺旋体检验")一般地基于由天然存在的心磷脂、胆固醇和卵磷脂(lethicin)组成的抗原。广泛使用 的非密螺旋体检验(例如，Venereal Disease Research Laboratory (VDRL) 检验和Rapid Plasma Reagin (RPR)检验)在显微镜下监测(例如，VDRL 检验)或肉眼监测(例如，RPR检验)包括抗原-抗体配合物的絮状沉淀的 形成。非密螺旋体检验的优点在于广泛可用、便宜和便于对大量样品 进行检验。此外，因为抗-类脂抗体滴度随梅毒的成功治疗而降低，最 终在大多数患者中消失，而密螺旋体抗体滴度在数年甚至终生保持很 高，因此认为非密螺旋体检验是监测治疗或检验再感染的更好的选择。密螺旋体检验基于衍生自T. pallidum的抗原，并且包括梅毒螺旋 体颗粒凝集(TP-PA)、荧光密螺旋体抗体吸收检验(FTA-ABS)和酶免疫 测定。密螺旋体检验主要用于验证非密螺旋体检验中的反应性。密螺 旋体检验也可用于确认其中非密螺旋体检验不起反应的梅毒的临床印 象。进行密螺旋体检验在技术上更困难、费时、和昂贵，并且不能用 于监测治疗治疗，因为该检验在大约85%的成功治疗梅毒的人中在数 年或终生保持有反应性。上述的每一种抗体检验都使用在临床背景下得到并且送到实验室 进行分析的血清样品进行。因此， 一般地在收集样品之后的几天都不 能得到检验结果。由于跟踪STD患者的时常发生的困难，需要开发快 速的、床边检验(point-of-caretest)，以帮助临床医师作出判断，最好在 检验的当天作出。提供快速的现场结果的免疫测定装置(例如检测条、流通装置、 横向流动装置)可用于定性地检验密螺旋体抗体的血清水平(例如， DiaSys Corporation; ACON Laboratories, Inc.; Biokit, S.A.; Genix Technology; Standard Diagnostics; Cortez Diagnostics, Inc.; 和 Phoenix Bio-Tech Corp)。然而，更难以开发用于抗-类脂抗体的类似检验，至少部分是因为抗-类脂抗体的疏水性抗原(例如，VDRL， USR或RPR抗原、 或心磷脂)抵抗连接于作为免疫测定装置的一个元件的固相支持体。根据一些专家的观点，梅毒检测可以通过用于筛选和诊断目的的 非密螺旋体检验和密螺旋体检验的组合得到进一步的帮助。这是World Health Organization, Treponemal Infections, Technical Report Series 674， Geneva: WHO, 1982所提倡的方法。能够同时检测非密螺旋体和密螺旋 体抗体的易用、快速、床边检验将有助于满足这个长久己知的需要。
技术实现思路
开发用于非密螺旋体检验(或组合的非密螺旋体和密螺旋体检验) 的非溶液免疫测定法的努力已经受到难以将抗-类脂抗体特异性识别的 抗原(称为"类脂抗原")，例如心磷脂、VDRL抗原、USR抗原等连接于 固体底物例如硝化纤维条的阻挠。例如，心磷脂分子的极小尺寸导致 难以将这些分子定位在固体底物上。尽管可以通过使心磷脂与更大分 子(例如蛋白质)结合而增加心磷脂分子的大小，但是这种结合导致心磷 脂抗原性的丧失。 一般地说，类脂抗原的高度疏水性使得难以使这种 抗原结合于许多固体表面，例如硝化纤维和其它微孔膜。本公开提供了可以可靠地使类脂抗原(其至少由心磷脂、磷脂酰胆 碱(也称为卵磷脂)、和胆固醇组成)连接于固体底物(例如微孔膜)同时维 持用于抗-类脂抗体的抗原的抗原性和特异性的本文档来自技高网...
【技术保护点】
包括具有抗－类脂抗体捕获区域的微孔性基底的免疫测定装置，包括： （ａ）固定在基底上的锚定抗体；和 （ｂ）类脂抗原，包括心磷脂、卵磷脂、和胆固醇， 其中固定的锚定抗体特异性结合于类脂抗原的心磷脂、卵磷脂或胆固醇组分中的一种或多种，从而形成固定的锚定抗体－类脂抗原配合物。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：阿诺德R卡斯特罗，罗伯特W格尔格，维多利亚波普，
申请(专利权)人：美国政府健康及人类服务部，疾病控制和预防中心，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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