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一种生物条形码探针的制备方法技术

技术编号:2576166 阅读:287 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术涉及一种生物条形码探针的制备方法,包括:将纳米金溶液与等体积的吐温20缓冲液混合,离心,浓缩后加入到巯基化探针中,水浴过夜,加高浓度的NaCl溶液,水浴,离心,洗涤,稀释,得生物条形码探针,再将生物条形码探针、磁珠探针和靶序列DNA混合、杂交,磁分离器分离磁珠,去除未杂交的生物条形码探针,洗涤,加洗脱液,处理完成后,用磁分离器去除磁珠,留上清液进行荧光检测。该制备方法制备简单,所制备的生物条形码探针更加稳定,检测时间短,检测特异性大大提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属生物检测领域,特别是涉及一种用于生物检测的探针的制备方法。技术背景最初,纳米金主要是用于蛋白质等高分子的标记。蛋白质与纳米金的连接是蛋白质等 高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷,与 蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。纳米金与核酸的连接是最近十年发展的一种技术,不同于蛋白质的标记方法,核酸的 标记主要依靠其与纳米金之间形成的共价键。纳米金标记核酸的方法主要有三种巯基修 饰的寡核苷酸与纳米金的连接,预活化的纳米颗粒与寡核苷酸的共价连接;物素修饰的寡 核苷酸与包被了抗生物素蛋白的纳米金颗粒的连接。至今,巯基修饰的寡核苷酸与纳米金 颗粒的连接方式是最普遍常用的标记方式。巯基标记的共同特点是利用巯基能与纳米金表面发应生成共价连接的方式将寡核苷 酸固定在金颗粒表面。现在的修饰方式大致有三种分别为己基巯基修饰的寡核苷酸,类 固醇二巯基修饰的寡核苷酸以及三巯基修饰寡核苷酸。己基巯基修饰法是最早也是常用的 一种修饰方式,它用己基巯基修饰在寡核苷酸的5'端作为连接分子,再通过巯基与纳米金表明的共价键连接到纳米金颗粒的表面。但单巯基标记的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生物条形码探针的制备方法,包括以下步骤:    (1)将纳米金溶液与等体积的吐温20缓冲液混合,离心,浓缩;    (2)将上述浓缩液加入到巯基化探针中,水浴过夜;    (3)加入高浓度的NaCl溶液,水浴;    (4)离心,洗涤2-3次沉淀后,稀释,得生物条形码探针;    (5)将终浓度10umol/L生物条形码探针、终浓度0.1mg/ml磁珠探针和靶序列终浓度1nmol/LDNA混合、置于55℃水浴杂交20分钟;    (6)磁分离器分离磁珠,去除未杂交的生物条形码探针,并洗涤2-3次;    (7)加入洗脱液。混合后置于55℃水浴20分钟。处理完成后,用磁分离器去除磁珠,留上清...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:朱旺升贺明星范忠鹏周宇荀肖君华
申请(专利权)人:东华大学
类型:发明
国别省市:31[中国|上海]

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