一种四环素分子印迹整体柱的制备方法技术

四环素分子印迹整体柱的制备方法。其步骤如下：将模板分子四环素（ＴＣ）超声溶解在甲醇中，加入功能单体、致孔剂（环己醇和十二醇）振荡作用６小时后，加入交联剂（乙二醇二甲基丙烯酸酯）、引发剂（偶氮二异丁腈），超声脱气后通氮气２０ｍｉｎ除氧，将此溶液注入已封住下端的１０ｃｍ不锈钢柱，封住上端后将其放入６０℃水浴中反应１２小时热引发反应得到分子印迹整体柱。将柱子接到高压输液泵上清洗除去致孔剂和模板分子，最后可得到具有良好分离效果的分子印迹整体柱。本方法与传统本体聚合方法相比，具有制备简单、避免繁琐的研磨过程、分子识别性能好等特点。本发明专利技术所提供的分子印迹整体柱作为一种液相色谱填料，可实现对四环素类抗生素的分离、富集和纯化。

【技术实现步骤摘要】
一种四环素M印迹smi的制备方法S^领域l本专利技术属于生物工程
，涉及肝印迹^4的制备，具体的说，是涉 及四环素^[4素具有特异性识另啲肝印迹^ffi的制备。
技术介绍
四环素^t生素(tetracyclines, TCs)是由,菌产生的一,谱抗生素，作为 饲丰顿加剂，在畜牧#^直中用来预防、控制和治疗水产动、植物的病虫害等疾病，逸就很容易导 致动物源性食品的药物残留，舰人类鶴构成了潜在的危害。许多国就TCs残留鄉例行监 控，我国规定动物源性食品中四环素^C^素的最大残留限量为0.1mg/kg。目前农产品中四环素^fe素残留检测方法主^W:①微生物法检测的特异'(4M、灵, 低、检出限高(>3 mg/tg)，目前自很少；②,免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay ， ELISA):是目前进行'腿筛 ±要、{顿,泛的方法，灵鹏较高(0.1—1 ng/L), 但检测试剂主要^t口，棘高，可适舒一些易处理的样品(尿样、血液等)的现场、'腿 检测，但当样品中含有与抗生素结构相类似的其它化合物时，可能出现假阳性结果，严 响结 果判定。③色谱法其中高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)和气 相色谱街Gas Chromatogmphy， GC)，是国际上公认的四环素^fe素残留定量检测的方法。但是 这数法雜样品前处Sil程錢、价格昂贵、分^3IM曼等缺点，不适針现场、'腿检观扮 析。由于农产品中基质成分复杂，大多数常规检测方法往往无法从这些复杂样品中准确检测到痕 量赃素残留，直接导致ELISA等快速检测方法出现假阳性高等问题、HPLC和GC等色谱法出 鹏时长(3天以上)。因此，如何从錢样品中检测出四环素残留已经成为食品安全检测工作中 重要的研究课题，其中样品的前处理是食品中抗生素残留检测中的关键步骤。有固相萃取 (solid-phase extraction, SPE) ^^Mai^^的专门用于样品纯化和，的一项技术，是 在许多领鹏行样品预处理的标准模式，也是目前赃素残留检观仲样品前处理中的主流技术。 SPE的核心是i辩斗，目前可鹏于SPE的填料种姓魏活性碳、^K^酸、镁氧化铝等。这 對专统填料中的吸附剂与固相萃取中的目标物质之间的作用力是非特异性的，因此限制了固相萃 取技术的进一步紙肝印迹技术是一种高选择性的仿生识别方法，以其操作简单、聚合物的选择断、性能稳 定、价,宜靴点，用于固相靴、色谱柱±真料中。之前也有将其用于固相靴四环素離生 素的鹏。如Caro,E.等以本体聚合法制备了土霉素(OTC)好印迹聚激并将其作为固相萃取 材料成功萃取了动物组织的四环素l^fc^素(Caro， E.; Marc6， R. M.; CormacK P. A G; Sherrington^ D. C.; Borrull, F. Synthesis and application of an oxytetracycline imprinted polymer for the solid-phaseextraction of tetracycline antibiotics. Anal. Chim. Acta 2005,552， 81 -86 )。Mffli (monolithic column)是吸取了无孔i辩斗和膜的'^I分离能力及HPLC多孔i真料的高容量，又没有增加柱阻力这几方面的优点而^^来的一种新型高效液相色谱填料，而分子印迹，柱(Molecular Imprinting Monolithic Column)兼具分子印迹与，柱的优点，具有高效、'决速、专一的特点，IB 可以满足复杂样品前处理的要求。目前，还没有以四环素離生素为微肝制^T印迹Mtt的相^t。
技术实现思路
1本专利技术的目的，决大多数四环素，生素残留的常规检测方法往往无法从复 杂样品中准确樹则到;(i4抗生素残留，直親致ELISA等鹏检测方法出现假阳性高、而HPLC 和GC等色谱法出J赚时长(3天以上)的问题，麟一种四环素肝印迹聚溯^4的制备方 法，该法步骤简单，可得到避免繁琐研磨过程、針识别性能好的印迹聚激，直接作为新型液 相色谱iftf斗可用于离线^线固相,前处理，从而达到去除复杂样品中的杂质、选择性富集痕 量四环素皿生素残留的目的。本专利技术提供的四环素分子印迹，柱的制备方法，包括以下歩骤第一、将四环素超声溶解于极性溶剂中，然后加入功能单体、致 L剂混合、超声，静置作用 4-6小时形成复她第二、向上步形成的复合物中加入交联剂、引发剂，超声脱气，时间为5-10min;通氮气,， 时间为20min;将混合液S!A不Wltt^f后热引发聚合反应；第三、将上步合成的好印迹鄉柱接到高压输顿上，清洗除去致 L剂和模板舒，得到 四环素M印^^ffi;其中，第一步所述的极性貌!J为甲醇；功能单体为甲基丙烯酸；致孔剂为环己醇和十二醇混合液； 第二歩m的交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯；引发剂为偶氮二异丁腈；所述的热引发^f牛 为6CTC7K浴中反应12小时。戶腿的f嫩肝、功能单体、交联剂的物质的质量比为1:8:35、 1:8:40、 1:8:45、 1:8:50、或1:8:60 ; 环己醇和十二醇的质量比分别为11:0、 7:4、 6:5、 5:6、 4:7、 2:9、或O:ll 。甲醇用量为可溶解皿^T的最小用量，致 L剂总用量为功能单体、交联剂总体积的2倍， 引发剂用量为、混合液总质量的1%第二歩中所逸的不自柱，柱长为10cm。第三步臓的清洗液为甲醇、或術只比为94: 6的乙腈/乙酸溶液。 本专利技术的储和积极舰本专利技术制备的四环素針印Mffi与传统本條合得到的聚^tf相比，具有如下的优点-1、 制备过程简单易行，不,柱中合g需研磨即可作为色谱固定相；2、 得到的,固定相有大孔结构可以保证快的传质速W1较低的背压；3、 肝鄉胜能好。/A^ffl价值考虑，本专利技术所,的四环素^印迹整^i作为一种液相色谱壤抖，可实SM四环素 生素的分离、富集和纯化，克服目前M色谱检测方J^质干,重的缺点。附图说明1图1-5为不同交联剂用量的M印迹^Mi SEM图。具体实船式实例1.首先将微肝四环素TC O.lmmol超声溶縱20mmo1甲醇中，力口M孔剂(环己醇UOg) 功能单体MAA 0.8mmo1，使之相互作用6h以形成复合物，再加入交联剂EDMA 4mmo1 (TC:MAA:EDMA=1:8:40)、弓l发剂AIBN 20mg，溶液^il^声脱气5-10min，通氮气,20min^然 后将此混合液a!A到10cm不糊柱中，热引发60'C水浴反应12h。将制得的針印迹Slttm到 高压输^h分别用甲醇、乙腈/乙酸(94:6， v/v)溶液清洗除去致孔剂和丰嫩針得到聚合物1 (證l)。实例2.加A^孔剂(十二醇1.10g)，其他同实例l 实例3.加Ag[孔剂(环己醇(X20g和十二醇0.90g) 实例4.力口AE孔剂(环己醇0.40g和十二醇0.70g) 实例5.加Ag[ L剂(环己醇0.50§和十二醇0.60§) 实例6.加Ag[孔剂(环己醇0.608和十二醇0.5(^) 实例7，本文档来自技高网...

【技术保护点】
四环素分子印迹整体柱的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：第一、将四环素超声溶解于极性溶剂中，然后加入功能单体、致孔剂混合、超声，静置作用４－６小时形成复合物；第二、向上步形成的复合物中加入交联剂、引发剂，超声脱气，时间为５－１０ｍｉｎ；通氮气除氧，时间为２０ｍｉｎ；将混合液注入不锈钢柱封好后热引发聚合反应；第三、将上步合成的分子印迹整体柱接到高压输液泵上，清洗除去致孔剂和模板分子，得到四环素分子印迹整体柱；其中，第一步所述的极性溶剂为甲醇；功能单体为甲基丙烯酸；致孔剂为环己醇和十二醇混合液；第二步所述的交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯；引发剂为偶氮二异丁腈；所述的热引发条件为６０℃水浴中反应１２小时。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈朗星，孙祥丽，何锡文，李文友，张玉奎，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]