一种高粱籽粒糯性快速检测方法及其应用技术

本发明专利技术涉及作物籽粒的糯性鉴定，具体涉及一种高粱籽粒糯性快速检测方法及其应用。所述方法包括如下步骤：将细胞培养板放在坚固的水平台面上，每孔放一粒高粱种子样品，用微型杵在孔中将种子捣碎；向装有捣碎样品的孔中加入90‑100℃的水，每孔0.3ml‑0.5ml；待孔中的液体冷却至室温后，每孔加入一滴碘染色液；若染成兰黑色，则样品为非糯性高粱；若染成棕红色、橙色或者浅黄色，则样品为糯性高粱。该方法无需对种子进行脱皮处理，无需借助粉碎仪、水浴锅或烘箱，即可快速、准确区分糯性和非糯性高粱籽粒。

【技术实现步骤摘要】
一种高粱籽粒糯性快速检测方法及其应用
本专利技术涉及作物籽粒的糯性鉴定，具体涉及一种高粱籽粒糯性快速检测方法及其应用。
技术介绍
高粱是酿造高档白酒不可或缺的原料。高粱籽粒有糯性和非糯性之分。我国传统名酒如茅台、五粮液等，均以糯高粱为主要原料。随着人们生活水平的提高，对酿酒糯高粱的需求越来越大。通过目测胚乳断面可区分糯性和非糯性高粱，但这种方法往往会因遗传背景、籽粒成熟度、环境或者操作者经验的不同而导致判别上的差异(Pedersenetal,2004)。一般谷物糯和非糯很容易通过碘染色的方法进行区分(Nakamuraetal.,1995；Neufferetal,1997)，因为直链淀粉的存在，非糯籽粒通常染色后呈深兰色，而糯性籽粒通常染成棕红色到紫色。但在高粱中，由于胚乳角质化导致碘束缚力减弱，利用碘染色的方法，区分糯性和非糯性的效果不是很好(CagampangandKirleis,1985)。然而，高粱淀粉可通过糊化，使之更易于碘染色，研究表明高粱糊化温度为74-82℃。曾有报道用结晶碘、碘化钾定性法进行高粱籽粒的糯性鉴定：首先配制结晶碘与碘化钾溶液，分别取1克结晶碘，4.4克碘化钾，加少量水溶解后，加水稀释到10毫升，放棕色瓶内备用。然后将高粱分样后，磨成粉，取高粱粉4克，加入蒸馏水10毫升，一起倒入三角烧瓶内(用50毫升三角瓶)，在水浴锅内加热20分钟至沸腾，冷却后过滤，取该溶液20～30毫升置于另一个三角瓶中，并加入3-4滴结晶碘与碘化钾溶液，呈淡兰色即为粳性高粱，乳白色仍为糯性高粱。上述方法明显存在着时间长(至少1小时以上)、步骤繁琐、过分依赖设备(粉碎仪、水浴锅)，导致鉴定成本高，不适宜高粱购销企业以及条件比较有限的科研单位对高粱糯性的快速鉴定。因此，有必要开发一种快速、简便的高粱糯性检测方法。
技术实现思路
为了简化高粱糯性检测步骤、缩短糯性测试时间，本专利技术提供一种高粱籽粒糯性检测方法，无需对种子进行脱皮处理，无需借助粉碎仪、水浴锅或烘箱，即可快速、准确区分糯性和非糯性高粱籽粒。本专利技术提供一种高粱籽粒糯性快速检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将细胞培养板放在坚固的水平台面上，每孔放一粒高粱种子样品，用微型杵在孔中将种子捣碎；(2)向装有捣碎样品的孔中加入90-100℃的水，每孔0.3ml-0.5ml；(3)待孔中的液体冷却至室温后，每孔加入一滴碘染色液；若染成兰黑色，则样品为非糯性高粱；若染成棕红色、橙色或者浅黄色，则样品为糯性高粱。优选地，所述步骤(2)中，向装有捣碎样品的孔中加入90-100℃的蒸馏水。优选地，所述碘染色液的配方为：10-12g碘化钾，1-1.2g碘，溶于500ml蒸馏水中。优选地，所述碘染色液的配方为：10g碘化钾，1g碘，溶于500ml蒸馏水中。优选地，所述步骤(3)中，每孔加入45-55μL碘染色液。优选地，所述微型杵包括手柄以及固定在手柄上的研杵；所述研杵固定在手柄上的一端为连接端，另一端为研磨端；所述研磨端的端面平整，且研磨端的直径小于细胞培养板的孔径。优选地，所述研杵的研磨端的直径为11-13mm；所述细胞培养板的孔底为平底，孔径为13-16mm。优选地，所述手柄为木质手柄，长100-120mm，直径20-24mm；所述研杵为钢杵，长40-60mm，直径11-13mm。优选地，所述细胞培养板为透明平底的24孔细胞培养板。任一所述的方法在鉴别高粱籽粒糯性和非糯性中的应用也属于本专利技术的保护范围。本专利技术利用新研制的微型杵替代种子破碎仪，将高粱籽粒捣碎，再加入开水，使捣碎籽粒中的淀粉快速糊化，放置5-10分钟后即可冷却至室温，然后用碘染色液染色，将细胞培养板放在白纸上观察，染成兰黑色的样品为非糯性高粱，染成非蓝色(棕红色、橙色或者浅黄色)的样品为糯性高粱。该方法操作简便，无需对种子进行脱壳处理，不依赖设备，只需要微型杵、细胞培养板、开水和碘染色液，即可随时随地完成高粱糯性鉴定。此外，本专利技术用开水直接处理捣碎的高粱种子，替代传统的水浴锅糊化或烘箱糊化，使糊化处理时间缩短到5-10分钟，并且鉴定结果准确可靠，重复性好。该方法简称为“热水糊化染色法”。为便于高粱种植大户、高粱爱好者、高粱购销企业、酒厂和有关科研单位等用户使用本专利技术的方法，减少购置的麻烦，专利技术人通过查询各种相关工具的技术参数，选择配备了快速检验所需试剂以及相应的工具，组配成了一套完整的试剂工具盒，包括：碘液滴瓶(自带滴管)、玻璃滴管(加开水用)、微型钢杵(自主研发的工具)、24孔平底细胞培养板(耐高温)。在优选实施例中，本专利技术提供的试剂工具盒还包括使用说明书，该说明书详细记载了本专利技术的高粱籽粒糯性快速检测方法。本文所使用的术语“杵”、“微型杵”或“研杵”，是指棒状、杆状或类似形状的用于研磨或捣碎物品的工具，由坚硬的材料(例如，不锈钢)制成，可以具有均匀的直径(例如，圆柱结构)，也可以从一端到另一端具有变化的直径。本文所使用的“钢杵”是指使用钢(例如，不锈钢)制成的杵。本文所使用的术语“滴管”或“玻璃滴管”由橡皮乳头和尖嘴玻璃管构成，用于吸取或加少量试剂。本文所使用的术语“滴瓶”用于存放少量液体，瓶盖部分用滴管取代，需要避光保存时用棕色瓶。“碘液滴瓶”表示存放碘液的滴瓶。本文所使用的术语“细胞培养板”，是具有多个小孔的培养板，主要用来做细胞培养，也可以用来做其他分析，例如测蛋白浓度。细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底(U型和V型)；培养孔的孔数有6、12、24、48、96孔等；根据材质的不同有Terasaki板和普通细胞培养板。本专利技术要求培养板应为平底型、材质应坚固。除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属领域普通技术人员通常理解的含义相同的含义。附图说明图1.本专利技术的一个示范性实施例中的微型杵的示意图。图2.本专利技术的另一个示范性实施例中的微型杵的示意图。图3.本专利技术的示范性实施例中的高粱籽粒糯性快速检测试剂工具盒的示意图。图4.采用本专利技术的方法进行高粱籽粒糯性快速检测的结果；其中，A为捣碎种子，未加入开水和碘染色液；B为开水糊化后的碘染色结果；A和B中，左边两列为糯高粱(品种为“红缨子”)，右边两列为粳高粱(品种为“RTX430”)。附图标记：1-微型杵，2-细胞培养板，3-玻璃滴管，4-碘液滴瓶，5-手柄，6-研杵，7-外盒。具体实施方式下面结合实施例进一步阐述本专利技术，需要理解的是，下述实施例仅作为解释和说明，不以任何方式限制本专利技术的范围。实验材料糯高粱种子：“红缨子”，该品种为已知高粱品种，记载在非专利文献“李祥栋、张明生、王洋等，江苏农业科学，2014，42(5)：39-42”中。粳高粱种子：“RTX430”，该品种为已知高粱品种，记载在非专利文献“Pedersen等，RapidIodineStainingTech本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高粱籽粒糯性快速检测方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)将细胞培养板放在坚固的水平台面上，每孔放一粒高粱种子样品，用微型杵在孔中将种子捣碎；/n(2)向装有捣碎样品的孔中加入90-100℃的水，每孔0.3ml-0.5ml；/n(3)待孔中的液体冷却至室温后，每孔加入一滴碘染色液；若染成兰黑色，则样品为非糯性高粱；若染成棕红色、橙色或者浅黄色，则样品为糯性高粱。/n

【技术特征摘要】
1.一种高粱籽粒糯性快速检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将细胞培养板放在坚固的水平台面上，每孔放一粒高粱种子样品，用微型杵在孔中将种子捣碎；
(2)向装有捣碎样品的孔中加入90-100℃的水，每孔0.3ml-0.5ml；
(3)待孔中的液体冷却至室温后，每孔加入一滴碘染色液；若染成兰黑色，则样品为非糯性高粱；若染成棕红色、橙色或者浅黄色，则样品为糯性高粱。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，向装有捣碎样品的孔中加入90-100℃的蒸馏水。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述碘染色液的配方为：10-12g碘化钾，1-1.2g碘，溶于500ml蒸馏水中。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述碘染色液的配方为：10g碘化钾，1g碘，溶于500ml蒸馏水中。


5.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：李桂英，韩粉霞，王智，顿宝庆，朱莉，孟凡华，游光霞，
申请(专利权)人：中国农业科学院作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11