一种半日花烷型二萜类化合物及其分离方法和应用技术

本发明专利技术属于植物化学技术领域，公开了一种半日花烷型二萜类化合物及其分离方法和应用。本发明专利技术从裸花紫珠叶子中提取分离出新骨架半日花烷型二萜类化合物A1和A2，两者为一对差向异构体，为首次发现此类碳骨架结构。药物活性实验表明本发明专利技术化合物具有明显的抗炎活性，说明其在制备预防或治疗炎症药物方面具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种半日花烷型二萜类化合物及其分离方法和应用
本专利技术属于植物化学
，具体涉及一种半日花烷型二萜类化合物及其分离方法和应用。
技术介绍
裸花紫珠(CallicarpanudifloraHook.etArn.)又名赶风柴、节节红，是马鞭草科(Verbenacase)紫珠属(Callicarpa)植物，为海南省道地药材，也是黎族地区常用药材之一。其地上部位均可入药，有消炎解毒，散瘀消肿，抗菌止血等功效，主治化脓性炎症、创伤性出血、消化道和呼吸道感染、烧烫伤等症。临床辅助用于皮肤科、妇科、五官科、外科等各类术后出血型疾病。现已被2015年版《中国药典》新增中药品种收录。裸花紫珠的化学成分研究报道主要为黄酮(苷)类、苯丙素(苷)类、二萜、三萜、环烯醚萜类、酚酸类等多种类的化合物，且都具有较好的生物活性。部分半日花烷型二萜类化合物具有抗炎作用，但效果欠佳。裸花紫珠中含有大量具有生活活性的化合物，本专利技术旨在对裸花紫珠化学成分进一步分离研究，以期得到新结构的具有显著抗炎作用的半日花烷型二萜类化合物，充分发挥裸花紫珠的药用价值。
技术实现思路
鉴于现有技术的不足，本专利技术提供一种新结构的高度修饰半日花烷型二萜类化合物，具有显著的抗炎作用，并提供目标化合物的分离方法。本专利技术技术方案如下：本专利技术提供一种高度修饰半日花烷型二萜类化合物，A环经过裂环、降碳、C2-C18环合而成，分别为化合物A1和A2，其结构分别为：本专利技术还提供了化合物A1和A2的分离方法，包括以下步骤：(1)将干燥裸花紫珠叶子粉碎，将裸花紫珠粉末使用乙醇溶液加热50～60℃提取，得到提取液，减压浓缩得粗提物；(2)将粗提物用水稀释制成悬浮液后，用二氯甲烷萃取，合并有机相，减压浓缩得浸膏；(3)取步骤(2)二氯甲烷萃取得到的浸膏，先经硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度为(30:1)～(1:1)，根据极性大小共得到5个组分，即Fr.1～Fr.5；(4)将Fr.3先经正相硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度为(20:1)～(1:1)，减压浓缩后再经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为MeOH，洗脱3～6个柱体积，减压浓缩后再经高效液相色谱HPLC制备，依次得到化合物A1和A2。优选的，步骤(1)中，所述提取次数为2次以上，每次提取1～3h，合并提取液；步骤(2)中，用二氯甲烷萃取3次以上。优选的，步骤(1)中，所述乙醇溶液的体积分数75～95％，其用量为每千克裸花紫珠粉末用2～3L乙醇溶液。优选的，步骤(2)中，水的用量为每100克粗提物加水300～400mL，每次萃取的有机溶剂的体积用量是水体积的1.2-1.3倍。优选的，步骤(3)中，石油醚-乙酸乙酯混合溶剂的洗脱梯度为30:1、20:1、10:1、5:1、1:1，每个梯度收集三个柱体积，每个梯度得到一个组分，共得到5个组分，即Fr.1～Fr.5。优选的，步骤(4)中，石油醚-乙酸乙酯混合溶剂的洗脱梯度为20:1、10:1、5:1、1:1，每个梯度洗脱2～5个柱体积；高效液相色谱的条件为：色谱柱WatersC18，流速为2mL/min，流动相为体积比60:40的MeCN:H2O。优选的，裸花紫珠采集于海南五指山。本专利技术还通过药理活性实验，确认所得化合物A1和A2具有良好的抗炎效果，提示化合物A1和A2在制备预防或治疗炎症的药物中具有良好的应用前景。所述炎症为系统性炎症反应综合症、支气管炎、肺炎、胃炎、肠炎或肝炎。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术从裸花紫珠叶子中提取分离出新骨架半日花烷型二萜类化合物A1和A2，两者为一对差向异构体，为首次发现此类碳骨架结构。药物活性实验表明本专利技术化合物具有明显的抗炎活性，说明其在制备预防或治疗炎症药物方面具有良好的应用前景。具体地，本专利技术通过溶剂浸提、蒸馏水溶解分散、极性溶剂萃取、溶剂梯度洗脱和液相色谱分离等多级分离提取方法，从裸花紫珠浸膏中得到经过开环、降碳、C2-C18环合特征的新骨架半日花烷型二萜类化合物。附图说明图1：本专利技术化合物A1的1H-NMR谱(MeOD-d4)；图2：本专利技术化合物A1的13C-NMR谱(MeOD-d4)；图3：本专利技术化合物A1的DEPT(135°)谱(MeOD-d4)；图4：本专利技术化合物A1的1H-1HCOSY谱(MeOD-d4)；图5：本专利技术化合物A1的HSQC谱(MeOD-d4)；图6：本专利技术化合物A1的HMBC谱(MeOD-d4)；图7：本专利技术化合物A1的NOESY谱(MeOD-d4)；图8：本专利技术化合物A1的HRESIMS谱；图9：本专利技术化合物A2的1H-NMR谱(MeOD-d4)；图10：本专利技术化合物A2的13C-NMR谱(MeOD-d4)；图11：本专利技术化合物A2的DEPT(135°)谱(MeOD-d4)；图12：本专利技术化合物A2的1H-1HCOSY谱(MeOD-d4)；图13：本专利技术化合物A2的HSQC谱(MeOD-d4)；图14：本专利技术化合物A2的HMBC谱(MeOD-d4)；图15：本专利技术化合物A2的NOESY谱(MeOD-d4)；图16：本专利技术化合物A2的HRESIMS谱。具体实施方式为了更好理解本专利技术
技术实现思路
，下面提供具体实施例，对本专利技术做进一步的说明。本专利技术实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。本专利技术实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。本专利技术实验材料裸花紫珠采集于海南五指山，所用部位为叶子。实施例1高度修饰半日花烷型二萜类化合物的制备包括以下步骤：(1)将干燥裸花紫珠叶子粉碎，取1500g裸花紫珠粉末，按每千克裸花紫珠粉末用2L乙醇溶液(体积分数75％)加热50～60℃提取3次，每次提取3h，合并提取液，减压浓缩得粗提物(约300g)；(2)取每100克粗提物加蒸馏水300mL稀释制成悬浮液后，用二氯甲烷萃取4次，合并有机相，减压浓缩得浸膏；每次萃取的有机溶剂的体积用量是水体积的1.2倍。(3)取步骤(2)二氯甲烷萃取得到的浸膏(约55g)，先经硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度为30:1、20:1、10:1、5:1、1:1，每个梯度收集3个柱体积，每个梯度得到一个组分，共得到5个组分，5个组分依次为Fr.1～Fr.5。(4)将Fr.3先经正相硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度为20:1、10:1、5:1、1:1，每个梯度洗脱2个柱体积，产物减压浓缩后再经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为MeOH，洗脱3个柱体积，减压浓缩后再经高效液相色谱HPLC制备本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种半日花烷型二萜类化合物，其特征在于，所述化合物的结构式如式A1、A2所示：/n

【技术特征摘要】
1.一种半日花烷型二萜类化合物，其特征在于，所述化合物的结构式如式A1、A2所示：





2.权利要求1所述半日花烷型二萜类化合物的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将干燥裸花紫珠叶子粉碎，将裸花紫珠粉末使用乙醇溶液加热50～60℃提取，得到提取液，减压浓缩得粗提物；
(2)将步骤(1)的粗提物用水稀释制成悬浮液后，用二氯甲烷萃取，合并有机相，减压浓缩得浸膏；
(3)取步骤(2)二氯甲烷萃取得到的浸膏，先经硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度为(30:1)～(1:1)，根据极性大小共得到5个组分，即Fr.1～Fr.5；
(4)将Fr.3先经正相硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度为(20:1)～(1:1)，减压浓缩后再经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为MeOH，洗脱3～6个柱体积，减压浓缩后再经高效液相色谱HPLC制备，依次得到化合物A1和A2。


3.根据权利要求2所述的半日花烷型二萜类化合物的分离方法，其特征在于，步骤(1)中，所述提取次数为2次以上，每次提取1～3h，合并提取液；步骤(2)中，用二氯甲烷萃取3次以上。


4.根据权利要求2所述的半日花烷型二萜类化合物的分离方法，其特征在于，步骤(1)中，所述乙醇溶液的体积分数75...

【专利技术属性】
技术研发人员：余章昕，刘洋洋，陈光英，王灿红，陈德力，宋小平，李小宝，
申请(专利权)人：海南师范大学，中国医学科学院药用植物研究所海南分所，
类型：发明
国别省市：海南;46