风雨兰组织培养的方法技术

本发明专利技术属于组织培养技术领域，是以风雨兰种球为外植体，对消毒方式、不同激素配比等因素对其组培繁殖的影响因素进行了较深入和系统的研究，成功构建风雨兰无性繁殖体系，所述无性繁殖体系包括芽诱导培养基、增殖培养基、生根培养基；所述芽诱导培养基为MS+0.5～3.0mg/L 6‑BA+0.01～0.02mg/L IBA；所述增殖培养基为MS+1.0～2.0mg/L 6‑BA+0.01～0.02mg/L IBA，且6‑BA与IBA的用量比为100～200；所述生根培养基为1/2MS+0.01～0.05mg/L NAA或1/2MS+0.25～0.5mg/L IBA或1/2MS+0.05～0.2mg/L NAA+0.05～0.2mg/L IBA；在此无性繁殖体系上并形成了完整的风雨兰无性繁殖方法，为提供大量的风雨兰组培种苗提供技术基础。

【技术实现步骤摘要】
风雨兰组织培养的方法
本专利技术涉及组织培养
，更具体地，涉及风雨兰组织培养的方法。
技术介绍
风雨兰(ZephyranthesflavisissmaHerb.)为石蒜科韭兰属多年生草本球根花卉，喜阳但亦耐半阴，原产南美洲阿根廷ENTREIOS省及PAPANA河岸湿地。它不是固定在春、夏、秋、冬季节开花，而是在风雨来临之前的两三天，花儿才自然开放，故被人们称之为“风雨兰”，主要用于切花、盆花和园林景观配置。风雨兰具有抗污染、生命力较强的特点，可美化环境，净化空气。此种球根细小，株高20～30㎝，叶线形，秀丽，碧绿有光泽，有清香，6个花被片，直径约2㎝。适合盆栽、花坛、路边装饰及林下地被。园艺品种很多，根据花型可以分为侧开型和顶开型。侧开型风雨兰花较大，约8cm，花梗粗壮，花色以白色、白粉色为主。顶开型风雨兰花略小，充分绽放只有6cm大，但花色多，有白色、淡粉色、深粉色、淡黄色、深黄色。有的品种结实性好，花后一个月内种子可以成熟。种子半月形，薄片状，黑色有光泽。采用播种法当年就可以得到很多小球根，连续栽培3年才可开花。常于春季分株繁殖，球根产生子球的能力较强，一个母球平均每年能产生4～5个子球，扩繁相对容易。但近年来一些特色稀少品种，均是从泰国引种过来，价格昂贵，数量极少，难于满足市场对其量的需求。通过田间分株繁殖种球，增殖速度较慢，通过对稀缺品种进行组织培养快繁技术的研究，可以有效解决这一问题。由于球根花卉的种球体积较大，不耐贮藏，在种质保存上大多采用原地保存，对人力以及保存条件要求较严格，并且很多品种无法自主产生种子，所以无法进行有性繁殖，多为营养繁殖，这在种质创新上受到一定的局限。迄今国内外未见风雨兰组织培养研究方面的报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术缺乏风雨兰组织培养方面的研究，首先提供一种风雨兰的组培培养基。本专利技术的第二个目的是提供一种用于风雨兰无性繁殖的外植体消毒方法。本专利技术的第三个目的是提供一种用于风雨兰无性繁殖方法。本专利技术的目的通过以下技术方案予以实现：一种风雨兰的组培培养基，包括芽诱导培养基、增殖培养基、生根培养基；所述芽诱导培养基为MS+0.5～3.0mg/L6-BA+0.01～0.02mg/LIBA；所述增殖培养基为MS+1.0～2.0mg/L6-BA+0.01～0.02mg/LIBA，且6-BA与IBA的用量比为100～200；所述生根培养基为1/2MS+0.01～0.05mg/LNAA或1/2MS+0.25～0.5mg/LIBA或1/2MS+0.05～0.2mg/LNAA+0.05～0.2mg/LIBA。优选的，所述芽诱导培养基为MS+1.0～1.5mg/L6-BA+0.01mg/LIBA；在此芽诱导培养基中，诱导的出芽率高，能够诱导快速出芽，且长势好；所述增殖培养基为MS+1.0～1.5mg/L6-BA+0.01mg/LIBA；在此增殖培养基增殖系数大，芽体生长健壮，叶片翠绿且无叶片干枯现象；所述生根培养基为1/2MS+0.2mg/LNAA+0.05mg/LIBA，在此生根培养基中比较容易诱导生根，组培苗的根系粗壮，叶片茂盛且翠绿。优选的，以上诱导、增殖和生根培养基内均添加白糖30g·L-1，卡拉胶6.5g·L-1，并调整培养基的pH值为5.8。本专利技术还提供一种用于风雨兰无性繁殖的外植体消毒方法，是将风雨兰外植体先后置于0.1％多菌灵浸泡1min、75％酒精浸泡0.5min、0.1％升汞消毒8min。本专利技术还提供一种风雨兰的无性繁殖方法，包括以下步骤：(1)以风雨兰种球作为外植体，将风雨兰外植体先后置于0.1％多菌灵浸泡1min、75％酒精浸泡0.5min、0.1％升汞消毒8min；(2)将经消毒后的外植体置于芽诱导培养基中进行诱导生芽，所述芽诱导培养基为MS+0.5～3.0mg/L6-BA+0.01～0.02mg/LIBA；(3)将诱导出的芽置于增殖培养基上进行增殖培养，所述增殖培养基为MS+1.0～2.0mg/L6-BA+0.01～0.02mg/LIBA，且6-BA与IBA的用量比为100～200；(4)将增殖后的芽置于生根培养基上进行生根培养，所述生根培养基为1/2MS+0.01～0.05mg/LNAA或1/2MS+0.25～0.5mg/LIBA或1/2MS+0.05～0.2mg/LNAA+0.05～0.2mg/LIBA；(5)生根培养25～30天后进行驯化移栽；(6)定植。优选的，上述无性繁殖方法中，步骤(2)所述芽诱导培养基为MS+1.0mg/L6-BA+0.01mg/LIBA。优选的，上述无性繁殖方法中，步骤(3)所述增殖培养基为MS+1.5mg/L6-BA+0.01mg/LIBA。优选的，上述无性繁殖方法中，步骤(4)所述生根培养基为1/2MS+0.2mg/LNAA+0.05mg/LIBA。优选的，上述无性繁殖方法中，步骤(5)驯化移栽的操作为：将生根的植株置于大棚内炼苗一段时间后，冲洗培养基并消毒后，移栽于培养基质中进行育苗驯化，育苗期间常规管理。更优选的，步骤(5)所述培养基质由泥炭土、椰糠、珍珠岩按照等比例混合得到。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术以风雨兰种球为外植体，对消毒方式、不同激素配比等因素对其组培繁殖的影响因素进行了较深入和系统的研究，成功构建风雨兰无性繁殖体系，并形成了完整的风雨兰无性繁殖方法，为提供大量的风雨兰组培种苗提供技术基础。附图说明图1为风雨兰组织培养体系；其中图1a为风雨兰外植体的外观；图1b为外植体在诱导培养基上培养4周后的情况；图1c为芽在增殖培养基上培养12周(继代培养4次)后增殖的丛芽；图1d为壮苗培养4周后的植株；图1e为植株在生根培养基上培养4周后的生根苗；图1f为生根苗移栽图；图2为风雨兰定植过程；图2a为风雨兰驯化苗；图2b为驯化苗上盆栽；图2c为驯化苗定植于大田；图2d为风雨兰植株开花。具体实施方式下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本专利技术，但并不构成对本专利技术的限定。此外，下面所描述的本专利技术各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。实施例1预处理和消毒方式对风雨兰外植体成活率的影响供试材料品种为斯嘉丽(Scarleto'hara)。选取健康的风雨兰种球，剥除外层褐色皮膜，先用洗衣粉水清洗后，在流水下冲洗1～2h，将冲洗干净的鳞茎切去顶端。采用以下三种方法进行消毒：1)75％酒精浸泡30s后，再用2％次氯酸钙消毒5～20min；2)75％酒精浸泡30s后，再用0.1％升汞消毒5～10min；3)先用0.1％多菌灵浸泡1min，再用75％酒精浸泡30s后，最后用0.1％升汞消毒5～10min。分别采用上述三种方法消毒处理完后均采用无菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种风雨兰的组培培养基，其特征在于，包括芽诱导培养基、增殖培养基、生根培养基；所述芽诱导培养基为MS+0.5～3.0mg/L 6-BA+0.01～0.02mg/L IBA；所述增殖培养基为MS+1.0～2.0mg/L 6-BA+0.01～0.02mg/L IBA，且6-BA与IBA的用量比为100～200；所述生根培养基为1/2MS+0.01～0.05mg/L NAA或1/2MS+0.25～0.5mg/L IBA或1/2MS+0.05～0.2mg/L NAA+0.05～0.2mg/L IBA。/n

【技术特征摘要】
1.一种风雨兰的组培培养基，其特征在于，包括芽诱导培养基、增殖培养基、生根培养基；所述芽诱导培养基为MS+0.5～3.0mg/L6-BA+0.01～0.02mg/LIBA；所述增殖培养基为MS+1.0～2.0mg/L6-BA+0.01～0.02mg/LIBA，且6-BA与IBA的用量比为100～200；所述生根培养基为1/2MS+0.01～0.05mg/LNAA或1/2MS+0.25～0.5mg/LIBA或1/2MS+0.05～0.2mg/LNAA+0.05～0.2mg/LIBA。


2.根据权利要求1所述的风雨兰的组培培养基，其特征在于，所述芽诱导培养基为MS+1.0～1.5mg/L6-BA+0.01mg/LIBA；所述增殖培养基为MS+1.0～1.5mg/L6-BA+0.01mg/LIBA；所述生根培养基为1/2MS+0.2mg/LNAA+0.05mg/LIBA。


3.一种用于风雨兰无性繁殖的外植体消毒方法，其特征在于，将风雨兰外植体先后置于0.1％多菌灵浸泡1min、75％酒精浸泡0.5min、0.1％升汞消毒8min。


4.一种风雨兰的无性繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)以风雨兰种球作为外植体，将风雨兰外植体先后置于0.1％多菌灵浸泡1min、75％酒精浸泡0.5min、0.1％升汞消毒8min；
(2)将经消毒后的外植体置于芽诱导培养基中进行诱导生芽，所述芽诱导培养基为MS+0.5～3.0mg/L6-BA+0....

【专利技术属性】
技术研发人员：罗青文，谭嘉娜，官锦燕，罗剑飘，黄海英，陈顺，
申请(专利权)人：广州甘蔗糖业研究所湛江甘蔗研究中心，
类型：发明
国别省市：广东;44