用于产生结合配体的多聚体捕获试剂的方法技术

本发明专利技术涉及制备结合配体的多聚体捕获试剂的方法，所述捕获试剂包含至少第一和第二单体单元，所述第一单体单元还包含第一配体结合部分，第一反应基和连接部分，所述第二单体单元还包含第二配体结合部分，和第二反应基，其中对于每个单体单元反应基可以是相同或不同的，所述方法包括下列步骤：ａ）使第一单体单元与第二单体单元反应从而使在单体单元上存在的反应基反应以形成多聚体捕获试剂。ｂ）将第一单体单元通过连接部分固定在基底上，其中所述步骤ａ）可以在步骤ｂ）之前，同时或之后进行。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及在表面制造二聚体或更高级多聚体捕获试剂的新方法，通 过新方法产生的捕获试剂，和所述捕获试剂的阵列。
技术介绍
分子如肽的组合产生是公知的。该技术提供了有效的工具，能够产生 可以用在如高通量筛选技术中的分子的大型文库。这些技术的实例以及它们在鉴定目的分子的应用公幵在例如J. Org. Chem (有机化学杂志).,63, 8696， (1998)中，其中3-mers的1,000-肽文库在水中与丹酰'镊子'分子反应。 3%的文库与'镊子，结合。在J. Comb. Chem.(组合化学杂志)，5， 794, (2003) 中，描述了用于分裂和混合合成的三脚cyclotriveratrylene支架，并且描述 了具有~2,000个成员的文库。Nature Biotechnology (自然生物技术)，22， 568, (2004), Dario Neri等 描述了具有连接的DNA标记的有机分子粘合剂的两个文库。DNA互补性 用于制备更高级多样性的文库。使用三链体形成还建立了进一步的文库。 将24 mer寡聚物用于复合组装。通过对连接的DNA标记进行测序或通过 结合于寡核苷酸阵列完成了有机分子消巻积。对于蛋白质产生具有nM亲 和性的粘合剂。Bioconjugate Chem (生物缀合物化学).，12,346,(2001)，描述肽微阵 列和小分子微阵列的制备。该文献还公开了关于肽和玻片表面可以使用化 学选择性连接。在该技术中，N端半胱氨酰残基与在玻片表面上的a酮醛 反应以得到噻唑烷环。其它人使用了在游离硫羟基和马来酰亚胺之间的自 由基迈克尔加成。此外，Chem. Commun.(化学通信)，581， (2005)描述了在表面上通过光刻法合成建立环肽的复合文库的策略。将不同的保护策略用于将侧链组合添加到预先制备的核心上。为了获得有义文库所需要的必要的多样性，已知方法需要采取大量的 合成酶，因此增加了需要的时间，和产生所述文库所需的费用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供生产具有需要的多样性的分子的文库的快速廉 价的方法。根据本专利技术的第一个方面，提供用于制备结合配体的多聚体捕获试剂 的方法，所述捕获试剂包含至少第一和第二单体单元。所述第一单体单元还包含第一配体结合部分,第一反应基和连接部分， 所述第二单体单元还包含第二配体结合部分，和第二反应基， 其中反应基对于每个单体单元可以是相同或不同的，所述方法包括下列步骤；a) 使第一单体单元与第二单体单元反应从而使在单体单元上的反应基 反应以形成多聚体部分；和b) 在基底上通过连接部分固定第一单体单元，其中，步骤a)可以在步骤b)之前，同时或在其后进行。 优选地，将所述捕获试剂组装在基底上。在图i， 2和3中显示制备根据本专利技术的捕获试剂的可能的方法的图解表示，并且在实施例1中进行描述。在本专利技术的备选实施方案中，还提供制备用于结合配体的多聚体捕获试剂的方法，所述捕获试剂包含至少第一和第二单体单元，所述第一单体单元还包含第一配体结合部分，第一反应基和连接部分， 所述第二单体单元还包含第二配体结合部分，和第二反应基， 其中对于每个单体单元，反应基可以是相同或不同的， 所述方法包括下列步骤；a)使第一单体单元与第二单体单元反应从而使在单体单元上的反应基 反应以形成多聚体捕获试剂。优选地，该备选实施方案还包括将捕获试剂固定在基底上的步骤。 现在，还将进一步描述本专利技术。在下面的部分中，更详细地定义本专利技术的不同的实施方案。这样定义的每个实施方案可以与任何其它的一个或 多个实施方案组合，除非另外清楚地相反地指出。具体而言，可以将指出 的优选的或有利的任何特征与指出的优选的或有利的任何其它一个或多 个特征组合。在一个优选实施方案中，所述第一和第二单体单元是共价连接的。 要理解的是，连接部分可以包含用于将捕获试剂固定在基底上的任何 适合的方式。要理解的是，固定可以是，例如通过共价，离子，疏水，极 性，链霉抗生物素-生物素，抗生物素蛋白-生物素，或其它高亲和性非共 价相互作用进行的。优选地，连接部分包含用于将捕获试剂固定在基底上的共价或疏水方式。要理解的是，单体单元可以是任何适合类型的分子。优选地，单体单 元是核苷酸或氨基酸。更优选地,单体单元是多核苷酸或多肽。最优选地, 单体单元是多肽。所谓多核苷酸和多肽,分别指2个或更多核苷酸或氨基酸的链。 优选地,第一和第二单体单元是合成的。更优选地，第一和第二单体单 元在固相上合成并且可以是相同或不同的，甚至更优选地，单体单元在用 于根据第一方面的方法前从固相上裂解下来。对于本领域技术人员，多核苷酸和多肽的合成是公知的。 肽和它们的盐和衍生物的合成，包括固相和溶液相肽合成是充分建立 的。见，例如Stewart，等(1984) Solid Phase Peptide Synthesis (2nd Ed.)(固 相肽合成(第2版))；和Chan (2000) "FMOC Solid Phase Peptide Synthesis, A Practical Approach, (FMOC固相肽合成，实用方法)，，Oxford University Press (牛津大学出版社)。肽可以使用自动肽合成仪(例如，PioneerTM肽 合成仪，应用生物系统(AppliedBiosystems),福斯特城，加利福尼亚)进 行合成。例如，肽可以使用FMOC固相肽合成在Rink酰胺树脂上进行制 备并且随后进行三氟乙酸(95%)去保护并从树脂上裂解下来。容易理解的是当捕获试剂包含肽多聚体时，所述第一肽和第二肽可以 具有相同或不同的一级氨基酸序列。另外显而易见的是第一肽和第二肽可以从第一和第二氨基酸组进行合成并且每个氨基酸组可以是相同的或不同的。优选地，第一肽和第二肽为2-100个氨基酸长度，更优选地为2-50个 氨基酸长度，最优选地长度为5-25个氨基酸长度。优选地，形成配体结合部分的每个氨基酸选自基本由少于20个氨基 酸，更优选地少于12个氨基酸，甚至更优选地少于6个氨基酸和最优选 地4个氨基酸组成的组。要理解的是，在所述组中的每个氨基酸可以是L-氨基酸，D-氨基酸， 氨基酸模拟物，间隔氨基酸，3氨基酸或任何其他手性氨基酸单体。优选 地，所述氨基酸是L-氨基酸和/或D-氨基酸。优选地，在所述组中的每个氨基酸基本上是对映体纯的。优选地，用于本专利技术的方法中的第一肽和第二肽分别包含10个或更 少的配体结合残基，更优选地，8个或更少，更优选地，6个或更少，甚 至更优选地4或更少，和最优选地3个或更少的配体结合残基。在优选的实施方案中，反应基可以在肽合成的过程中被保护并且在用 于生产根据第一方面的捕获试剂前进行去保护。所述技术对于本领域技术 人员是公知的，例如标准基于FMOC的固相肽组装。在该技术中，产生具 有被保护的侧链和游离氨基末端的树脂结合肽。接着，N端氨基基团可以 与任何相容的羧酸反应基缀合物在标准的肽合成条件下反应。例如，可以 结合具有三苯甲基或甲氧基三苯甲基保护的硫羟基的半胱氨酸。用三氟乙 酸进行的去保护在溶液中产生未受保护的肽。优选地，用于本专利技术的任何实施方案的所述反应基选自，但不限于， 硫羟基，马来酰亚胺，环戊二烯，叠氮化物，膦硫酯(phos本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备结合配体的多聚体捕获试剂的方法，所述捕获试剂包含至少第一和第二单体单元，　所述第一单体单元还包含第一配体结合部分，第一反应基和连接部分，　所述第二单体单元还包含第二配体结合部分，和第二反应基，　其中所述反应基对于每个单体单元可以是相同或不同的，　所述方法包括下列步骤；　ａ）使所述第一单体单元与所述第二单体单元反应从而使在所述单体单元上存在的反应基反应以形成多聚体捕获试剂。　ｂ）通过连接部分将所述第一单体单元固定在基底上，　其中可以将步骤ａ）在步骤ｂ）之前，同时或之后进行。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：萨莉安德森，迈克尔A里夫，
申请(专利权)人：夏普株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]