N-11端截短的β-淀粉样蛋白的单克隆抗体、组合物、方法和用途技术

本发明专利技术的名称为Ｎ－１１端截短的β－淀粉样蛋白的单克隆抗体、组合物、方法和用途。本发明专利技术涉及的抗体包括特定的部分或变体，其特异性针对至少是人β－淀粉样蛋白的Ｎ－末端１１位点，例如Ａβ１１－ｘ多肽。还提供了制备和使用所述抗体的方法，包括治疗性药剂、给药和设备。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
N-ll端截短的P -淀粉样蛋白的单克隆抗体、 组合物、方法和用途本申请是以下申请的分案申请申请日2003年9月9日，申请号 为03823116.6 (国际申请号PCT/EP2003/010092)，标题为"N-ll端截 短的P-淀粉样蛋白的单克隆抗体、组合物、方法和用途"。本专利技术涉及的抗体包括特定的部分或变体，其特异性针对至少是人 P-淀粉样蛋白的N-末端11位点，例如APll-x多肽。还提供了制备 和使用所述抗体的方法，包括治疗性药剂、给药和设备。
技术介绍
总体而言，本专利技术涉及控制P-淀粉样前体蛋白发展的方法和组合 物。更特别的是，本专利技术涉及该方法和组合物在与阿耳茨海默症和其 它P-淀粉样蛋白相关疾病的治疗相关的诊断、预后和监控中的应用， 以及作为治疗阿耳茨海默症和其它P-淀粉样蛋白相关疾病的方法，所 公开的抗体在被动免疫中的应用。阿耳茨海默症(AD)是一种退化性大脑紊乱，其临床特征表现为 记忆、认知、推理、判断和情感稳定性持续逐渐丧失，导致深度的智 力衰退，最终死亡。AD是造成老年人持续智力减退(痴呆)的最常见 原因，在美国其被认为是四大最常见疾病死因的代表。AD在全世界的 人种和种族中都存在，是现今和未来的重要公众健康问题。仅在美国， 据估计这种疾病目前就影响了约二到三百万人。目前AD是无法治愈 的。已知现在没有有效的预防AD或消除其症状和病因的治疗手段。患有AD的病人的大脑表现出称之为老年(或淀粉样)斑块、淀粉 样血管病(在血管上的淀粉样沉积)和神经原纤维缠结的特征性损伤。 在患有AD的病人的大脑中对于记忆和认知重要的几个区域中普遍存 在大量的上述损伤，特别是淀粉样斑块和神经原纤维缠结。对未患有 临床AD的绝大多数老年人的大脑经更严格的解剖检查发现了少量上 述损伤。淀粉样斑块和淀粉样血管病也是患有21三体综合症(Down's 综合症)、弥漫性Lewy体病、伴有荷兰型淀粉样变性病(HCHWA-D)的遗传性脑出血的病人的大脑的特征。淀粉样斑块的主要成分是一类e-淀粉样前体蛋白(App)通过剪切产生的P-淀粉样蛋白(AP )多肽。过去存在着关于斑块和缠结是诱因或仅仅是阿耳茨海默症的结杲的激烈的科学争论，但最近的发现表明淀粉样斑块是成的前体和因素。特别是发现AP多肽的产生源自 编码淀粉样前体蛋白的基因的突变，该蛋白正常加工时不会产生AP 多肽。引起家族性、早发性的阿耳茨海默症淀粉样前体蛋白基因突变 的鉴定最有力地证明了淀粉样代谢是这些疾病发病过程中重要的变 化。目前已确信APP蛋白的加工(非致病)的正常过程是通过一种使 蛋白的AP多肽区的16和17氨基酸之间裂解的a-分泌酶的裂解而完 成的。进一步确信致病过程是通过使前体蛋白的AP多肽区的氨基端 裂解的p-分泌酶而部分完成的。目前已证明BACE-1是APP在+1位裂解所需的重要p-分泌酶。 BACE-1的过表达导致AP在+11位的额外的裂解，产生较短的AP 11-40和AP 11-42片段，此后也称之为AP ll-x多肽。已经在原代大 鼠神经元细胞培养物和小鼠N2a细胞的条件化培养基中检测到这些AP多肽，表明它们是神经元(3， 4， 5)中产生的正常的APP裂解产 物。值得注意的是，这些较短的AP片段通过生化分析(6)已经被证 明是AD大脑和正常老年大脑中的主要种类，通过免疫组织化学研究(7)也证明了在具有AD病理学特征的Down's综合症大脑中也是这 样。这些事实促使对A 0 11-40/42在阿耳茨海默症发病过程中的作用重 新评价，特别是考虑到由Glull开始的AP种类比由1位开始的 种类表现为更不溶的事实。除了 了解有关AD和其它A P相关疾病的机理之外，还需要研究诊 断和治疗这些疾病的方法和组合物。这样，监测淀粉样前体蛋白的细 胞加工的能力对于诊断、预后、治疗性监管阿耳茨海默症具有很大意 义。特别是希望能确定在容易获得的病人的样品，例如血清、脑脊髓 液(CSF )等中筛选和评估可检测的诊断标记的具有最小侵害性的可重 复性流程。多克隆抗体，例如Said, T. C. et al" Neuroscience Letters 215(1996);173-176中所述的那些，能用于检测生物样品中不同的AP 多肽，但是考虑到每批多克隆抗体是不同的这一事实，这些抗体不能 作为实施在容易获得的病人的样品中篩选和评估可检测的诊断标记的可重复性流程的工具。此外，使用多克隆抗体时非特异性结合特别高，在Western印迹中的准确性4艮低。已经设想了许多可能的阿耳茨海默症的诊断性标记。本专利技术特别感 兴趣的是APP蛋白经P-分泌酶裂解后得到的A P前体蛋白的较短的羧 基末端片段。这些标记可单独和/或与其它诊断标记和方法一起使用。 诊断性标记优选在例如CSF、血;^、血浆、血清、尿的体液和组织等 中可检测的，以便于使用最小侵害的诊断方法。用于APll-x检测的特别检测方法应能够在非常低浓度的液体样 品中以可重复的和分步骤的方式检测到A& ll-x，还能够区分样品中可 能存在的AP ll-x多肽和其它APP片段。这里更详细描述本专利技术的各个方面。专利技术概述本专利技术提供特异性识别较短的AP多肽的单克隆抗体，该较短的A P多肽是APP蛋白通过BACE-1在Glu-ll位剪切后得到的，例如A P多肽片段A P 11-40和A P 11-42，此后称之为A P 11-x多肽。还提供 产生单克隆抗体的杂交瘤细胞以及制备抗体和杂交瘤细胞的方法。以 及通过竟争方法对AP多肽的免疫测定法或者使用抗体的夹心方法。本专利技术特别提供单克隆抗体，其是使用JJ-分泌酶ll剪切位点的前 5-7个人类氨基酸，即EVHHQ-C (人A P —11(6 AA)画S叫Id No.:l)和 EVHHQKI-C (人AP—11(8 AA)-Seq Id No.:2 )或者使用卩-分泌酶—11 裂解位点的前5-7个小鼠氨基酸，即EVRHQ-C(小鼠A P —11(6 AA)-Seq Id No.:3 )和EVRHQKL-C (小鼠A 0 _11(8 AA)-Seq Id No,:4 )作为免 疫原制备的。所述抗体与AP 11-x多肽特异性反应，与其它APP片段 无交叉反应，其相应的被用于评价在阿耳茨海默症的发病过程中 11-x的作用的免疫检测中。在一个更特别的实施方案中，单克隆抗体与人AP—11(6 AA)免疫 原反应并由杂交瘤细胞J&JPRD/hA 0 11/1和J&JPRD/hA P 11/2表达， 它们于2002年8月19日保藏在比利时微生物保藏协会，各自的保藏 号为LMBP5896CB和LMBP5897CB。在进一步的实施方案中，本发 明提供表达本专利技术单克隆抗体的前述杂交瘤细胞。在本专利技术的另一个方面，本专利技术的抗体应用于检测AP ll-x多肽的 常规免疫学技术中，其中无论什么情况都包括用于监测j5-淀粉样蛋白 相关疾病的生物样品和来自用于监测APP细胞内加工的细胞培养物的 条件化培养基。适合的免疫学技术是所属领域技术人员熟知的，包括 例如ELISA、 Western印迹分析、竟争性或夹心免疫检测等。此外， 被熟知的是它们都依赖于抗原-抗体免疫复合物的形成，其检测目的在 于抗体被本文档来自技高网...

【技术保护点】
特异性识别Ａβ１１－ｘ多肽的单克隆抗体。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：MH默肯，MMPP范德梅伦，
申请(专利权)人：詹森药业有限公司，
类型：发明
国别省市：BE[比利时]