【技术实现步骤摘要】
基于普鲁士蓝纳米酶标记物的酶联免疫吸附实验的制备方法及应用
本专利技术涉及纳米科学、生物免疫技术、酶免疫测定技术等领域，具体涉及一种酶联免疫反应标记物的制备方法及免疫显色应用。
技术介绍
生物标志物检测是目前唯一无创的早期预警癌症等疾病的方法，在临床中对肿瘤的普查、诊断及判断预后等具有十分重要的意义。在众多的生物标志物检测方法中，酶联免疫技术由于其检测迅速，方法简单，特异性强和灵敏性高等优点而成为生物分子定量检测的主要分析技术。酶联免疫吸附试验是利用吸附在固相载体上的抗原或抗体与酶标记抗体发生特异性结合。向其中加入底物溶液后，底物会在酶的作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，发生颜色反应。因此，可以根据底物的颜色反应来判断有无对应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。这种显色反应可通过酶标仪进行定量测定，通过将抗原抗体反应的特异性和酶化学反应的敏感性相结合，使酶联免疫吸附试验成为一种既特异又灵敏的检测方法。鉴于此，专利技术一种具有催化性能的纳米酶作为标记物用于酶联免疫吸附...
【技术保护点】
1.基于普鲁士蓝纳米酶标记物的酶联免疫吸附实验的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n（1）四氧化三铁纳米粒子的制备：将0.2 g十二烷基硫酸钠、1.5 g醋酸钠和0.5 g三氯化铁加入到15 mL乙二醇中，在室温下搅拌30分钟；然后将该混合溶液转移到聚四氟乙烯高温反应釜中并在200 ℃下加热12小时；将所得产物用超纯水和乙醇分别洗涤三次；最终产物在35 ℃下真空干燥12小时；干燥后研磨并在室温保存；/n（2）四氧化三铁@聚多巴胺核壳复合材料的制备：将100 mg四氧化三铁纳米粒子和200mg多巴胺加入到120 mL、pH=8.8 Tris-HCl缓冲液和100 mL异丙...
【技术特征摘要】
1.基于普鲁士蓝纳米酶标记物的酶联免疫吸附实验的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）四氧化三铁纳米粒子的制备：将0.2g十二烷基硫酸钠、1.5g醋酸钠和0.5g三氯化铁加入到15mL乙二醇中，在室温下搅拌30分钟；然后将该混合溶液转移到聚四氟乙烯高温反应釜中并在200℃下加热12小时；将所得产物用超纯水和乙醇分别洗涤三次；最终产物在35℃下真空干燥12小时；干燥后研磨并在室温保存；
（2）四氧化三铁@聚多巴胺核壳复合材料的制备：将100mg四氧化三铁纳米粒子和200mg多巴胺加入到120mL、pH=8.8Tris-HCl缓冲液和100mL异丙醇混合溶液中；搅拌13小时后，得到黑色的悬浊液；通过磁分离收集产物，并将产物用超纯水洗涤五次以除去未反应的物质，然后在35℃真空中干燥；干燥后称重并重新分散在5mL超纯水中，放于4℃冰箱冷藏保存；
（3）取50μL四氧化三铁@聚多巴胺核壳复合材料分散液用5mL、0.1mol·L-1、pH7.4的磷酸盐缓冲溶液稀释，向其中加入2mL浓度为10μg·mL-1的降钙素原检测抗体溶液，在4℃下孵化2h，离心；再加入100μL、0.1%的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性结合位点，在4℃下孵化2h，离心分离得到固体产物，将其重新分散于5mL、0.1mol·L-1、pH7.4的磷酸盐缓冲溶液中，制得四氧化三铁@聚多巴胺核壳复合材料标记的降钙素原抗体溶液；
（4）将四氧化三铁@聚多巴胺核壳复合材料标记的降钙素原抗体溶液与0.1ng·mL-1的抗原以体积比为1:1混合，室温下孵化1h，离心分离，得到与抗原特异性结合的四氧化三铁@聚多巴胺核壳复合材料标记的降钙素原抗体溶液；
（5）向96微孔板中加入100μL、1μg·mL-1降钙素原的抗体溶液，在4℃下孵育12h，用磷酸盐缓冲液洗涤微孔板三次；再加入100μL、0.1%的牛血清白蛋白溶液封闭微孔板上的非特异性结合位点，室温下孵育1h，再用磷酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：马洪敏，李丽，邢振远，赵彦华，樊琪，范波波，胡璐琳，魏琴，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：山东;37
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