一种角膜羟脯氨酸检测方法技术

本发明专利技术提供一种角膜羟脯氨酸检测方法，包括如下步骤:步骤一、标准曲线的建立；步骤二、角膜的消解；步骤三、消解后角膜吸光度的测定；步骤四、角膜羟脯氨酸的确定。其中角膜消解的步骤为将经过干燥恒重处理的角膜先用酶消解，通过酶解将角膜大部分转变成氨基酸和多肽，再用稀释后的一定浓度的硫酸进行酸消解。本发明专利技术所采用的角膜消解方法可明显降低角膜中羟脯氨酸的损失，消解过程中角膜消解无碳化现象发生，无需过滤，可大幅度提升检测的准确性和可靠性。

【技术实现步骤摘要】
一种角膜羟脯氨酸检测方法
本专利技术涉及羟脯氨酸检测
，具体涉及一种角膜羟脯氨酸检测方法。
技术介绍
角膜病是最主要的致盲眼病之一。有关数据表明：“角膜盲人”占全部盲人总数的1/4，人数约为800万，在这些患者中，绝大多数是9岁以下的儿童以及40－69岁的青壮年人，而复明的唯一手段就是角膜移植手术。但是，由于眼角膜的捐献者太少，全国各大医院每年可以完成的角膜移植手术只有2000-3000例，绝大多数的失明者目前只能在黑暗中苦苦地等待，人工生物角膜对于那些处于黑暗之中的人们来说迫切需要的，人工生物角膜有着它特别大的优点，其生物相容性好，人体的神经，细胞可以长在里面，从而使其变成自己身体的一部分，而角膜中胶原蛋白含量是评价角膜生物相容性好坏的一项重要指标，角膜本身胶原蛋白含量极高，经过干燥恒重处理，使单位质量角膜中胶原蛋白含量更高，普通的酸消解和碱消解都不能使其完全水解，使测得的羟脯氨酸含量偏低。胶原蛋白含量一般采用间接法检测其羟脯氨酸含量来换算，所以建立一种快速，准确，经济的羟脯氨酸测定方法是非常重要的。羟脯氨酸的间接测定方法，主要本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种角膜羟脯氨酸检测方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤一、建立标准曲线：取不同浓度的羟脯氨酸标准溶液测定吸光度，以羟脯氨酸标准溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标建立标准曲线；/n步骤二、消解角膜：将角膜置于酶解液中，于水浴条件下酶解，向含角膜的酶解液中加入酸解液对角膜进行酸解，得到消解后角膜；/n步骤三、测定吸光度：将消解后角膜冷却稀释后进行吸光度测定，记录结果；/n步骤四、确定羟脯氨酸含量：将步骤三所得结果与步骤一所述标准曲线对比，得到角膜中羟脯氨酸的含量。/n

【技术特征摘要】
1.一种角膜羟脯氨酸检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、建立标准曲线：取不同浓度的羟脯氨酸标准溶液测定吸光度，以羟脯氨酸标准溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标建立标准曲线；
步骤二、消解角膜：将角膜置于酶解液中，于水浴条件下酶解，向含角膜的酶解液中加入酸解液对角膜进行酸解，得到消解后角膜；
步骤三、测定吸光度：将消解后角膜冷却稀释后进行吸光度测定，记录结果；
步骤四、确定羟脯氨酸含量：将步骤三所得结果与步骤一所述标准曲线对比，得到角膜中羟脯氨酸的含量。


2.根据权利要求1所述一种角膜羟脯氨酸检测方法，其特征在于，步骤二中所述酶解液中角膜含量为15g/L～25g/L。


3.根据权利要求2所述一种角膜羟脯氨酸检测方法，其特征在于，所述酶解液中角膜含量为20g/L。


4.根据权利要求1所述一种角膜羟脯氨酸检测方法，其特征在于，步骤二中所述酶解液包括蛋白酶K、氯化钙、三羟甲基氨基甲烷和水，所述酶解液中蛋白酶K的含...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈波，马金霞，樊杏利，张立娟，张勇杰，
申请(专利权)人：广东博与再生医学有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44