基于酪氨酸酶催化的细胞膜和细胞壁荧光标记方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种基于酪氨酸酶催化的细胞膜和细胞壁的荧光标记方法及其应用。该标记方法包括两种方案：(1)酪氨酸酶及带苯酚基团的荧光分子，(2)酪氨酸酶、生物素基酪酰胺和荧光染料接枝的亲和素。这两种方案都能通过共价反应将荧光分子连接至哺乳动物细胞膜上，从而实现细胞膜的荧光标记。此外，该荧光标记策略还能够实现对真菌细胞壁以及斑马鱼胚胎表皮细胞膜的荧光成像。相比已有的细胞膜或细胞壁的荧光标记策略，本发明专利技术公开的方法具有染色效果好、修饰效率高、操作简单和生物安全性好等优点。

【技术实现步骤摘要】
基于酪氨酸酶催化的细胞膜和细胞壁荧光标记方法及应用
本专利技术涉及一种基于酪氨酸酶催化的细胞膜和细胞壁的荧光标记方法及其应用，属于生物

技术介绍
利用荧光分子对细胞膜进行标记和示踪是揭示细胞膜各种微观结构和生理功能的基本研究手段。目前，常用的细胞膜修饰策略主要包括静电吸附法、疏水插膜法、代谢标记法以及共价接枝法，其中共价接枝法由于其修饰效率高、修饰稳定和操作简单等优点受到了广泛的关注。该技术利用细胞表面多种可反应的化学基团(如氨基和羧基)，在生理环境下将修饰分子通过共价连接的方式引入到细胞膜上。例如，带有琥珀酰亚胺酯的修饰分子能够在pH7.4的水溶液中与细胞膜蛋白上的氨基发生化学反应，从而实现细胞膜的荧光标记(ChengH,KastrupCJ,RamanathanR,SiegwartDJ,MaM,BogatyrevSR,XuQ,WhiteheadKA,LangerR,AndersonDG.Nanoparticulatecellularpatchesforcell-mediatedtumoritropicdelivery.ACSNano本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种种基于酪氨酸酶催化的细胞膜和细胞壁荧光标记方法，其特征在于，所述方法包括两种方案：(1)使用酪氨酸酶和含苯酚基团的荧光分子；(2)使用酪氨酸酶、生物素基酪酰胺和荧光染料接枝的亲和素。/n

【技术特征摘要】
1.一种种基于酪氨酸酶催化的细胞膜和细胞壁荧光标记方法，其特征在于，所述方法包括两种方案：(1)使用酪氨酸酶和含苯酚基团的荧光分子；(2)使用酪氨酸酶、生物素基酪酰胺和荧光染料接枝的亲和素。


2.根据权利要求1所述的荧光标记方法，其特征在于，所述酪氨酸酶为来源于菌菇的多酚氧化酶。


3.根据权利要求1所述的荧光标记方法，其特征在于，所述含苯酚基团的荧光分子包括Cy3-酪酰胺、Cy5-酪酰胺、Cy7-酪酰胺、AlexaFluor488-酪酰胺、AlexaFluor555-酪酰胺和AlexaFluor568-酪酰胺。


4.根据权利要求1所述的荧光标记方法，其特征在于，所述荧光染料接枝的亲和素包括异硫氰酸荧光素-亲和素和罗丹明-亲和素。


5.根据权利要求1所述的荧光标记方法，其特征在于，所述方案(1)包括以下步骤：
(1)取待标记生物样本，清洗2～3次，将酪氨酸酶和带有苯酚基团的荧光分子加入到样本...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴富根，贾浩然，祝雅璇，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32