抑制Mettl3基因表达的shRNA及其重组腺相关病毒与应用制造技术

本发明专利技术涉及一种抑制Mettl3基因表达的shRNA及其重组腺相关病毒与应用。本发明专利技术抑制Mettl3基因表达的shRNA的序列为：5’‑GCAGAGCAAGAAGGTCAGTCA‑3’。本发明专利技术通过将抑制Mettl3基因表达的shRNA构建于腺相关病毒表达载体上，再将重组表达载体与腺相关包装质粒、辅助质粒pHelper一起转染包装细胞，获得重组腺相关病毒AAV9‑shMettl3。本发明专利技术的组腺相关病毒AAV9‑shMettl3在体内及体外特异性抑制小鼠心肌细胞中Mettl3基因的表达。同时，本发明专利技术对于深入研究小鼠Mettl3基因的功能及其相关疾病的治疗均具有重要的科学意义及应用前景。

【技术实现步骤摘要】
抑制Mettl3基因表达的shRNA及其重组腺相关病毒与应用
本专利技术涉及分子生物学与生物医药
，特别涉及一种抑制Mettl3基因表达的shRNA及其重组腺相关病毒与应用。
技术介绍
RNA分子的化学修饰类型已经报道了150多种。然而，直到最近几年，学界才逐渐认识到RNA分子中腺嘌呤的第6位N原子发生甲基化修饰(N6-methyladenosine,m6A)是真核生物信使RNA(mRNA)上含量最多的化学修饰之一。m6A修饰广泛存在于大部分真核生物的mRNA中，如酵母、果蝇、植物及哺乳动物中，甚至在某些病毒的RNA中也发现存在m6A修饰，提示其广泛及重要的生物学功能。而Methyltransferaselike3(Mettl3)是第一个被鉴定为具有催化RNA分子中m6A修饰生成的甲基转移酶。Mettl3已被证明在众多生物学过程中都发挥着非常重要的生理学作用，比如参与生物钟的延长或缩短，维持干细胞多能性或分化，促进肿瘤的发生和发展进程以及对影响神经修复及病毒感染等。因此，对于Mettl3基因的功能研究已经逐渐成为生命科学领域的研究热点。<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抑制Mettl3基因表达的shRNA，其特征在于：所述的shRNA靶向Mettl3基因的序列为：5’-GCAGAGCAAGAAGGTCAGTCA-3’。/n

【技术特征摘要】
1.一种抑制Mettl3基因表达的shRNA，其特征在于：所述的shRNA靶向Mettl3基因的序列为：5’-GCAGAGCAAGAAGGTCAGTCA-3’。


2.根据权利要求1所述的抑制Mettl3基因表达的shRNA，其特征在于：所述的shRNA的DNA序列为：
正义链：
5’-GATCCGCAGAGCAAGAAGGTCAGTCAttcaagagaTGACTGACCTTCTTGCTCTGCTTTTTTG-3’；
反义链：
3’-GCGTCTCGTTCTTCCAGTCAGTaagttctctACTGACTGGAAGAACGAGACGAAAAAACTTAA-5’。


3.根据权利要求1所述的抑制Mettl3基因表达的shRNA，其特征在于：
所述的shRNA抑制小鼠Mettl3心肌细胞中基因的表达；
所述的心肌细胞为分裂及非分裂状态的心肌细胞。


4.权利要求1或2所述的抑制Mettl3基因表达的shRNA在抑制小鼠心肌细胞中Mettl3基因表达中的应用。


5.一种靶向抑制小鼠Mettl3基因的重组腺相关病毒，其特征在于：通过将权利要求1所述的shRNA采用腺相关病毒无辅助病毒系统AAVHelper-FreeSystem制备得到。


6.根据权利要求5所述的靶向抑制小鼠Mettl3基因的重组腺相关病毒，其特征在于：重组腺相关病毒制备的方法为：将shRNA构建于腺相关病毒AAV表达载体上，再将重组表达载体与腺相关包装质粒、辅助质粒pHelper一起转染包装细胞，获得重组腺相关病毒AAV9-shMettl3。


7.一种靶向抑制Mettl3基因的重组腺相关病毒的构建方法，包...

【专利技术属性】
技术研发人员：齐绪峰，陈佳璇，蔡冬青，江伏青，朴圭祥，赵晖，郑莉，冯珊珊，吴海燕，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东;44