抗PD-1抗体制造技术

本发明专利技术涉及抗PD‑1抗体和抗原结合片段，及这些抗体和抗原结合片段在癌症或传染病的治疗中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗PD-1抗体相关申请的交叉引用申请要求于2018年2月1日提交的国际序列号PCT/CN2018/074916的优先权权益，其公开内容通过引用整体合并于此。
本专利技术涉及通过对抗肿瘤介导的免疫抑制而改善的病症的治疗。更具体地，本专利技术涉及抗PD-1抗体，以及这些抗体在诸如癌症和传染病的疾病的治疗中的用途。
技术介绍
PD-1被公认为是免疫调节和外周耐受维持中的重要分子。PD-1在幼稚的T、B和NKT细胞上适度表达，并通过淋巴细胞、单核细胞和髓细胞上的T/B细胞受体信号传导上调(1)。PD-1的两个已知配体，PD-L1(B7-H1)和PD-L2(B7-DC)，在各种组织产生的人类癌症中表达。在例如卵巢癌、肾癌、结肠直肠癌、胰腺癌、肝癌和黑色素瘤的大样品集中，PD-L1的表达显示为与不良的预后和总体生存期降低相关，而与后续治疗无关(2-13)。类似地，在肿瘤浸润淋巴细胞上的PD-1表达发现标志着在乳腺癌和黑色素瘤中功能异常的T细胞(14-15)和与肾癌的不良预后相关(16)。因此，已经提出表达PD-L1的肿瘤细胞与表达PD-1的T细胞相互作用以减弱T细胞激活和逃避免疫监视，从而导致针对肿瘤的免疫反应受损。本领域需要拮抗PD-1活性的高效治疗性抗体，其可用于产生对肿瘤的强力免疫反应。
技术实现思路
本专利技术提供了抗PD-1抗体或其抗原结合片段，其包含具有或不具有CDRH2区中的S61N糖基化位点校正和/或G56A脱酰胺位点校正(顺序编号)的人源化08A亲和力成熟的Fab98、99、100、101、102、103或104的重链和/或轻链CDR区。本专利技术还提供了抗PD-1抗体或其抗原结合片段，其包含具有或不具有CDRH2区中的S61N糖基化位点校正和/或G56A脱酰胺位点校正的人源化08A亲和力成熟的Fab98、99、100、101、102、103或104的重链和/或轻链可变区。在另一方面，本专利技术提供了抗PD-1抗体或其抗原结合片段，其包含具有CDRH2区中的S61N糖基化位点校正和/或G56A脱酰胺位点校正的人源化08A的重链和/或轻链CDR区。在另一方面，本专利技术提供了抗PD-1抗体或其抗原结合片段，其包含具有CDRH2区的的S61N糖基化位点校正和/或G56A脱酰胺位点校正的人源化08A的重链和/或轻链可变区。在另外的方面，本专利技术还提供了抗PD-1抗体或其抗原结合片段，其包含具有或不具有CDRH2区中的S61N糖基化位点校正和/或G56A脱酰胺位点校正的人源化08A亲和力成熟的Fab128、133、138或139的重链和/或轻链CDR区。在另外的方面，本专利技术还提供了抗PD-1抗体或其抗原结合片段，其包含具有或不具有CDRH2区中的S61N糖基化位点校正和/或G56A脱酰胺位点校正的人源化08A亲和力成熟的Fab128、133、138或139的重链和/或轻链可变区。本专利技术还提供了分离的核酸，其编码本专利技术的任一种抗PD-1抗体或抗原结合片段。本专利技术还提供了包含这种核酸的表达载体(其中所述多肽可以任选地包含前导序列)。这些分离的核酸和包含它们的表达载体可以用于在重组宿主细胞中表达本专利技术的抗体或其抗原结合片段。因此，本专利技术还提供了包含这种分离的核酸的宿主细胞。附图说明图1：在工程化的Jurkat.hPD-1.IL2luc+THP-1.PD-L1分析中测试本专利技术的Fab和双特异性抗体。双特异性抗体和Fabs能够逆转通过PD1-PDL1相互作用产生的免疫抑制。当抗体/Fab与Jurkat细胞(PD1+ve)和THP1PDL1细胞(+LPS，IFNg，aCD3)孵育时，这作为IL2介导的荧光素酶水平的增加来测量。图2：混合淋巴细胞反应中由双特异性抗体诱导的IL-2(下图)和IFN-γ产生(上图)。图3：通过双特异性抗体导致的用PD-L1转染的JY细胞再刺激的CD4+T细胞克隆4-49的IFN-γ产生。图4：引入AzymetricTM突变后在90ASU或18ASS双特异性抗体的抗PD1臂中形成的CH1(灰色)和CL(白色)界面的3-D表示。在抗LAG3第二臂中引入了一组不同的突变以驱动正确配对的界面的选择性形成并避免重-轻链错配。图5：引入AzymetricTM突变(棒)后在90ASU或18ASS双特异性抗体的抗LAG3第二臂中形成的CH1(灰色)和CL(白色)界面的3-D表示。在抗PD-1第一臂中引入一组不同的突变以驱动正确配对的界面的选择性形成并避免重-轻链错配。图6：引入AzymetricTM突变(棒)后，在双特异性抗体(18ASS和90ASU)中通过重链1(灰色)和重链2(白色)形成的CH3异二聚体界面的3D表示。具体实施方式缩略词在整个本专利技术的详述和实施例中，将使用以下缩略词：ADCC抗体依赖性细胞毒性CDC补体依赖性细胞毒性CDR免疫球蛋白可变区中的互补决定区，使用Kabat编号系统定义CHO中国仓鼠卵巢ELISA酶联免疫吸附分析FR抗体框架区：排除CDR区的免疫球蛋白可变区IFN干扰素IC50导致50％抑制的浓度IgG免疫球蛋白GKabat由ElvinA.Kabat((1991)SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md.)开创的免疫球蛋白比对和编号系统mAb或Mab或MAb单克隆抗体V区不同抗体之间序列可变的IgG链的区段。其在轻链中延伸至Kabat残基109和在重链中延伸至Kabat残基113VH免疫球蛋白重链可变区VK免疫球蛋白κ轻链可变区定义为了可更容易理解本专利技术，在下文中具体地定义某些技术和科学术语。除非在本文件中别处具体地定义，否则本文所使用的所有其它技术和科学术语均具有本专利技术所属领域的普通技术人员通常所理解的含义。除非上下文另外清楚地规定，否则如本文(包括随附权利要求)中所用的，词语的单数形式诸如“一(a)”、“一个(an)”和“该(the)”包括其对应的复数指代物。“施用”和“处理”在应用于动物、人类、实验受试者、细胞、组织、器官或生物流体时是指外源性药物、治疗剂、诊断剂或组合物与该动物、人类、个体、细胞、组织、器官或生物流体的接触。细胞的处理涵盖使试剂与细胞的接触，以及试剂与流体的接触，其中该流体是与细胞接触的。“施用”和“处理”也意指通过试剂、诊断剂、结合化合物或通过另一细胞的体外和离体处理，例如细胞的处理。“治疗”或“处理”意指在内部或外部向具有一种或多种疾病症状或怀疑患有治疗剂对其具有治疗活性的疾病的受试者或患者施用该治疗剂，如含有本专利技术的任一抗体或抗原结合片段的组合物。通常，药剂以有效缓解所治疗受试者或群体中的一种或多种疾病症状的量施用，无论是以任何本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种结合人PD-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：/na.包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区CDR1，/nb.包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的重链可变区CDR2，/nc.包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链可变区CDR3，/nd.包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的轻链可变区CDR1，/ne.包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链可变区CDR2，和/nf.包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180201 CN PCT/CN2018/0749161.一种结合人PD-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
a.包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的重链可变区CDR1，
b.包含SEQIDNO:91的氨基酸序列的重链可变区CDR2，
c.包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的重链可变区CDR3，
d.包含SEQIDNO:3的氨基酸序列的轻链可变区CDR1，
e.包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的轻链可变区CDR2，和
f.包含SEQIDNO:12的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。


2.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
a.包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的重链可变区CDR1，
b.包含SEQIDNO:91的氨基酸序列的重链可变区CDR2，
c.包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的重链可变区CDR3，
d.包含SEQIDNO:3的氨基酸序列的轻链可变区CDR1，
e.包含SEQIDNO:15、18、21、25、29、32或35的氨基酸序列的轻链可变区CDR2，和
f.包含SEQIDNO:5、22或26的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。


3.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
1)重链可变区，其包含：
包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的重链可变区CDR1，包含SEQIDNO:9、79或86的氨基酸序列的重链可变区CDR2，包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的重链可变区CDR3；和
2)轻链可变区，其包含选自以下的轻链CDR：
a.包含SEQIDNO:3的氨基酸序列的轻链可变区CDR1，包含SEQIDNO:4、15、18、29、32或35的氨基酸序列的轻链可变区CDR2和包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的轻链可变区CDR3；
b.包含SEQIDNO:3的氨基酸序列的轻链可变区CDR1,包含SEQIDNO:21的氨基酸序列的轻链可变区CDR2和包含SEQIDNO:22的氨基酸序列的轻链可变区CDR3；和
c.包含SEQIDNO:3的氨基酸序列的轻链可变区CDR1，包含SEQIDNO:25的氨基酸序列的轻链可变区CDR2和包含SEQIDNO:26的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。


4.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
1)重链可变区，其包含：
包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的重链可变区CDR1，包含SEQIDNO:91的氨基酸序列的重链可变区CDR2，包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的重链可变区CDR3；和
2)轻链可变区，其包含：
包含SEQIDNO:3的氨基酸序列的轻链可变区CDR1，包含SEQIDNO:21的氨基酸序列的轻链可变区CDR2和包含SEQIDNO:22的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。


5.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
1)重链可变区，其包含：
包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的重链可变区CDR1，包含SEQIDNO:86的氨基酸序列的重链可变区CDR2，包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的重链可变区CDR3；
2)轻链可变区，其包含：
包含SEQIDNO:3的氨基酸序列的轻链可变区CDR1，包含SEQIDNO:21的氨基酸序列的轻链可变区CDR2和包含SEQIDNO:22的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。


6.一种结合人PD-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
1)重链可变区，其包含：
包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的重链可变区CDR1，包含SEQIDNO:86的氨基酸序列的重链可变区CDR2，包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的重链可变区CDR3；和
2)轻链可变区，其包含：
包含SEQIDNO:3的氨基酸序列的轻链可变区CDR1，
包含与SEQIDNO:21具有至少约57％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区CDR2和包含与SEQIDNO:22具有至少约67％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。


7.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含含有SEQIDNO:7或88中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQIDNO:14、17、20、24、28、31、34或76中所示的氨基酸序列的轻链可变区。


8.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，包含含有SEQIDNO:6中所示的氨基酸序列的重链和含有SEQIDNO:13、16、19、23、27、30或33中所示的氨基酸序列的轻链。


9.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其包含：含有SEQIDNO:92中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQIDNO:20中所示的氨基酸序列的轻链可变区。


10.一种结合人PD-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含含有SEQIDNO:85中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQIDNO:20中所示的氨基酸序列的轻链可变区。


11.如权利要求10所述的抗体或抗原结合片段，包含含有SEQIDNO:84中所示的氨基酸序列的重链和含有SEQIDNO:19中所示的氨基酸序列的轻链。


12.一种结合人PD-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
a.包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的重链可变区CDR1，
b.包含SEQIDNO:9、79、86或91的氨基酸序列的重链可变区CDR2，
c.包含SEQIDNO:41或10的氨基酸序列的重链可变区CDR3，
d.包含SEQIDNO:3的氨基酸序列的轻链可变区CDR1，
e.包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的轻链可变区CDR2，和
f.包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。


13.如权利要求12所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
a.包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的重链可变区CDR1，
b.包含SEQIDNO:86的氨基酸序列的重链可变区CDR2，
c.包含SEQIDNO:41的氨基酸序列的重链可变区CDR3，
d.包含SEQIDNO:3的氨基酸序列的轻链可变区CDR1，
e.包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的轻链可变区CDR2，和
f.包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。


14.如权利要求12所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含含有SEQIDNO:75、78、81或88中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQIDNO:76中所示的氨基酸序列的轻链可变区。


15.如权利要求12所述的抗体或抗原结合片段，其为包含含有SEQIDNO:74、77、80、82或89中所示的氨基酸序列的重链和含有SEQIDNO:2中所示的氨基酸序列的轻链的抗体。


16.如权利要求12所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含含有SEQIDNO:95中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQIDNO:76中所示的氨基酸序列的轻链可变区。


17.如权利要求16所述的抗体或抗原结合片段，其为包含含有SEQIDNO:83中所示的氨基酸序列的重链和含有SEQIDNO:2中所示的氨基酸序列的轻链的抗体。


18.一种结合人PD-1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
a.包含SEQIDNO:61的氨基酸序列的重链可变区CDR1，
b.包含SEQIDNO:62的氨基酸序列的重链可变区CDR2，
c.包含SEQIDNO:41的氨基酸序列的重链可变区CDR3，
d.包含SEQIDNO:3的氨基酸序列的轻链可变区CDR1，
e.包含SEQIDNO:63的氨基酸序列的轻链可变区CDR2，和
f.包含SEQIDNO:64的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。


19.如权利要求18所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
a.包含SEQIDNO:40或53的氨基酸序列的重链可变区CDR1，
b.包含SEQIDNO:9或54的氨基酸序列的重链可变区CDR2，
c.包含SEQIDNO:41的氨基酸序列的重链可变区CDR3，
d.包含SEQIDNO:3的氨基酸序列的轻链可变区CDR1，
e.包含SEQIDNO:4、42、47或60的氨基酸序列的轻链可变区CDR2，和
f.包含SEQIDNO:5、48或55的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。


20.如权利要求18所述的抗体或抗原...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·法雅达特迪尔曼，V·阮，S·卡恩，黄劭鹏，应华，
申请(专利权)人：默沙东公司，
类型：发明
国别省市：美国;US