【技术实现步骤摘要】
一种连接肽介导的酶固定化BaPAD催化剂及其制备方法和应用
本专利技术属于催化剂的制备与应用领域，具体涉及一种连接肽介导的酶固定化BaPAD催化剂及其制备方法和应用。
技术介绍
由于产物4-乙烯基愈创木对细胞膜毒性很大，全细胞作为催化剂在两相体系中生产4-乙烯基愈创木酚(4-Vinylguaiacol，4-VG)的过程中细胞发生裂解或死亡，导致在长时间的反应中转化效率逐渐降低甚至丧失，无法重复利用。另外，全细胞的细胞膜/壁可能是底物或产物扩散的屏障，在催化过程中会引起传质限制。相比较而言，酶作为催化剂可以直接进入反应环境，而且反应条件较简单，但是，游离酶的工业应用往往受到长期操作稳定性差，酶的回收和再利用面临技术阻碍的挑战。此外，酶纯化的高成本也是影响该工艺经济可持续性的另一个关键因素。因此，在下游生产过程中回收这些催化剂，提高操作稳定性是非常关键的，同时提高回收率和稳定性可以降低成本，并提高整个生物反应的效率。为了实现这些目标，固定化技术成为最具创新性和研究最为广泛的生产方法之一，以实现具有更高生产力的工业规模。<...
【技术保护点】
1.一种连接肽介导的酶固定化BaPAD催化剂的制备方法，其特征在于，首先将对沸石特异性吸附的连接肽通过Nco I/Xho I限制性酶切位点插入到含有编码酚酸脱羧酶BaPAD基因的质粒pET28a-bapad载体上，然后通过融合酶在经过预处理的沸石载体上固定化得到酶固定化BaPAD催化剂，所述酚酸脱羧酶BaPAD来自萎缩芽孢杆菌。/n
【技术特征摘要】
1.一种连接肽介导的酶固定化BaPAD催化剂的制备方法，其特征在于，首先将对沸石特异性吸附的连接肽通过NcoI/XhoI限制性酶切位点插入到含有编码酚酸脱羧酶BaPAD基因的质粒pET28a-bapad载体上，然后通过融合酶在经过预处理的沸石载体上固定化得到酶固定化BaPAD催化剂，所述酚酸脱羧酶BaPAD来自萎缩芽孢杆菌。
2.根据权利要求1所述的连接肽介导的酶固定化BaPAD催化剂的制备方法，其特征在于，所述连接肽由n个重复序列VKTQATSREEPPRLPSKHRPG和VKTQTAS串联而成，所述连接肽中单字母符号代表的氨基酸残基的定义如下：V为缬氨酸，K为赖氨酸，T为苏氨酸，Q为谷氨酰胺，A为丙氨酸，S为丝氨酸，R为精氨酸，E为谷氨酸，P为脯氨酸，L为亮氨酸，H为组氨酸，G为甘氨酸；所述沸石载体为Na-Y沸石。
3.根据权利要求2所述的连接肽介导的酶固定化BaPAD催化剂的制备方法，其特征在于，所述n为4。
4.根据权利要求1所述的连接肽介导的酶固定化BaPAD催化剂的制备方法，其特征在于，所述连接肽加在所述萎缩芽孢杆菌的酚酸脱羧酶B...
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