两株基因组高度同源猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株感染性克隆构建、拯救与应用制造技术

两株基因组高度同源猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株感染性克隆构建、拯救与应用，属于生物工程技术领域。本发明专利技术所构建的两个感染性克隆病毒是基于HP‑PRRSV基因组高度同源但毒力有显著差异的XJ17‑5强毒株和JSTZ1712‑12天然弱毒株。所构建感染性克隆的方法简单便捷，直接进行DNA转染，不需要体外转录成病毒RNA再转染，克服了RNA体外不稳定和易降解等缺点。所获得HP‑PRRSV感染性克隆平台可应用于体外病毒复制机制与致病机理研究。所构建HP‑PRRSV天然弱毒株感染性克隆病毒可用于研制更安全高效的新型PRRSV基因工程疫苗，有利于我国PRRSV的防控。

【技术实现步骤摘要】
两株基因组高度同源猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株感染性克隆构建、拯救与应用
本专利技术涉及生物工程
，具体涉及两株猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株感染性克隆构建、拯救、改造及其应用。
技术介绍
猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)引起的以母猪繁殖障碍和所有年龄猪呼吸道症状为主要特征的动物传染病，俗称“猪蓝耳病”。1987年，该病最早在美国报道，随后在全世界各地蔓延，严重危害养猪业的发展。1995年，我国首次分离到PRRSV。2006年，我国暴发“猪高热病”，引起高热(≥41℃)、50-100％发病率和20-100％死亡率，给我国养猪业造成了巨大的经济损失。该病病原为毒力显著增强的高致病性PRRSV变异株(HP-PRRSV)。PRRSV是一种单股正链RNA病毒，基因组大小约为15kb，5’端有帽子结构，3’端有Poly(A)尾，中间有10个开放阅读框(ORF)。ORF1a和ORF1b编码非结构蛋白，ORF2-7编码结构蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.两株基因组高度同源猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株感染性克隆构建，其特征是，提供了一种重组载体，包含HP-PRRSV基因组全长cDNA序列，该全长cDNA序列的5’端加有巨细胞病毒真核启动子序列，3’端Poly(A)尾下游加有丁肝炎病毒核酶序列以及牛生长激素多聚腺苷酸信号转录终止序列；/n上述载体为pACYC177低拷贝载体，在pACYC177载体上插入四个单一限制性酶切位点PacI, AflII, AscI和NotI，用于HP-PRRSV强毒株XJ17-5和弱毒株JSTZ1712-12的感染性克隆构建。/n

【技术特征摘要】
1.两株基因组高度同源猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株感染性克隆构建，其特征是，提供了一种重组载体，包含HP-PRRSV基因组全长cDNA序列，该全长cDNA序列的5’端加有巨细胞病毒真核启动子序列，3’端Poly(A)尾下游加有丁肝炎病毒核酶序列以及牛生长激素多聚腺苷酸信号转录终止序列；
上述载体为pACYC177低拷贝载体，在pACYC177载体上插入四个单一限制性酶切位点PacI,AflII,AscI和NotI，用于HP-PRRSV强毒株XJ17-5和弱毒株JSTZ1712-12的感染性克隆构建。


2.如权利要求1所述的两株基因组高度同源猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株感染性克隆拯救，其特征是，将上述重组载体与高效转染试剂混合后直接转染Marc-145细胞或者转染BHK-21细胞后再感染Marc-145细胞，均拯救获得XJ17-5或者JSTZ1712-12感染性克隆病毒。


3.如权利要求1所述的两株基因组高度同源猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈南华，叶梦雪，朱建中，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32