一种冬虫夏草提取物及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种冬虫夏草提取物及其制备方法。该冬虫夏草提取物是以冬虫夏草为原料，经提取制得。所述提取过程为：先在液体中提取，再将提取物用纯水分散，然后用有机溶剂萃取，分别取有机相、水相，即得。该冬虫夏草提取物与多个免疫调节靶点(PD‑1、PD‑L1、TNFR1)具有稳定的、高强度的结合能力，该冬虫夏草提取物还能够有效地阻断293T‑h PD‑L1细胞与PD‑1蛋白的结合，所以，本发明专利技术的冬虫夏草提取物可以用来制备包括PD‑1、PD‑L1、TNFR1在内的免疫检查点抑制剂，还可以用来制备治疗包括食管鳞状细胞癌、尿路上皮癌、鳞状非小细胞肺癌在内的多种抗肿瘤药物，应用前景优良。

【技术实现步骤摘要】
一种冬虫夏草提取物及其制备方法
本专利技术属于制药领域，特别涉及一种冬虫夏草提取物及其制备方法。
技术介绍
免疫治疗是肿瘤治疗的重要手段，其中程序性死亡受体1(programmedcelldeath1,DCD1,PD-1)/程序性死亡受体配体1(programmedcelldeath1ligand1，DCD1LG1，PD-L1)通路抑制药物是目前免疫治疗的热点。PD-1是一种免疫抑制分子，它与配体PD-L1及PD-L2互相作用，可导致肿瘤抗原特异性T细胞凋亡，从而使肿瘤细胞逃脱机体的免疫监控。PD-L1属于B7-H1分子家族，在许多人类肿瘤细胞表面，如肺癌、恶性黑色素瘤、乳腺癌、胃癌、食管癌、胰腺癌、肾细胞癌等中都能够检测到PD-L1的表达，同时研究发现癌组织较正常组织中的PD-L1表达水平明显上调。当肿瘤细胞上高表达的PD-L1与T细胞上的受体PD-1结合时，可传递负性调控信号，诱导T细胞凋亡或导致免疫无能，使肿瘤细胞得以逃避机体的免疫监控和杀伤。而PD-1/PD-L1抑制剂能够阻断PD-1/PD-L1通路，促进效应T细胞的活化及增殖，增强细胞免疫，从而识别并杀伤肿瘤组织。已经有多项研究表明PD-1/PD-L1抑制剂能够达到治疗肿瘤的目的。以PD-1和PD-L1为靶点的抗体已被美国食品药品管理局(FDA)批准用于治疗多种实体肿瘤。PD-1抑制剂，比如Nivolumab(Opdivo)已被批准用于不可切除或转移性，且对其他治疗药物反应不佳的恶性黑色素瘤及转移性鳞状非小细胞肺癌的治疗。文献“PD-1/PD-L1抑制剂在晚期胃癌治疗中的临床研究进展”中公开了多种PD-1/PD-L1抑制剂在晚期胃癌的临床研究成果，其中PD-L1抑制剂Avelumab在PD-L1阳性表达的患者的一线及二线治疗中有10％及18.2％的客观缓解率，PD-1抑制剂Pembrolizumab对于PD-L1阳性表达的患者的客观缓解率达22.2％，PD-L1抑制剂Nivolumab单药治疗的客观缓解率达14％。并且，Avelumab等药物在现阶段的研究中表现出可耐受的不良反应，单药治疗的安全性也可接受，在胃癌方面的Ⅲ期随机试验也即将展开。文献“PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂在肺癌中的研究进展”公开了在肺癌领域中，针对PD1/PD-L1靶点的药物主要有5种，包括抗PD-1单抗(Nivolumab、Pembrolizumab)、抗PD-L1单抗(Atezolizumab、Durvalumab、Avelumab)。其中Pembrolizumab在晚期非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)一线治疗中展示出临床获益。Ib期KEYNOTE001研究发现，Pembrolizumab在初治和经治NSCLC患者中均观察到抗肿瘤活性，安全性可控。对于PD-L1阳性(TPS≥50％)初治的NSCLC，ORR和24个月OS分别达到58％和61％。基于以上结果，KEYNOTE024研究将其用于一线治疗PD-L1(TPS≥50％)、EGFR/ALK阴性的晚期NSCLC。此外，PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂在各项临床试验的成功应用，为包括鳞癌、腺癌和小细胞肺癌在内的多种病理类型肺癌患者均带来了临床获益。多篇文献“PD-1/PD-L1抑制剂及其生物标志物在食管鳞状细胞癌治疗中的研究进展”、“PD-1/PD-L1抑制剂在晚期尿路上皮癌中的研究进展”、“PD-1/PD-L1抑制剂在结直肠癌中的研究进展”、“PD-1/PD-L1抑制剂在淋巴瘤治疗中的研究进展”、“PD-1/PD-L1通路抑制剂在消化系统肿瘤免疫治疗的研究进展”也分别公开了PD-1/PD-L1抑制剂在治疗食管鳞状细胞癌、晚期尿路上皮癌、结直肠癌、淋巴瘤、消化系统肿瘤等多种肿瘤的免疫药物中取得了令人振奋的进展。所有，研究出更多更加安全、有效的新一代PD-1/PD-L1抑制剂，对制备多种抗肿瘤药物具有非常重要的意义。除PD-1、PD-L1外，还有多种其它免疫调节靶点受到关注，比如α肿瘤坏死因子(TNFα)家族的蛋白成员作为免疫治疗的调节分子已被确定和开发。TNFα有2个受体：TNFR1和TNFR2，其中TNFR1介导了大部分TNFα的信号功能。TNFα作为重要的炎症因子，广泛参与了多种生理作用，在机体的免疫反应中起关键作用，但是在给予TNFα治疗时，会导致严重的毒副作用。因此寻找新的更加安全、有效、特异的新一代抗TNFα药物受到广泛的关注。冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌Cordycepssinensis(Berk.)Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫子座和幼虫尸体的干燥复合体。冬虫夏草是我国传统的名贵中药材，具有免疫调节、抗菌、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、降血糖血脂等广泛的药理作用，与人参、鹿茸并称“中药三大宝”。国内外现代药理研究表明，冬虫夏草可通过抑制B16黑色素瘤细胞，人肝癌HepG2细胞、胃癌细胞、肺癌细胞等肿瘤细胞的生长和增殖，发挥其肿瘤抑制作用。但是，冬虫夏草作为PD-1、PD-L1或TNFR1免疫检查点抑制剂，以及冬虫夏草治疗食管鳞状细胞癌、尿路上皮癌、鳞状非小细胞肺癌的用途还未见报道。。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提供了一种能够作为免疫检查点抑制剂的冬虫夏草提取物及其制备方法。本专利技术提供了一种冬虫夏草提取物，该提取物是以冬虫夏草为原料，经提取制得。进一步地，所述提取过程为：先在液体中提取，再将提取物用纯水分散，然后用有机溶剂萃取，分别取有机相、水相，即得。进一步地，所述液体选自纯水或60～80％的甲醇；料液比为1：(15～25)g/mL；所述提取温度为30～45℃；提取次数为6～12次；每次提取时间为20～40min；或，所述在液体中提取的方式为：先在人工胃液中，以料液比1:(15～25)g/mL，于30～45℃下提取4～8次，每次20～40min；再加入人工肠液保温提取2～5次，每次20～40min。进一步地，所述液体选自纯水或70％的甲醇；料液比为1：20g/mL；所述提取温度为37℃；提取次数为9次；每次提取时间为30min；或，所述在液体中提取的方式为：先在人工胃液中，以料液比1:20g/mL，于37℃下提取6次，每次30min；再加入人工肠液保温提取3次，每次30min。进一步地，所述有机溶剂与纯水的体积比为1：(0.8～1.2)；所述有机溶剂选自酯类、醇类有机溶剂；所述萃取次数为1～5次；优选地，所述有机溶剂与纯水的体积比为1：1；所述有机溶剂选自乙酸乙酯、正丁醇；所述萃取次数为3次。进一步地，所述用纯水分散的提取物为干燥后的提取物；和/或，所述提取的方法为超声提取。本专利技术还提供了一种制备上述冬虫夏草提取物的方法，所述方法为：以冬虫夏草为原料，经提取制得。进一步地，所述提取过程为：先在液体中提取，再将提取物用纯水分散，然后用有机溶剂萃取，分别取有机相、水相，即得。进一步地，所述液体选自纯水或60～80本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种冬虫夏草提取物，其特征在于：该提取物是以冬虫夏草为原料，经提取制得。/n

【技术特征摘要】
20190308 CN 2019101772079;20190308 CN 2019101772061.一种冬虫夏草提取物，其特征在于：该提取物是以冬虫夏草为原料，经提取制得。


2.根据权利要求1所述的冬虫夏草提取物，其特征在于：所述提取过程为：先在液体中提取，再将提取物用纯水分散，然后用有机溶剂萃取，分别取有机相、水相，即得。


3.根据权利要求2所述的冬虫夏草提取物，其特征在于：所述液体选自纯水或60～80％的甲醇；料液比为1：(15～25)g/mL；所述提取温度为30～45℃；提取次数为6～12次；每次提取时间为20～40min；
或，
所述在液体中提取的方式为：先在人工胃液中，以料液比1:(15～25)g/mL，于30～45℃下提取4～8次，每次20～40min；再加入人工肠液保温提取2～5次，每次20～40min。


4.根据权利要求3所述的冬虫夏草提取物，其特征在于：所述液体选自纯水或70％的甲醇；料液比为1：20g/mL；所述提取温度为37℃；提取次数为9次；每次提取时间为30min；
或，
所述在液体中提取的方式为：先在人工胃液中，以料液比1:20g/mL，于37℃下提取6次，每次30min；再加入人工肠液保温提取3次，每次30min。


5.根据权利要求2所述的冬虫夏草提取物，其特征在于：所述有机溶剂与纯水的体积比为1：(0.8～1.2)；所述有机溶剂选自酯类、醇类有机溶剂；所述萃取次数为1～5次；
优选地，所述有机溶剂与纯水的体积比为1：1；所述有机溶剂选自乙酸乙酯、正丁醇；所述萃取次数为3次。


6.根据权利要求2～5任一项所述得冬虫夏草提取物，其特征在于：所述用纯水分散的提取物为干燥后的提取物；和/或，所述提...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓赟，郭大乐，曹治兴，谭璐，曹钰镁，旷歧轩，张慧敏，
申请(专利权)人：成都中医药大学，
类型：发明
国别省市：四川;51