2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶在制备耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌感染药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了2,6‑双(2‑苯并咪唑基)吡啶在制备耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌感染药物中的应用。本发明专利技术通过圆二色光谱、荧光实时定量PCR等方法发现2,6‑双(2‑苯并咪唑基)吡啶可以和铜绿假单胞菌中MexA基因的核心序列形成G‑四链体结构，从而抑制了MexA基因的表达。通过药敏实验验证2,6‑双(2‑苯并咪唑基)吡啶可以降低耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌对美罗培南的耐药性。所述2,6‑双(2‑苯并咪唑基)吡啶使用量为5μM时，最低可以使耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌菌株的最低抑菌浓度降低为2μg/ml，达到使用美罗培南治疗的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌感染的作用。

【技术实现步骤摘要】
2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶在制备耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌感染药物中的应用
本专利技术涉及医药
，具体的指2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶在制备耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌感染药物中的应用。
技术介绍
铜绿假单胞菌是一种常见的条件致病菌，也是我国医院内感染的常见致病菌之一，铜绿假单胞菌的感染多发于重症监护室感染，其感染者往往伴随其他复杂感染，治疗难度很大。铜绿假单胞菌对多种抗生素天然耐药，以往临床上经常使用第三、四代头孢菌素，但由于广谱抗生素的大量使用，出现了越来越多的耐β-内酰胺类抗生素的铜绿假单胞菌菌种。碳青霉烯类抗生素是目前抗菌谱最广，抗菌活性最强的非典型β-内酰胺抗生素，常见的有美罗培南和亚胺培南，已经成为治疗严重细菌感染最主要的抗菌药物之一。但由于此药的抗菌谱非常广，使用非常广泛，也导致了耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌菌株的不断涌现，常常导致非常严重的并发感染，为临床治疗带来了巨大的挑战。因此，解决治疗耐碳青霉烯的铜绿假单胞菌感染的问题，具有十分重要的实际应用价值。铜绿假单胞菌中的MexAB-OprM外排泵系统是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药最主要的外排泵系统，MexA基因是此外排泵系统中的一个关键调控基因，该系统表达的相应蛋白质会将已经进入细菌内部的碳青霉烯类药物主动运出，从而使药物在细菌内的浓度下降，导致细菌无法被有效杀灭。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对上述
技术介绍
的不足，提供2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶在制备治疗耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌感染药物中的应用，所述2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶的结构式如式Ⅰ所示：进一步，所述2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶使用量为5μM时，最低可以使耐碳青霉烯的铜绿假单胞菌菌株的MexA基因的相对表达量降低为0.067。进一步，所述2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶使用量为5μM时，最低可以使耐碳青霉烯的铜绿假单胞菌菌株的最低抑菌浓度(美罗培南)降低为2μg/mL。进一步，2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶与美罗培南合用制成治疗耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌感染药物。进一步，所述2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶制备的药品类型为注射剂、粉针剂、口服剂、口含片、喷雾剂、胶囊剂、栓剂等。本专利技术使用2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶可以通过和MexA基因的调控因子形成G-四链体结构，影响该基因的转录，对该基因的下游产物的表达产生影响，从而抑制了MexAB-OprM外排泵系统对美罗培南的主动外排，因此该化合物与碳青霉烯类抗生素美罗培南合用时，可以降低耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌对美罗培南的最低抑菌浓度，对部分菌株达到使用常规剂量的美罗培南治疗耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌感染的作用。本专利技术的优点在于：1.本专利技术对2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶开发了新的医疗用途，作为治疗耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌感染药物会产生可观的经济效益。2.本专利技术使用的2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶可以人工合成，合成产品纯度高，能够保证工业化生产。3.本专利技术的六氮杂十六元环铜配合物性质稳定，可以作为多种剂型使用，如：注射剂、粉针剂、口服剂、口含片、喷雾剂、胶囊剂、栓剂等。附图说明图1为MexA基因核心序列和2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶作用前后的圆二色光谱谱图。图2为MexA基因核心序列和2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶作用前后的圆二色光谱变温曲线谱图。图3为MexA基因和2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶作用前后的相对表达量结果。图4为铜绿假单胞菌和2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶作用前后的最低抑菌浓度(MIC值)结果。具体实施方式下面结合具体实施例，对本专利技术做进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本专利技术而非用于限制本专利技术的范围，该领域的技术熟练人员可以根据上述专利技术的内容作出一些非本质的改进和调整。实施例1：2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶诱导MexA基因核心序列形成G-四链体结构的验证。1.实验仪器圆二色光谱仪购自于英国应用光学物理公司2.实验药品与试剂2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶购自于艾览(上海)华工科技有限公司，短链MexA核心序列来自GeneBank(ID:877855),DNA购自于生工生物工程(上海)股份有限公司，序列为5’-GGCGGCGGTGGAGCAG-3’，三甲基氨基甲烷(Tris)购自于华美生物工程公司，2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶高浓度储备液为20mM，使用DMSO溶解。3.实验方法体系1：含终浓度为10μMMexADNA和10mM的Tris-HCl，总体积200μL，不足部分蒸馏水补齐。体系2：含终浓度为10μM的MexADNA和10mM的Tris-HCl，10μM的2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶，总体积200μL，不足部分蒸馏水补齐。设定圆二色光谱仪测试波长为230-310nm，分别扫描体系1和2的谱图。4.实验结果由附图1结果可以看出，单纯的单链DNA峰出现在257nm附近，加入2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶后出现了295nm附近的正峰和265nm附近的正峰，表明了反平行结构的G-四链体的生成。该结果表明2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶可以诱导MexA基因核心序列形成G-四链体结构。实施例2：2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶诱导MexA基因核心序列形成G-四链体结构的稳定性验证。1.实验仪器圆二色光谱仪购自于英国应用光学物理公司2.实验药品与试剂2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶购自于艾览(上海)华工科技有限公司，短链MexA核心序列来自GeneBank(ID:877855),DNA购自于生工生物工程(上海)股份有限公司，序列为5’-GGCGGCGGTGGAGCAG-3’，三甲基氨基甲烷(Tris)购自于华美生物工程公司，2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶高浓度储备液为20mM，使用DMSO溶解。3.实验方法体系1：含终浓度为20μMMexADNA和10mM的Tris-HCl，总体积200μL，不足部分蒸馏水补齐。体系2：含终浓度为20μM的MexADNA和10mM的Tris-HCl，20μM的2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶，总体积200μL，不足部分蒸馏水补齐。设定圆二色光谱仪测试波长为265nm，温度由10℃程序逐步升温至85℃，每一摄氏度分别扫描体系1和2的谱图，使用Origin8软件分别计算出体系1和体系2的半解链温度。4.实验结果DNA的半解链温度可以代表G-四链体的稳定性，半解链温度越高，G-四链体结构越稳定。由附图2结果可以看出，未加入2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶时，MexA核心序列DNA的半解链温度为32.7℃，加入2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶后，MexA核心序列DNA的半解链温度上升至46.2℃，半解本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶在制备耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌感染药物中的应用，其特征在于：所述2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶的结构式如式Ⅰ所示：/n

【技术特征摘要】
1.2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶在制备耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌感染药物中的应用，其特征在于：所述2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶的结构式如式Ⅰ所示：





2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述2,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶使用量为5μM时，使耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌菌株的最低抑菌浓度降低为2μg/mL。


3.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述2,6-双(2...

【专利技术属性】
技术研发人员：苑立博，杜蘅，
申请(专利权)人：河南工业大学，
类型：发明
国别省市：河南;41