一种抗氧化肽及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种抗氧化肽及其制备方法和应用，旨在提供一种源自鸡胸肉肌原纤维蛋白，具有高效抗氧化活性的抗氧化肽及其制备方法和应用。本发明专利技术的抗氧化肽的氨基酸序列为ITTNPYDY或IGWSPLGSL。该抗氧化肽的制备方法，以新鲜鸡胸肉为原料提取肌原纤维蛋白，采用胃蛋白酶酶解所得肌原纤维蛋白，再经分离纯化及合成技术得到抗氧化肽。本发明专利技术的抗氧化肽是一种新型的抗氧化肽，经检测具有很强的抗氧化活性，在本发明专利技术测定条件下其铁离子还原能力和氧自由基吸收能力均显著高于谷胱甘肽，同时，对NIH‑3T3细胞的氧化损伤具有明显的抑制效果。本发明专利技术的抗氧化肽属于天然抗氧化剂，食用更安全，能够应用于抗氧化功能食品、保健品及药品中。

【技术实现步骤摘要】
一种抗氧化肽及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物
，更具体的说，是涉及一种源自鸡胸肉肌原纤维蛋白的抗氧化肽及其制备方法和应用。
技术介绍
过量活性氧(ROS)自由基会破坏机体正常的氧化还原平衡，造成细胞内生物大分子如蛋白质、脂质、DNA等的氧化损伤，从而加速机体衰老，引发神经退行性疾病、动脉粥样硬化、慢性炎症、癌症等多种疾病。研究发现，通过饮食摄入抗氧化剂以清除体内过多的自由基、降低机体氧化应激水平是行之有效的方法，可以起到预防、甚至治疗某些疾病的作用。目前一些合成抗氧化剂如丁基羟基甲苯(BHT)、丁基羟基茴香醚(BHA)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)等被广泛用于食品和生物系统中。然而越来越多的研究显示，合成抗氧化剂的长期摄入对人体健康存在潜在危害。随着人们生活水平的提高和健康意识的增强，绿色天然食品受到更多消费者的青睐。因此，天然抗氧化剂取代人工合成抗氧化剂已是大势所趋。在众多天然抗氧化剂中，动植物源抗氧化肽由于其分子量低、活性高、易于吸收、无副作用等优点受到广泛关注。抗氧化肽是指一类具有抑制生物大分子过氧化或清除体内自由基产物的活性寡肽。目前已从植物蛋白(如大豆蛋白和油料种子蛋白)、乳蛋白和海洋生物等来源得到具有良好抗氧化活性的肽段，而基于肉蛋白中衍生的抗氧化肽及其功能特性的研究则较少。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中存在的技术缺陷，而提供一种源自鸡胸肉肌原纤维蛋白、制备方法简单、具有高效抗氧化活性的抗氧化肽。本专利技术的另一个目的是提供一种利用鸡胸肉肌原纤维蛋白制备具有高效抗氧化活性的抗氧化肽的制备方法。本专利技术的再一个目的是提供一种抗氧化肽的应用。为实现本专利技术的目的所采用的技术方案是：一种抗氧化肽，所述抗氧化肽的氨基酸序列为ITTNPYDY或IGWSPLGSL。一种抗氧化肽的制备方法，以新鲜鸡胸肉为原料提取肌原纤维蛋白，然后，采用胃蛋白酶酶解所得肌原纤维蛋白，再经分离纯化及合成技术得到抗氧化肽。所述酶解的条件为：用浓度为0.5mol/L的NaCl溶液分散所得肌原纤维蛋白，蛋白浓度为10mg/mL，酶与底物比为3000U/g，pH值为2-3，温度为25-35℃，酶解时间为2-3h。所述分离纯化的手段包括超滤和SephadexG-15凝胶色谱。所述分离纯化包括下述步骤：(1)利用截留分子量为3KDa的超滤膜对酶解产物进行超滤分离，收集分子量小于3KDa的组分；(2)采用SephadexG-15凝胶色谱对上述组分进行分离，以去离子水为洗脱液，流速为0.8mL/min，测量洗脱组分在214nm下的吸光度值，并测定各吸收峰对应的洗脱组分的抗氧化活性；(3)收集经凝胶色谱分离的具有最佳抗氧化活性的峰，采用液相色谱质谱联用仪对该峰所包含的肽段进行氨基酸序列测定，获得峰面积大于8×109的肽段，氨基酸序列分别为ITTNPYDY、IGWSPLGSL、ITTNPYDYHY和LRVAPEEHPTL。所述合成技术为Fmoc固相合成技术，依次合成所得氨基酸序列分别为ITTNPYDY、IGWSPLGSL、ITTNPYDYHY和LRVAPEEHPTL的4条多肽，并比较4条多肽的抗氧化活性，得到氨基酸序列为ITTNPYDY或IGWSPLGSL的抗氧化肽作为本专利技术的抗氧化肽。一种抗氧化肽的应用，所述抗氧化肽应用于抗氧化功能食品、保健品及药品中。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：1、本专利技术的抗氧化肽的氨基酸序列为ITTNPYDY或IGWSPLGSL，是一种新型的抗氧化肽，经检测具有很强的抗氧化活性，在本专利技术测定条件下其铁离子还原能力和氧自由基吸收能力均显著高于谷胱甘肽(p<0.05)。2、本专利技术的抗氧化肽以具有高营养价值的鸡胸肉肌原纤维蛋白为原料，属于天然抗氧化剂，食用更安全；同时有助于实现鸡胸肉在食品保健等领域的高值化利用，开辟鸡肉及其副产物提质增效新途径。3、本专利技术的抗氧化肽的制备方法以抗氧化活性为指标进行酶解，通过对酶解条件的控制，所得抗氧化肽的活性高，而且，制备方法简单，实用性强。4、本专利技术提供的天然抗氧化肽，对过氧化氢诱导的小鼠成纤维细胞(NIH-3T3)氧化损伤和凋亡具有显著的抗氧化保护作用，能够应用于抗氧化功能食品、保健品及药品中用于缓解氧化应激。附图说明图1所示为采用DPPH法测定鸡胸肉肌原纤维蛋白酶解产物超滤分离组分的抗氧化活性结果；图2所示为分子量小于3KDa的超滤组分经SephadexG-15凝胶色谱分离的洗脱曲线图；图3所示为采用DPPH法测定SephadexG-15凝胶色谱分离各峰的抗氧化活性结果；图4所示为采用液质联用得到的凝胶色谱洗脱峰峰3的总离子流图；图5所示为抗氧化肽ITTNPYDY和IGWSPLGSL细胞毒性实验结果；图6所示为浓度为50μmol/L的抗氧化肽ITTNPYDY或IGWSPLGSL对1mmol/L的过氧化氢诱导NIH-3T3氧化损伤的保护作用结果；图7所示为浓度为50μmol/L的抗氧化肽ITTNPYDY或IGWSPLGSL对1mmol/L的过氧化氢诱导NIH-3T3细胞凋亡的抑制作用结果。具体实施方式以下结合附图和具体实施例对本专利技术进行详细说明。实施例11、抗氧化肽的制备：1-1、鸡胸肉肌原纤维蛋白的提取：将鸡胸肉剔除可见的脂肪结缔组织，用刀斩碎成肉糜，加入四倍体积的蛋白提取液均质25s，在4℃下以5000r/min离心15min，弃上清液留沉淀。加入蛋白提取液重复上述操作两次得粗蛋白。所用蛋白提取液的组成为：NaCl的浓度为0.1mol/L，MgCl2的浓度为0.002mol/L，EDTA·2Na的浓度为0.001mol/L，NaH2PO4/Na2HPO4的浓度为0.1mol/L，pH值为7.0。将所得粗蛋白与4倍体积浓度为0.1mol/L的NaCl溶液混合，均质25s，在4℃下以5000r/min离心15min，弃上清液留沉淀。再加入浓度为0.1mol/L的NaCl溶液重复上述操作两次，所得沉淀即为鸡胸肉肌原纤维蛋白，保存于4℃，并于24h内用完。1-2、以抗氧化活性为指标酶解鸡胸肉肌原纤维蛋白：用浓度为0.5mol/L的NaCl溶液分散步骤(1-1)所得的肌原纤维蛋白，肌原纤维蛋白浓度为10mg/mL。按照酶与底物比为3000U/g加入胃蛋白酶(购于中国上海阿拉丁试剂有限公司)，酶解条件为：pH值为2.5，温度30℃，酶解时间2.5h，用浓度为1mol/L的HCl溶液调节pH值的稳定。酶解结束后沸水浴灭酶10min，冷却至室温，在4℃下以8000r/min离心15min，取上清液冷冻干燥备用。1-3、分离纯化：超滤：利用截留分子量为3KDa的超滤膜对步骤(1-2)所得的酶解产物进行超滤分离，收集分子量小于3KDa的组分，冷冻干燥备用。采用DPPH法测定所得酶解产本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗氧化肽，其特征在于，所述抗氧化肽的氨基酸序列为ITTNPYDY或IGWSPLGSL。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗氧化肽，其特征在于，所述抗氧化肽的氨基酸序列为ITTNPYDY或IGWSPLGSL。


2.一种权利要求1所述的抗氧化肽的制备方法，其特征在于，以新鲜鸡胸肉为原料提取肌原纤维蛋白，然后，采用胃蛋白酶酶解所得肌原纤维蛋白，再经分离纯化及合成技术得到抗氧化肽。


3.根据权利要求2所述的抗氧化肽的制备方法，其特征在于，所述酶解的条件为：用浓度为0.5mol/L的NaCl溶液分散所得肌原纤维蛋白，蛋白浓度为10mg/mL，酶与底物比为3000U/g，pH值为2-3，温度为25-35℃，酶解时间为2-3h。


4.根据权利要求2或3所述的抗氧化肽的制备方法，其特征在于，所述分离纯化的手段包括超滤和SephadexG-15凝胶色谱。


5.根据权利要求4所述的抗氧化肽的制备方法，其特征在于，所述分离纯化包括下述步骤：
(1)利用截留分子量为3KDa的超滤膜对酶解产物进行超滤分离，收集分子量小于3KDa的组分；
...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈金玉，曲金萍，张坤生，闫怡君，张蕾蕾，郑嘉玉，
申请(专利权)人：天津商业大学，
类型：发明
国别省市：天津;12