一种测定余甘子氨基酸组成及含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定余甘子氨基酸组成及含量的方法，包括如下步骤：精确称取余甘子果实干粉100mg‑200mg，将样品送至聚四氟乙烯微波水解罐底部，样品水解盐酸的添加样品中精确加入6mol/L HCl 8ml，轻轻摇匀，静置，吹入氮气，约20‑30s，氮气压力宜在0.1左右，置于常规水解管中，加入6mol/L HCl 8ml，摇匀静置，同样吹入氮气，封管，置于恒温烘箱中110℃条件下水解22h‑24h；按照设定好的微波水解程序进行样品水解，消解完毕后，冷却至室温，混匀，开管，定容至50ml，0.45μm滤膜过滤；吸取水解液0.5ml置于5ml EP管中，温度60℃，置于氮吹仪插孔中赶酸，距离液面0.5cm，加入1‑2ml样品稀释液pH为2.2，使氨基酸浓度为50‑200nmol/L为宜，震荡混匀，用0.22μm滤膜过滤，供上机测定；本发明专利技术提高了余甘子氨基酸测定的精度和效率。

【技术实现步骤摘要】
一种测定余甘子氨基酸组成及含量的方法
本专利技术属于食品检测
，具体涉及到一种测定余甘子氨基酸组成及含量的方法。
技术介绍
余甘子(PhyllanthusemblicaL.)，俗称滇橄榄，大戟科叶下珠属，是一种十分独特的分布于干热河谷地区的资源植物。原产印度、巴基斯坦等地。目前为中国和印度分布面积最大，产量最高。我国余甘子资源相当丰富，大面积栽培以福建、广西较多，野生资源以云南最为丰富。余甘子营养丰富，风味独特，药食两用，含有多种对人体有益的微量元素，富含维生素、酚类、黄酮、多糖和氨基酸等化学物质，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、降血压、降糖、降脂等药理保健作用，开发利用价值极高。据研究，地球上近150万种动物、30万种植株和20万种微生物本质只有一个，那就是“生命是蛋白质的存在方式，这种存在方式的实质就是这些蛋白体化学成分的不断自我更新”。而蛋白体的化学成分就是组成蛋白的基本单元--氨基酸，而“不断自我更新”就是氨基酸不断的重新排列、组合。因此，对氨基酸组成及含量的分析检测具有重要意义。相比于国外，我国余甘子氨基酸的开发和利用研究却相对较少，因此，余甘子氨基酸组成及含量的研究具有较好应用前景。目前，有关余甘子氨基酸分析的研究不多，大部分参照国标(GB/T5009.124—2003)测定食品中氨基酸含量，采用恒温烘箱进行常规酸水解，水解过程复杂，试剂用量大，控温不准确，费时费力，水解不彻底，安全隐患大。但是，目前没有利用微波水解进行样品前处理，然后用氨基酸分析仪测定余甘子氨基酸的一整套方法，且现有方法测定的余甘子氨基酸精确度和精密度均较差，重复性不高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于样品预处理过程复杂、样品水解不彻底、试剂用量大、控温不准确、水解过程费时费力、存在安全隐患、环境污染的问题，提供一种适宜的高效精确测定余甘子氨基酸的方法，提高氨基酸测定的精度和效率。为达到上述目的，本专利技术采用了下列技术方案：一种测定余甘子氨基酸组成及含量的方法，包括如下步骤：1、余甘子果实干粉的制备选取健康完好的余甘子果实，洗净，去核，烘干，进行粉碎，过筛，得到余甘子果实干粉；2、称取样品精确称取所述的余甘子果实干粉100mg-200mg，采用297mm×40mm大小的纸槽将样品送至聚四氟乙烯微波水解罐底部，样品称量太小，氨基酸峰面积太小；样品称量太大，氨基酸浓度太高，出峰易秃顶；3、样品水解盐酸的添加上述样品中精确加入6mol/LHCl8ml，轻轻摇匀，静置，吹入氮气，约20-30s，氮气压力宜在0.1左右，以免吹出液体，拧紧消解罐，确保完全密封。同时，将上述样品置于常规水解管中，加入6mol/LHCl8ml，轻轻摇匀，静置，同样吹入氮气，封管，置于恒温烘箱中110℃条件下水解22h-24h；4、微波水解程序设定按照设定好的微波水解程序进行样品水解，消解完毕后，冷却至室温，混匀，开管，定容至50ml，0.45μm滤膜过滤；5、水解液赶酸吸取水解液0.5ml置于5mlEP管中，温度60℃，置于氮吹仪插孔中赶酸，氮气压力不易过大，距离液面0.5cm，以不吹出液体为宜。蒸发至干，必要时加少许去离子水，重复蒸干1-2次；6、上机样品制备上述样品中加入1-2ml样品稀释液pH为2.2，使氨基酸浓度为50-200nmol/L为宜，震荡混匀，用0.22μm滤膜过滤，供上机测定；7、标准曲线的制作将17种氨基酸标样，即2.5umol/L，胱氨酸减半，稀释25倍至100nmol/L供上机测定，分别进样5ul、10ul、20ul、50ul，制作标准曲线。检测条件为色谱柱：LCAK06/Na；柱温：58℃-74℃梯度控温；洗脱泵0.45ml/min，衍生泵0.25ml/min；检测波长：570nm+440nm；反应器温度130℃；45分钟标准水解时间；8、样品检测将上述样品依次进样50ul，测定峰面积，根据标准曲线计算余甘子干粉中氨基酸组成及含量；9、加标回收实验取已知含量的余甘子果实干粉样品，精密加入一定量的混合氨基酸标准品溶液，测定其回收率；10、重复性实验分别吸取样品1、2、3各50ul，利用氨基酸分析仪进行分析，计算测定结果。有益效果：与现有技术相比，本专利技术具有如下优点：1、样品预处理过程简单；2、样品水解彻底；3、节约试剂用量；4、控温准确；5、水解过程安全省时，提高效率；6、操作安全，环境污染小。具体实施方式为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例对本专利技术作进一步的说明，实施方式提及的内容并非对本专利技术的限定。实施例本实施例提供了一种测定余甘子氨基酸组成及含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：1、余甘子果实干粉的制备选取健康完好的余甘子果实，洗净，去核，烘干，进行粉碎，过筛，得到余甘子果实干粉；2、称取样品精确称取所述的余甘子果实干粉100mg-200mg，采用297mm×40mm大小的纸槽将样品送至聚四氟乙烯微波水解罐底部，样品称量太小，氨基酸峰面积太小；样品称量太大，氨基酸浓度太高，出峰易秃顶；3、样品水解盐酸的添加上述样品中精确加入6mol/LHCl8ml，轻轻摇匀，静置，吹入氮气，约20-30s，氮气压力宜在0.1左右，以免吹出液体，拧紧消解罐，确保完全密封。同时，将上述样品置于常规水解管中，加入6mol/LHCl8ml，轻轻摇匀，静置，同样吹入氮气，封管，置于恒温烘箱中110℃条件下水解22h-24h；4、微波水解程序设定按照设定好的微波水解程序进行样品水解，消解完毕后，冷却至室温，混匀，开管，定容至50ml，0.45μm滤膜过滤；微波水解程序的初始设定如表1所示，表1微波水解程序最大功率/W爬升时间/min温度/℃保持时间/min180015160301800冷却20min——5、水解液赶酸吸取水解液0.5ml置于5mlEP管中，温度60℃，置于氮吹仪插孔中赶酸，氮气压力不易过大，距离液面0.5cm，以不吹出液体为宜。蒸发至干，必要时加少许去离子水，重复蒸干1-2次；6、上机样品制备上述样品中加入1-2ml样品稀释液pH为2.2，使氨基酸浓度为50-200nmol/L为宜，震荡混匀，用0.22μm滤膜过滤，供上机测定；7、标准曲线的制作将17种氨基酸标样，即2.5umol/L，胱氨酸减半，稀释25倍至100nmol/L供上机测定，分别进样5ul、10ul、20ul、50ul，制作标准曲线。检测条件为色谱柱：LCAK06/Na；柱温：58℃-74℃梯度控温；...

【技术保护点】
1.一种测定余甘子氨基酸组成及含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n1、余甘子果实干粉的制备/n选取健康完好的余甘子果实，洗净，去核，烘干，进行粉碎，过筛，得到余甘子果实干粉；/n2、称取样品/n精确称取所述的余甘子果实干粉100mg-200mg，采用297mm×40mm大小的纸槽将样品送至聚四氟乙烯微波水解罐底部，/n3、样品水解盐酸的添加/n上述样品中精确加入6mol/L HCl 8ml，轻轻摇匀，静置，吹入氮气，约20-30s，氮气压力宜在0.1左右，以免吹出液体，拧紧消解罐，确保完全密封，同时将上述样品置于常规水解管中，加入6mol/L HCl 8ml，轻轻摇匀，静置，同样吹入氮气，封管，置于恒温烘箱中110℃条件下水解22h-24h；/n4、微波水解程序设定/n按照设定好的微波水解程序进行样品水解，消解完毕后，冷却至室温，混匀，开管，定容至50ml，0.45μm滤膜过滤；/n5、水解液赶酸/n吸取水解液0.5ml置于5mlEP管中，温度60℃，置于氮吹仪插孔中赶酸，距离液面0.5cm，以不吹出液体为宜，蒸发至干，必要时加少许去离子水，重复蒸干1-2次；/n6、上机样品制备/n上述样品中加入1-2ml样品稀释液pH为2.2，使氨基酸浓度为50-200nmol/L为宜，震荡混匀，用0.22μm滤膜过滤，供上机测定；/n7、标准曲线的制作/n将17种氨基酸标样，即2.5umol/L，胱氨酸减半，稀释25倍至100nmol/L供上机测定，分别进样5ul、10ul、20ul、50ul，制作标准曲线；/n8、样品检测/n将上述样品依次进样50ul，测定峰面积，根据标准曲线计算余甘子干粉中氨基酸组成及含量；/n9、加标回收实验/n取已知含量的余甘子果实干粉样品，精密加入一定量的混合氨基酸标准品溶液，测定其回收率；/n10、重复性实验/n分别吸取样品1、2、3各50ul，利用氨基酸分析仪进行分析，计算测定结果。/n...

【技术特征摘要】
1.一种测定余甘子氨基酸组成及含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1、余甘子果实干粉的制备
选取健康完好的余甘子果实，洗净，去核，烘干，进行粉碎，过筛，得到余甘子果实干粉；
2、称取样品
精确称取所述的余甘子果实干粉100mg-200mg，采用297mm×40mm大小的纸槽将样品送至聚四氟乙烯微波水解罐底部，
3、样品水解盐酸的添加
上述样品中精确加入6mol/LHCl8ml，轻轻摇匀，静置，吹入氮气，约20-30s，氮气压力宜在0.1左右，以免吹出液体，拧紧消解罐，确保完全密封，同时将上述样品置于常规水解管中，加入6mol/LHCl8ml，轻轻摇匀，静置，同样吹入氮气，封管，置于恒温烘箱中110℃条件下水解22h-24h；
4、微波水解程序设定
按照设定好的微波水解程序进行样品水解，消解完毕后，冷却至室温，混匀，开管，定容至50ml，0.45μm滤膜过滤；
5、水解液赶酸
吸取...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁建民，何璐，杨晓琼，孔维喜，许智萍，赵琼玲，瞿文林，雷虓，坝德昆，
申请(专利权)人：云南省农业科学院热区生态农业研究所，云南昌润生态农业科技开发有限责任公司，
类型：发明
国别省市：云南;53