一种牛白藤叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法技术

技术编号:25541717 阅读:76 留言:0更新日期:2020-09-08 18:38
本发明专利技术公开了一种牛白藤叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法,属于植物组织培养领域。包括步骤:采集牛白藤单株上的叶片作为外植体;对外植体消毒后切割,并诱导培养形成愈伤组织;不定芽培养;生根培养;进行移植。本发明专利技术选择牛白藤叶片为外植体,通过组织培养的方法实现了牛白藤种苗的工厂化生产,其愈伤组织诱导率可达88%,移植成活率达到了95%以上。本发明专利技术具有成本低廉、繁殖系数高、种苗生长相对一致等特点,对于促进牛白藤的种质资源利用具有重大意义。

【技术实现步骤摘要】
一种牛白藤叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法
本专利技术涉及植物组织培养
,具体涉及一种牛白藤叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法。
技术介绍
牛白藤(Hedyotishedyotidea)为茜草科植物,分布于我国广东、广西、云南省份。牛白藤为粗壮藤状灌木,高3-5m,密被粉末状柔毛;叶对生;叶片卵形或卵状披针形;腋生或顶生球形花序;蒴果近球形,花期秋季。牛白藤别名有毛鸡屎藤、脓见消、癍痧藤等,具有清热解毒之功效。常用于风热感冒,肺热咳嗽,中暑高热,肠炎,皮肤湿疹,带状疱疹,痈疮肿毒;是一种常见瑶药。目前,牛白藤多依靠采摘野生植株为来源;野生种群已经满足不了医药和研究的需求,因此需要一种能够实现大规模繁殖牛白藤的方法以保障其需求。
技术实现思路
本专利技术针对上述现有技术存在的问题,提供一种牛白藤叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法,建立牛白藤离体快速繁殖技术体系为实现本专利技术目的,通过以下技术方案予以实现:一种牛白藤叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法,包括以下步骤:(1)外植体采集:采集牛白藤单株上的叶片作为外植体;(2)愈伤组织培养:对外植体消毒后切割,并诱导培养形成愈伤组织;(3)不定芽培养:对愈伤组织进行不定芽培养,得不定芽丛;(4)壮苗培养:对不定芽丛进行生根培养,得试管苗;(5)移植:将试管苗进行移植,得种苗。优选地,所述步骤(1)中采集无病虫害、且叶龄为10-15天的新叶叶片作为外植体。优选地,所述步骤(2)中:先对外植体用水进行冲洗,然后使用酒精消毒,再使用升汞溶液消毒并冲洗;然后将叶片切割并接种到愈伤组织培养基上培养25-30天形成愈伤组织。优选地,所述愈伤组织培养基的条件为:LS培养基,1.0-3.0mg/L核黄素、0.1-0.5mg/L活性碳、0.5-1.0mg/LCPPU、0.1-0.5mg/LNAA、25-30g/L蔗糖、3.0-4.0g/L琼脂,pH为5.4-5.6。优选地,所述步骤(3)中,将愈伤组织与培养基接触的组织切除,然后将愈伤组织切成块后接种到不定芽培养基培养25-30天;所述不定芽培养基的条件为:LS培养基,1.0-3.0mg/L核黄素、0.1-0.5mg/L活性碳、0.1-0.5mg/LZT、0.05-0.1mg/LNAA、25-30g/L蔗糖、3.0-4.0g/L琼脂,pH为5.4-5.6。优选地,所述步骤(4)中,将不定芽丛分成单个的不定芽,然后接种到生根培养基中培养25-35天;所述生根培养基的条件为:1/2MS培养基,0.1-0.5mg/LSA、0.5-1.0mg/LNAA、25-35g/L蔗糖、3.0-4.0g/L琼脂,pH为5.4-5.6。优选地,所述步骤(5)中:将试管苗转移至大棚内炼苗,然后将试管苗的根部洗净后移植于基质中栽培成牛白藤种苗。进一步优选地,所述基质为酸性黄泥土;酸性黄泥土的ph范围为5.5-5.8优选地,在步骤(2)中,培养条件为:温度23-25℃,光照强度为1500-2000lx,光照时间为8-10小时/天,湿度为60-70%。进一步优选地,在步骤(3)和步骤(4)中,培养条件为:温度25-28℃,光照强度为2500-3000lx,光照时间为10-12小时/天,湿度为60-70%。本专利技术选择牛白藤叶片为外植体,通过组织培养的方法实现了牛白藤种苗的工厂化生产,其愈伤组织诱导率可达88%,,移植成活率达到了95%以上。本专利技术具有成本低廉、繁殖系数高、种苗生长相对一致等特点,对于促进牛白藤的种质资源利用具有重大意义。具体实施方式下面具体实施例对本专利技术作进一步说明,以使本领域技术人员可以更好的理解本专利技术并能予以实施,但所举实施例不作为对本专利技术的限定。按照本领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下,对本专利技术上述结构做出的其它多种形式的修改、替换或变更,均应落在本专利技术的保护范围。本专利技术中:LS培养基是指Linsmaier&Skoog植物组织培养基(Linsmaier-BednarEM;;SkoogF(1966)Thiaminerequirementinrelationtocytokininin"normal"and"mutant"strainsoftobaccocallus.。Planta)。1/2MS培养基是指各种大量元素含量为原本1/2的MS培养基(MurashigeTandSkoogF(1962)Arevisedmediumforrapidgrowthandbio-assayswithtobaccotissuecultures.PhysiolPlant15(3):473-497.)。CPPU是指氯毗苯脲;NAA是指萘乙酸;ZT是指玉米素;SA是指水杨酸。在下列实施例一至实施例三中:步骤(2)的培养条件为:温度23-25℃,光照强度为1500-2000Lx,光照时间为8-10小时/天,湿度为60-70%;步骤(3)和步骤(4)的条件为:温度25-28℃,光照强度为2500-3000Lx,光照时间为10-12小时/天,湿度为60-70%。实施例一(1)外植体采集:选择生理状态良好、无病虫害的抽出新叶数量较多的牛白藤单株,用剪刀采集叶龄10-15天的新叶。(2)愈伤组织培养:将步骤(1)采集回实验室的叶片中选择幼嫩的且没有伤痕小叶,用自来水下冲洗10小时,置于超净工作台中于70%的乙醇溶液中消毒2次,每次30秒钟,之后用0.5%的含有1到2滴Tween-20的HgCl2搅拌消毒2次,每次3分钟,最后用无菌水冲洗5-7次直到冲洗干净为止。将经过消毒的牛白藤叶片切成7mm×7mm的小块,然后将其叶面朝上水平接种到愈伤组织培养基中,培养25天即可诱导形成愈伤组织,诱导率达88%。所述的愈伤组织培养为:LS培养基+3.0mg/L核黄素+0.5mg/L活性碳+1.0mg/LCPPU+0.5mg/LNAA+30g/L蔗糖+4.0g/L琼脂,pH值为5.4-5.6。(3)不定芽培养:将步骤(2)诱导的叶片愈伤组织从培养瓶中取出,用刀片削去与培养基接触的组织,然后切割成0.7cm×0.7cm大小的小块接种到不定芽培养基中培养25天即可产生不定芽。所述的不定芽培养基为:LS培养基+3.0mg/L核黄素+0.5mg/L活性碳+0.5mg/LZT+0.1mg/LNAA+30g/L蔗糖+4.0g/L琼脂,pH值为5.4-5.6。(4)生根培养:从步骤(3)得到的长约2.0-3.0cm的不定芽丛分成单个不定芽接种到生根培养基中培养25天即能实现不定芽的生根。所述的生根培养基为:1/2MS培养基+0.5mg/LSA+1.0mg/LNAA+35g/L蔗糖+4.0g/L琼脂,pH值为5.4-5.6。(5)移栽:将步骤(4)根系生长良好的试管苗在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种牛白藤叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法,其特征在于,包括以下步骤:/n(1)外植体采集:采集牛白藤单株上的叶片作为外植体;/n(2)愈伤组织培养:对外植体消毒后切割,并诱导培养形成愈伤组织;/n(3)不定芽培养:对愈伤组织进行不定芽培养,得不定芽丛;/n(4)生根培养:对不定芽丛进行生根培养,得试管苗;/n(5)移植:将试管苗进行移植,得种苗。/n

【技术特征摘要】
1.一种牛白藤叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)外植体采集:采集牛白藤单株上的叶片作为外植体;
(2)愈伤组织培养:对外植体消毒后切割,并诱导培养形成愈伤组织;
(3)不定芽培养:对愈伤组织进行不定芽培养,得不定芽丛;
(4)生根培养:对不定芽丛进行生根培养,得试管苗;
(5)移植:将试管苗进行移植,得种苗。


2.根据权利要求1所述的牛白藤叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法,其特征在于:所述步骤(1)中采集无病虫害、且叶龄为10-15天的新叶叶片作为外植体。


3.根据权利要求1所述的牛白藤叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法,其特征在于:所述步骤(2)中:先对外植体用水进行冲洗,然后使用酒精消毒,再使用升汞溶液消毒并冲洗;然后将叶片切割并接种到愈伤组织培养基上培养25-30天形成愈伤组织。


4.根据权利要求3所述的牛白藤叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法,其特征在于:所述愈伤组织培养基的条件为:
LS培养基,1.0-3.0mg/L核黄素、0.1-0.5mg/L活性碳、0.5-1.0mg/LCPPU、0.1-0.5mg/LNAA、25-30g/L蔗糖、3.0-4.0g/L琼脂,pH为5.4-5.6。


5.根据权利要求1所述的牛白藤叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法,其特征在于:所述步骤(3)中,将愈伤组织与培养基接触的组织切除,然后将愈伤组织切成块后接种到不定芽培养基培养25-30天;
所述不定芽培养基的条件为:
LS培养基...

【专利技术属性】
技术研发人员:莫昭展林桂安卢娟
申请(专利权)人:玉林师范学院
类型:发明
国别省市:广西;45

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