一种软枣猕猴桃休眠芽玻璃化超低温保存方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种软枣猕猴桃休眠芽玻璃化超低温保存方法和应用，涉及植物组织培养技术领域，包括从软枣猕猴桃植物上剥取休眠芽，放入预培养培养液中预培养1‑5d；无菌条件下，将休眠芽转入冻存管，常温下装载10‑60min，于0℃下用玻璃化液处理90‑150min，加入少量新鲜的玻璃化液后迅速投入液氮中，冻存；取出后立即水浴解冻，用MS卸装液洗涤卸装，干燥后转至恢复培养基，暗培养1‑3d后置于光下培养；本发明专利技术的方法所用材料来源于软枣猕猴桃品种，操作简单、有效，不需特殊仪器和繁琐的处理工序，超低温保存后扁桃恢复生长良好，成活率可达86.30％，是一种可靠的方法。

【技术实现步骤摘要】
一种软枣猕猴桃休眠芽玻璃化超低温保存方法和应用
本专利技术涉及植物组织培养
，特别是涉及一种软枣猕猴桃休眠芽玻璃化超低温保存方法和应用。
技术介绍
软枣猕猴桃(ActinidiaargutaSieb.etZucc.)为我国珍贵的抗寒果树资源，系猕猴桃科(Actinidiaceae)猕猴桃属(Actinidia)的大型落叶藤本植物。软枣猕猴桃抗性极强，且营养丰富，富含维生素C，具有重要的营养价值和经济价值，是猕猴桃属中具有重要利用价值的物种之一，是猕猴桃品种改良的重要种质资源。近年来由于清林抚育及人为掠夺式的采摘，使得大量野生软枣猕猴桃优异资源流失。为了保存珍贵的种质资源，有些科研部门和生产单位相继建立了软枣猕猴桃种质资源圃，进行圃地活体种植保存，但是由于土地和资金有限，保存的资源较少；有些单位进行组织培养保存大量资源，但是由于继代次数的增加，组培种质材料可能存在积累变异的风险；而近年来发展起来的超低温保存技术，设备简单，保存材料数量大，能避免产生积累变异的风险，很多植物都建立了超低温保存库，保存了成千上万份珍贵种质资源。超低温保存本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种软枣猕猴桃休眠芽玻璃化超低温保存方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)从软枣猕猴桃休眠枝条上剥取休眠芽，放入预培养液中预培养1-5d；/n(2)无菌条件下，将休眠芽常温下装载10-60min，于0℃下用玻璃化液处理90-150min，加入少量新鲜的玻璃化液后迅速投入液氮中，冻存；/n(3)取出后立即水浴解冻，用MS卸装液洗涤卸装，干燥后转至恢复培养基，暗培养1-3d后置于光下培养。/n

【技术特征摘要】
1.一种软枣猕猴桃休眠芽玻璃化超低温保存方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)从软枣猕猴桃休眠枝条上剥取休眠芽，放入预培养液中预培养1-5d；
(2)无菌条件下，将休眠芽常温下装载10-60min，于0℃下用玻璃化液处理90-150min，加入少量新鲜的玻璃化液后迅速投入液氮中，冻存；
(3)取出后立即水浴解冻，用MS卸装液洗涤卸装，干燥后转至恢复培养基，暗培养1-3d后置于光下培养。


2.根据权利要求1所述的软枣猕猴桃休眠芽玻璃化超低温保存方法，其特征在于，步骤(1)中，从软枣猕猴桃休眠枝条上剥取休眠芽前，需进行灭菌，具体步骤包括：
将休眠枝条用水冲洗干净后，剪成1-3cm的单芽茎段，先用洗洁精浸泡清洗30min，期间每10min搅动1次，再用水冲洗30min，转移至超净工作台上，单芽茎段先进行剥皮处理，再用体积分数75％酒精浸泡30s进行表面消毒，无菌水冲洗4-5次，之后用0.1％HgCl2震荡灭菌30min，无菌水冲洗4～5次，即剥取得到休眠芽。


3.根据权利要求1所述的软枣猕猴桃休眠芽玻璃化超低温保存方法，其特征在于，步骤(1)中，所述预培养液为包含...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦红艳，白晓雪，李昌禹，范书田，杨义明，赵滢，张宝香，许培磊，刘迎雪，韩先焱，舒楠，王月，路文鹏，
申请(专利权)人：中国农业科学院特产研究所，
类型：发明
国别省市：吉林;22