肿瘤单细胞检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种肿瘤单细胞检测试剂盒，用于从体液中获取肿瘤单细胞，具有这样的特征，包括：脂质磁性纳米微球，用于从体液中捕获肿瘤细胞；细胞染色液，用于对肿瘤细胞进行染色；载玻片，用于盛放梯度稀释后的肿瘤细胞，包括载玻片主体以及设置在载玻片主体上的多个装样孔，其中，脂质磁性纳米微球表面带有与肿瘤细胞相对应的抗体，装样孔由涂覆在载玻片主体表面的超疏水油墨包围形成，装样孔的装样量为1μL～100μL。通过本试剂盒能够成本低廉、高效地快速地分离、获取肿瘤单细胞，所获得的肿瘤单细胞能够用于单细胞单细胞基因组测序和转录组测序。

【技术实现步骤摘要】
肿瘤单细胞检测试剂盒
本专利技术涉及生物技术与生物医学领域，具体涉及一种肿瘤单细胞检测试剂盒。
技术介绍
肿瘤是指机体在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的新生物，其具有异质性、多样性，并表达不同的标志物。常规检测手段受肿瘤纯度、瘤内细胞异质性限制，很多低丰度的突变信息可能会在整体表征中丢失，而针对单个细胞检测分析策略，能够弥补常规检测分析的局限性，实现低丰度突变检出的可能。单细胞测序技术是指在单个细胞水平上对基因组进行扩增与测序的一项新技术。单细胞测序主要涉及单细胞基因组测序和转录组测序两方面，分别针对单个细胞的DNA和RNA进行序列分析和比较，进而揭示基因组和转录组的变化。单细胞基因组测序通过在单个细胞水平上对基因组进行测序，揭示单个细胞的基因结构和突变状态，能够解决肿瘤高异质性的难题，为深入研究癌症发生、发展机制及诊断、治疗提供了新的研究思路，开辟了新的研究方向。目前，为了获取较纯的肿瘤单细胞用于肿瘤基因组学研究，人们开展了一系列纯化技术，如利用手工显微切割纯化技术、激光捕获显微切割技术、流式细胞仪分离技术以及微流控技术等。但以上方法由于实验仪器成本高，对操作技术要求高，对样品损耗大，获取单细胞纯度低等原因，从而限制其广泛普及与应用。
技术实现思路
本专利技术是为了解决上述问题而进行的，目的在于提供一种肿瘤单细胞检测试剂盒。本专利技术提供了一种肿瘤单细胞检测试剂盒，用于从体液中获取肿瘤单细胞，具有这样的特征，包括：脂质磁性纳米微球，用于从体液中捕获肿瘤细胞；细胞染色液，用于对肿瘤细胞进行染色；载玻片，用于盛放梯度稀释后的肿瘤细胞，包括载玻片主体以及设置在载玻片主体上的多个装样孔，其中，脂质磁性纳米微球表面带有与肿瘤细胞相对应的抗体，装样孔由涂覆在载玻片主体表面的超疏水油墨包围形成，装样孔的装样量为1μL～100μL。在本专利技术提供的肿瘤单细胞检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，装样孔的装样量为1μL～2μL。在本专利技术提供的肿瘤单细胞检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，超疏水油墨的厚度为15μm～500μm。在本专利技术提供的肿瘤单细胞检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，装样孔的形状为圆形，直径为1.0mm～10mm。在本专利技术提供的肿瘤单细胞检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，装样孔的形状为方形，长度为1.0mm～10mm，宽度为1.0mm～10mm。在本专利技术提供的肿瘤单细胞检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，多个装样孔在载玻片主体上排布成X排Y列，1≤X≤40，1≤Y≤15。在本专利技术提供的肿瘤单细胞检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，载玻片主体为长度为75mm、宽度为25mm、厚度为1.15mm的玻璃片。在本专利技术提供的肿瘤单细胞检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，脂质磁性纳米微球是由二油酰基磷脂酰胆碱组成的磷脂双分子层包裹的Fe3O4纳米粒子，脂质磁性纳米微球平均粒径为50nm～10000nm。在本专利技术提供的肿瘤单细胞检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，染色液包括荧光类染色液、探针类染色液以及化学类染料。在本专利技术提供的肿瘤单细胞检测试剂盒中，还可以具有这样的特征，还包括：磁分离装置，用于将被捕获的肿瘤细胞与体液中的其它成分进行分离。专利技术的作用与效果根据本专利技术所涉及的肿瘤单细胞检测试剂盒，因为包括脂质磁性纳米微球、细胞染色液以及载玻片，载玻片包括多个装样量为1μL～100μL的装样孔，通过脂质磁性纳米微球能够从体液中捕获肿瘤细胞，通过细胞染色液能够对被捕获的肿瘤细胞进行染色，然后将经过染色的肿瘤细胞进行梯度稀释后，将不同浓度的稀释液分别涂布在载玻片的不同装样孔内并置于显微镜下就能够鉴定得到肿瘤单细胞。通过本试剂盒能够成本低廉、高效地快速地分离、获取肿瘤单细胞，所获得的肿瘤单细胞能够用于单细胞单细胞基因组测序和转录组测序。此外，由于装样孔由涂覆在载玻片主体表面的超疏水油墨包围形成，因此装样孔的装样量能够达到1μL～100μL这样小的体积，而这样小的体积有助于获得肿瘤单细胞，即某一个装样孔内仅有一个肿瘤细胞，避免了当装样孔的装样量过大时多个装样孔内都是多个肿瘤细胞的情况发生。同时，载玻片主体上能够包含多个装样孔，可以满足多个浓度梯度的样品同时测试的需要，还可以满足多组样品同时进行平行实验的要求。附图说明图1是本专利技术的实施例一中载玻片的结构示意图；图2是本专利技术的实施例一中载玻片的剖视图；图3是本专利技术的实施例三中荧光显微镜观察结果图；图4是本专利技术的实施例四中荧光显微镜观察结果图；图5是本专利技术的实施例五中荧光显微镜观察结果图。具体实施方式为了使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，以下实施例结合附图对本专利技术肿瘤单细胞检测试剂盒作具体阐述。<实施例一>本实施例提供了一种肿瘤单细胞检测试剂盒用于从体液中分离得到肿瘤单细胞，包括脂质磁性纳米微球、磁分离架、细胞染色液、载玻片、以及清洗液。其中，体液可以为血液、尿液、唾液、胸腹水、痰液以及脑脊液等。脂质磁性纳米微球为由二油酰基磷脂酰胆碱(DOPC)组成的磷脂双分子层包裹的Fe3O4纳米粒子。并且，脂质磁性纳米微球的表面带(负载)有与体液中的肿瘤细胞相对应的抗体。例如，如果体液中的肿瘤细胞为肺癌、胃癌细胞，则抗体为表皮生长因子受体抗体(EGFR)、上皮细胞粘附分子抗体(EpCAM)、波形蛋白抗体(Vimentin)以及叶酸等抗体中的一种或多种；如果体液中的肿瘤细胞为乳腺癌、卵巢癌细胞，则抗体为人表皮生长因子受体-2抗体(HER-2)、附膜蛋白抗体(MUC-1)等抗体中的一种或多种；如果体液中的肿瘤细胞为神经上皮肿瘤细胞，则抗体为胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。脂质磁性纳米微球平均粒径为50nm～10000nm。脂质磁性纳米微球能够从体液中特异性地捕获肿瘤细胞。磁分离架采用塑料材料经过注塑工艺制成，且内含永久磁铁。在使用时，磁分离架能够通过磁铁对Fe3O4的吸引作用从而对脂质磁性纳米微球以及其它溶液(例如体液中的其它成分)进行磁分离。细胞染色液包括荧光类染色液、探针类染色液以及化学类染料。荧光类染色液包括CK8-FITC、CK18-FITC、CK19-FITC、CD45-PE、DAPI、DiA以及罗丹明123中的任意一种或多种。探针类染色液包括CEP8、CEP17以及HER-2中的任意一种或多种。化学类染料包括苏木精-伊红。在使用时，可以根据实际需要选择所需种类的荧光染色液，并配合使用相应的显微镜进行观察。例如，使用荧光类染色液或探针类染色液时，需要配合使用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜进行观察；使用化学类染料时，需要配合使用光学显微镜进行观察。图1是本专利技术的实施例一中载玻片的结构示意图。图2是本专利技术的实施例一中载玻片的剖视图。如图1、2所示，载玻片10用于盛放梯本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肿瘤单细胞检测试剂盒，用于从体液中获取肿瘤单细胞，其特征在于，包括：/n脂质磁性纳米微球，用于从所述体液中捕获肿瘤细胞；/n细胞染色液，用于对所述肿瘤细胞进行染色；/n载玻片，用于盛放梯度稀释后的所述肿瘤细胞，包括载玻片主体以及设置在所述载玻片主体上的多个装样孔，/n其中，所述脂质磁性纳米微球表面带有与所述肿瘤细胞相对应的抗体，/n所述装样孔由涂覆在所述载玻片主体表面的超疏水油墨包围形成，/n所述装样孔的装样量为1μL～100μL。/n

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤单细胞检测试剂盒，用于从体液中获取肿瘤单细胞，其特征在于，包括：
脂质磁性纳米微球，用于从所述体液中捕获肿瘤细胞；
细胞染色液，用于对所述肿瘤细胞进行染色；
载玻片，用于盛放梯度稀释后的所述肿瘤细胞，包括载玻片主体以及设置在所述载玻片主体上的多个装样孔，
其中，所述脂质磁性纳米微球表面带有与所述肿瘤细胞相对应的抗体，
所述装样孔由涂覆在所述载玻片主体表面的超疏水油墨包围形成，
所述装样孔的装样量为1μL～100μL。


2.根据权利要求1所述的肿瘤单细胞检测试剂盒，其特征在于：
其中，所述装样孔的装样量为1μL～2μL。


3.根据权利要求1所述的肿瘤单细胞检测试剂盒，其特征在于：
其中，所述超疏水油墨的厚度为15μm～500μm。


4.根据权利要求3所述的肿瘤单细胞检测试剂盒，其特征在于：
其中，所述装样孔的形状为圆形，直径为1.0mm～10mm。


5.根据权利要求3所述的肿瘤单细胞检测试剂盒，其特征在于：
其中，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁晓飞，高天威，
申请(专利权)人：湖州猎源医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33