一种正品球药隔重楼的鉴别方法技术

本发明专利技术提供了一种正品球药隔重楼的鉴别方法，它是采用高效液相色谱法检测重楼皂苷，其中，正品球药隔重楼含有重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷H，球药隔重楼伪品只含重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷H，或不含重楼皂苷。本发明专利技术还提供了一种球药隔重楼正品与伪品或混伪品的鉴别方法，它包括如下步骤：a、观察花期的待测样品性状；b、观察待测样品显微特征，其中，正品球药隔重楼淀粉粒中无脐点，球药隔重楼伪品或混伪品淀粉粒中有脐点；c、按照高效液相色谱法检测重楼皂苷。本发明专利技术提供的鉴别方法，可以准确、有效的鉴别市场上常见的正品球药隔重楼及同属近缘易混种，操作简单、高效快速、重现性好、成本低，应用前景良好。

【技术实现步骤摘要】
一种正品球药隔重楼的鉴别方法
本专利技术属于中药材鉴别
，具体涉及一种正品球药隔重楼的鉴别方法。
技术介绍
中药重楼，以“蚤休”之名始载于《神农本草经》，具有清热解毒，消肿止痛，凉肝定惊之功效，药用价值显著，药用历史悠久，历版《中国药典》收载为云南重楼ParispolyphyllaSmithvar.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.和七叶一枝花P.polyphyllaSmithvar.chinensis(Franch.)Hara的干燥根茎。随着重楼资源的进一步开发和利用，球药隔重楼被《四川省藏药材标准》2014年版收载，是四川省的法定重楼基原。由于其药材生长快、合格率高，比云南重楼更适应低海拔的湿热环境，海拔下限可达600m，深受广大药农青睐，近年来的种植面积迅速扩大。球药隔重楼广泛分布于我国西南及华中地区，在《中国植物志》和《FloraofChina》的分类系统中，球药隔重楼种下含1变种，即具柄重楼Parisfargesiivar.petiolata，而在李恒分类系统中，球药隔重楼含2个变种：宽瓣球药隔重楼P.faresiivar.latipetalaH.LietV.G.Soukup、短瓣球药隔重楼P.fargesiivar.brevipetalata(HuangetYang)H.Li，2者和原变种共同组成了球药隔组Sect.FargesianaeH.Li。虽然具柄重楼形态上近似于球药隔重楼，但在李恒分类系统中被置于金线重楼P.delavayiFranch.种下的变种，异名为卵叶重楼ParisdelavayiFranch.var.petiolata，这表明《中国植物志》系统与李恒系统在关于球药隔重楼的种下分类，以及具柄重楼的系统位置上存在不同意见。2017～2019年通过在主产区调查球药隔重楼人工种植业时，很多种植户介绍，在引种的球药隔重楼中不但混有具柄重楼，而且还混有另一种重楼属植物，形态上和球药隔重楼也十分相似，未开花的幼小植株更容易混淆，甚至有商贩用其冒充球药隔重楼种苗出售。但是其成熟植株的叶片较之球药隔重楼更为光亮，呈现金属光泽，经鉴定，为2017年胡光万等人发表的重楼属一新种：亮叶重楼P.nitidaGWHu,ZWang&QFWang。显然，在球药隔重楼的野生变家种过程中，种源混乱已经成为制约种植规范化和药材品质稳定的一个突出问题，但是关于球药隔重楼的研究，目前只集中于化学成分的鉴定和分析，生理活性成分的筛选，关于其品种整理和混伪品的鉴定技术仍然缺乏报道，阻碍了球药隔重楼的进一步开发利用和产业的健康发展。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种正品球药隔重楼的鉴别方法，它是采用高效液相色谱法检测重楼皂苷，其中，正品球药隔重楼含有重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷H，球药隔重楼伪品只含重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷H，或不含重楼皂苷。进一步地，所述正品球药隔重楼为球药隔重楼原变种、宽瓣球药隔重楼、短瓣球药隔重楼。进一步地，所述球药隔重楼伪品为具柄重楼、亮叶重楼。更进一步地，所述具柄重楼只含重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷H。更进一步地，所述亮叶重楼不含重楼皂苷。进一步地，所述高效液相色谱法检测重楼皂苷，包括如下步骤：1)对照品溶液的制备：分别取重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷H对照品，加甲醇溶解，制成对照品溶液；2)供试品溶液的制备：取球药隔重楼，粉碎过筛，加乙醇回流提取，提取液过滤，取续滤液作为供试品溶液；3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，色谱条件如下：色谱柱：以胆固醇基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以乙腈为流动相A；以水为流动相B；梯度洗脱程序如下：进一步地，步骤(1)中，所述重楼皂苷为重楼皂苷VII、重楼皂苷H、重楼皂苷VI、重楼皂苷I、重楼皂苷II和/或重楼皂苷V；所述对照品溶液每1ml含各重楼皂苷0.1～1mg。进一步地，步骤(2)中，所述待测样品与乙醇溶液的质量体积比为0.2～0.8g：25ml，优选0.5g：25ml；所述乙醇溶液浓度为80～90％v/v，优选95％v/v，所述回流提取温度82℃，时间30min。进一步地，所述色谱柱为COSMOSILCholester，规格4.6mmID×250mm。进一步地，步骤(3)中，所述色谱条件中检测波长203nm，柱温30℃，流速1.0mL·min-1，进样量10μL。本专利技术还提供了一种球药隔重楼正品与伪品或混伪品的鉴别方法，它包括如下步骤：a、取花期的待测样品，观察性状，其中，正品球药隔重楼药凸呈球形，叶片呈蜡样光泽，伪品具柄重楼药凸呈棒状，伪品亮叶重楼叶片呈金属光泽；b、取待测样品，粉碎，观察显微特征，其中，正品球药隔重楼淀粉粒中无脐点，球药隔重楼伪品或混伪品淀粉粒中有脐点；c、取待测样品，按照前述高效液相色谱方法检测，重楼皂苷，其中，正品球药隔重楼含有重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷H，球药隔重楼伪品只含重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷H，或不含重楼皂苷。进一步地，步骤b所述伪品为亮叶重楼，其脐点位置偏向一端；伪品为具柄重楼，其脐点位置居中。利用本专利技术提供的鉴别方法可以准确、有效的鉴别市场上常见的正品球药隔重楼及同属近缘易混种，其中正品球药隔重楼为球药隔重楼原变种、宽瓣球药隔重楼、短瓣球药隔重楼，同属近缘易混种为具柄重楼、亮叶重楼；本专利技术方法通过高效液相色谱法分析比对球药隔重楼中甾体皂苷成分——重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷H的有无，达到鉴别球药隔重楼的目的，该方法操作简单、高效快速、重现性好、成本低。高效液相色谱法与球药隔重楼外规特征及显微特征结合，能完全区别球药隔重楼正品、近缘易混种伪品和混伪品，实现正品球药隔重楼的质量控制，为球药隔重楼药材的鉴别及利用提供可靠依据，应用前景良好。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1混合对照品色谱图(1-重楼皂苷VII，2-重楼皂苷H，3-重楼皂苷VI，4-重楼皂苷II，5-重楼皂苷I，6-重楼皂苷V)图26种对照品标准曲线图图3球药隔组、亮叶重楼、具柄重楼的原植物(A球药隔重楼、B宽瓣球药隔重楼、C短瓣球药隔重楼、D亮叶重楼、E具柄重楼)图4球药隔组与亮叶重楼、卵叶重楼根茎对比图(1.短瓣球药隔重楼；2.宽瓣球药隔重楼；3.球药隔重楼原变种；4.亮叶重楼；5.卵叶重楼)图5粉末显微特征图具体实施方式下面以实施例作进一步说明，但本专利技术不局限于这些实施例。实施例1本专利技术正品球药隔重楼的鉴别1)对照品溶液的制备：取本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种正品球药隔重楼的鉴别方法，其特征在于：它是采用高效液相色谱法检测重楼皂苷，其中，正品球药隔重楼含有重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷H，球药隔重楼伪品只含重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷H，或不含重楼皂苷。/n

【技术特征摘要】
1.一种正品球药隔重楼的鉴别方法，其特征在于：它是采用高效液相色谱法检测重楼皂苷，其中，正品球药隔重楼含有重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷H，球药隔重楼伪品只含重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷H，或不含重楼皂苷。


2.根据权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于：所述正品球药隔重楼为球药隔重楼原变种、宽瓣球药隔重楼、短瓣球药隔重楼。


3.根据权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于：所述球药隔重楼伪品为具柄重楼、亮叶重楼。


4.根据权利要求3所述的鉴别方法，其特征在于：所述具柄重楼只含重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷H。


5.根据权利要求3所述的鉴别方法，其特征在于：所述亮叶重楼不含重楼皂苷。


6.根据权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于：所述高效液相色谱法检测重楼皂苷，包括如下步骤：
1)对照品溶液的制备：取重楼皂苷对照品，加甲醇溶解，制成对照品溶液；
2)供试品溶液的制备：取待测样品，粉碎，加乙醇溶液回流提取，提取液过滤，取续滤液作为供试品溶液；
3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，色谱条件如下：
色谱柱：以胆固醇基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以水为流动相A；以乙腈为流动相B；梯度洗脱程序如下：





7.根据权利要求6所述的鉴别方法，其特征在于：步骤(1)中，所述重楼皂苷为重楼皂苷VII、重楼皂苷H...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹鸿翔，饶文霞，
申请(专利权)人：成都中医药大学，
类型：发明
国别省市：四川;51