分离待测样品中甘露醇、腺苷和麦角甾醇的方法及应用技术

本发明专利技术提出了一种分离待测样品中甘露醇、腺苷和麦角甾醇的方法。该方法包括：对待测样品在固相萃取柱中依次用第一洗脱液、第二洗脱液、第三洗脱液、第四洗脱液进行洗脱处理，分别收集第一洗脱液的洗脱产物、第二洗脱液的洗脱产物以及第四洗脱液的洗脱产物，以便依次获得含有甘露醇、腺苷和麦角甾醇的洗脱液，其中，所述第一洗脱液、第二洗脱液、第三洗脱液、第四洗脱液各自独立地为甲醇水溶液，或乙醇水溶液，或乙腈水溶液，或三者的任意组合。该方法可实现待测样品中腺苷以及麦角甾醇的同时提纯，所获得的腺苷以及麦角甾醇的纯度大幅提高。

【技术实现步骤摘要】
分离待测样品中甘露醇、腺苷和麦角甾醇的方法及应用
本专利技术涉及分析检测领域，具体地，本专利技术涉及分离待测样品中甘露醇、腺苷和麦角甾醇的方法及应用，更具体地，本专利技术涉及分离待测样品中甘露醇、腺苷和麦角甾醇的方法以及检测待测样品中甘露醇、腺苷和麦角甾醇的含量的方法。
技术介绍
麦角甾醇和甘露醇是重要的医药化工原料，在食品、医药和化学工业中应用广泛。甘露醇在医药上是良好的利尿剂，降低颅内压、眼内压及治疗肾药、脱水药、食糖代用品、也用作药片的赋形剂及固体、液体的稀释剂。腺苷被公认为神经传递的重要调节剂，并涉及许多生理功能，如调节睡眠、焦虑、认知和记忆等。食用菌中含有丰富的麦角甾醇和甘露醇，腺苷也被作为诸如冬虫夏草等食用菌的质量评价指标。现有的关于同时测定食用菌中甘露醇、腺苷和麦角甾醇的技术多采用超声、热回流或加压流体萃取等方式进行分别提取、而后分别用液相进行分析或含量测定[JournalofChromatographyA,2004,1036(2):239-243；食用菌,2016(6):66-67,70；JournalofFoodandDrugAnalysis,2005,13(4):338-342；ChineseMedicine,2010,5(1):4-4；中国实验方剂学杂志,2013,19(6):161-163；上海农业学报,2014,30(2):60-64]，存在提取、分析耗时长或所需仪器精密昂贵等缺陷。目前从一种药材中同时分离制备麦角甾醇和腺苷的报道较少，且多采用传统的硅胶柱色谱法[中国中药杂志,1989,14(10):32-33；中国中药杂志,2008,33(24):2915-2917；中药材,2009(2):226-228；FoodScienceandHumanWellness,2018,7(4):282-286；中国专利技术专利CN107556358]，该方法费时费力、样品损耗大、容易污染环境。因此，同时测定食用菌中甘露醇、腺苷和麦角甾醇的方法仍需要开发和改进。
技术实现思路
为解决现有同时测定食用菌中甘露醇、腺苷和麦角甾醇技术中存在的提取、分析时间长的缺陷以及现有从一种药材中同时分离制备麦角甾醇和腺苷技术中存在的费时费力、损耗样品的缺陷，本专利技术建立了一种同步制备并快速定量检测食用菌中甘露醇、腺苷和麦角甾醇的方法。在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种分离待测样品中甘露醇、腺苷和麦角甾醇的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包括：对待测样品在固相萃取柱中依次用第一洗脱液、第二洗脱液、第三洗脱液、第四洗脱液进行洗脱处理，分别收集第一洗脱液的洗脱产物、第二洗脱液的洗脱产物以及第四洗脱液的洗脱产物，以便依次获得含有甘露醇、腺苷和麦角甾醇的洗脱液；其中，所述第一洗脱液、第二洗脱液、第三洗脱液、第四洗脱液各自独立地为甲醇水溶液，或乙醇水溶液，或乙腈水溶液，或三者的任意组合。所述第一洗脱液的洗脱产物中包含甘露醇、第二洗脱液的洗脱产物中主要包含腺苷以及第四洗脱液的洗脱产物中主要包含麦角甾醇。专利技术人通过实验发现，利用根据本专利技术实施例的方法可实现待测样品中甘露醇、腺苷以及麦角甾醇的同时完全分离，实现腺苷以及麦角甾醇的同时提纯，可将极性大于腺苷的杂质以及极性小于腺苷大于麦角甾醇的杂质完全去除，所获得的腺苷以及麦角甾醇的纯度大幅提高。根据本专利技术的实施例，上述方法还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：根据本专利技术的实施例，所述待测样品为食用菌。根据本专利技术实施例的方法特别适宜食用菌中甘露醇、腺苷以及麦角甾醇的分离和腺苷以及麦角甾醇的纯化。根据本专利技术的实施例，所述食用菌任选为冬虫夏草、发酵冬虫夏草菌粉、牛杆菌、草菇、羊肚菌或发酵虫草菌粉。根据本专利技术的实施例，所述第一洗脱液为7％-10％甲醇溶液或2％-3％乙醇溶液，所述第二洗脱液为11％-35％甲醇溶液或4％-20％乙醇溶液，所述第三洗脱液为36％-97％甲醇溶液或21％-87％乙醇溶液，所述第四洗脱液为98％-100％甲醇溶液或88％-100％乙醇溶液。根据本专利技术的具体实施例，所述第一洗脱液为7％-10％甲醇溶液，所述第二洗脱液为11％-35％甲醇溶液，所述第三洗脱液为36％-97％甲醇溶液，所述第四洗脱液为98％-100％甲醇溶液。根据本专利技术的具体实施例，所述第一洗脱液为2％-3％乙醇溶液，所述第二洗脱液为4％-20％乙醇溶液，所述第三洗脱液为21％-87％乙醇溶液，所述第四洗脱液为88％-100％乙醇溶液。根据本专利技术的具体实施例，所述第一洗脱液为9％甲醇溶液，所述第二洗脱液为30％甲醇溶液，所述第三洗脱液为96％甲醇溶液，所述第四洗脱液为100％甲醇溶液。专利技术人发现，第一洗脱液为7％-10％甲醇溶液或2％-3％乙醇溶液，既可进一步提高第二洗脱液的洗脱产物中的腺苷的纯度又会减少腺苷的损失；第二洗脱液为11％-35％甲醇溶液或4％-20％乙醇溶液，可进一步提高腺苷的纯度以及提取率；第三洗脱液为36％-97％甲醇溶液或21％-87％乙醇溶液，既可进一步提高第四洗脱液的洗脱产物中的麦角甾醇的纯度又会减少麦角甾醇的损失。进而有效提高所分离获得的腺苷、麦角甾醇的纯度。根据本专利技术的实施例，依次用至少6个柱体积的所述第一洗脱液、至少3个柱体积的所述第二洗脱液、至少6个柱体积的所述第三洗脱液以及至少6个柱体积的所述第四洗脱液对待测样品在固相萃取柱中进行洗脱处理。专利技术人发现，所述第一洗脱液、所述第二洗脱液、所述第三洗脱液以及所述第四洗脱在上述柱体积下，所得腺苷和麦角甾醇的纯度进一步提高。需要说明的是，本申请所述的“柱体积”是指保留在填料里面的溶剂体积。柱体积的算法很多。根据本专利技术的具体实施例，本专利技术的柱体积的算法是：称取1.0-1.5g填料，加入适量体积甲醇混悬(体积A)，将悬浊液倒入装有筛板的空固相萃取柱中，用重物敲打柱外壁使填料沉降至填料面不再下沉，往固相萃取柱下面放一个有刻度的离心管，然后打开固相萃取柱的活塞使甲醇流出，当甲醇到达填料液面时关闭活塞，此时离心管的体积为B。A-B即为一个柱体积。本专利技术1.0g的填料一个柱体积为1.5mL。如果加入的A较大，那么放出的B也会相应增加，B是随A变化的，(A-B)是一个固定值，即保留在柱子里面的溶剂是一定的，只受填料多少的影响。根据本专利技术的实施例，所述待测样品是以食用菌-硅藻土混合粉末的形式提供的。根据本专利技术的实施例，所述分散剂为硅藻土、弗罗里硅土、硅胶或碱性氧化铝。根据本专利技术的实施例，所述食用菌-分散剂混合粉末中的食用菌和分散剂的质量比为：1:(5-20)。根据本专利技术的具体实施例，所述分散剂为硅藻土，所述待测样品是以食用菌-硅藻土混合粉末的形式提供的。根据本专利技术的实施例，所述食用菌-硅藻土混合粉末中的食用菌和硅藻土的质量比为1:(5-20)。根据本专利技术的实施例，所述食用菌-硅藻土混合粉末是通过将食用菌和硅藻土进行1～3min的混合研磨处理后获得的。进而进一步提高研磨效率，提高食用菌的分散均匀性。根据本专利技术的实施例，所述固本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离待测样品中甘露醇、腺苷和麦角甾醇的方法，其特征在于，包括：/n对待测样品在固相萃取柱中依次用第一洗脱液、第二洗脱液、第三洗脱液、第四洗脱液进行洗脱处理，分别收集第一洗脱液的洗脱产物、第二洗脱液的洗脱产物以及第四洗脱液的洗脱产物，以便依次获得含有甘露醇、腺苷和麦角甾醇的洗脱液；其中，所述第一洗脱液、第二洗脱液、第三洗脱液、第四洗脱液各自独立地为甲醇水溶液，或乙醇水溶液，或乙腈水溶液，或三者的任意组合。/n

【技术特征摘要】
1.一种分离待测样品中甘露醇、腺苷和麦角甾醇的方法，其特征在于，包括：
对待测样品在固相萃取柱中依次用第一洗脱液、第二洗脱液、第三洗脱液、第四洗脱液进行洗脱处理，分别收集第一洗脱液的洗脱产物、第二洗脱液的洗脱产物以及第四洗脱液的洗脱产物，以便依次获得含有甘露醇、腺苷和麦角甾醇的洗脱液；其中，所述第一洗脱液、第二洗脱液、第三洗脱液、第四洗脱液各自独立地为甲醇水溶液，或乙醇水溶液，或乙腈水溶液，或三者的任意组合。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样品为食用菌；
任选地，所述食用菌为冬虫夏草、发酵冬虫夏草菌粉、牛杆菌、草菇、羊肚菌或发酵虫草菌粉。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一洗脱液为7％-10％甲醇溶液或2％-3％乙醇溶液，所述第二洗脱液为11％-35％甲醇溶液或4％-20％乙醇溶液，所述第三洗脱液为36％-97％甲醇溶液或21％-87％乙醇溶液，所述第四洗脱液为98％-100％甲醇溶液或88％-100％乙醇溶液；
任选地，所述第一洗脱液为9％甲醇溶液，所述第二洗脱液为30％甲醇溶液，所述第三洗脱液为96％甲醇溶液，所述第四洗脱液为100％甲醇溶液；
优选地，依次用至少6个柱体积的所述第一洗脱液、至少3个柱体积的所述第二洗脱液、至少6个柱体积的所述第三洗脱液以及至少6个柱体积的所述第四洗脱液对待测样品在固相萃取柱中进行洗脱处理。


4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述待测样品是以食用菌-分散剂混合粉末的形式提供的；
任选地，所述分散剂包括选自硅藻土、弗罗里硅土、硅胶和碱性氧化铝的至少之一；
任选地，所述食用菌-分散剂混合粉末中的食用菌和分散剂的质量比为1:(5-20)；
优选地，所述待测样品是以食用菌-硅藻土混合粉末的形式提供的；
任选地，所述食用菌-硅藻土混合粉末是通过将食用菌和硅藻土进行1～3min的混合研磨处理后获得的。


5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述固相萃取柱装载有ODS填料；
任选地，所述ODS填料与所述待测样品的质量比为：(1.0-1.5):(0.12-0.4)；
优选地，所述ODS填料与所述食用菌-分散剂混合粉末的质量比为：(1.0-1.5):(0.12-0.4)。


6.一种检测待测样品中甘露醇、腺苷和麦角甾醇的含量的方法，其特征在于，包括：
利用权利要求1～5任一项所述的方法对待测样品进行分离，以便...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱正明，吴姿，李春红，谢美霞，李文佳，
申请(专利权)人：东莞市东阳光冬虫夏草研发有限公司，宜昌山城水都冬虫夏草有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44