与轮状病毒产量增加有关的方法和组合物技术

公开了用于增加轮状病毒产量的组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】与轮状病毒产量增加有关的方法和组合物本申请要求2017年11月2日提交的美国临时申请号62/581,020的权益，该临时申请通过引用其全部内容并入本文。
技术介绍
疫苗是抵抗传染病最重要的防御手段之一。这些疫苗在细胞培养中产生的数量更多。为了实现这一点，将特征明显的细胞系(例如，Vero细胞)(例如)在确定成分培养基配方中生长，然后用活的或减毒的活病毒感染。随后，收集并处理含有原始病毒颗粒后代的上清液，以产生高免疫原性剂量的疫苗，然后将其分配到种群中。当前，一系列复杂的因素(种群动态、生物生产、成本等)限制了在全球范围内提供足够的免疫覆盖率的能力。特别地，疫苗的生物生产可能是昂贵的，并且提供所需数量的疫苗所需的时间会显著影响社会的医疗福利。该问题与轮状病毒疫苗特别相关。因此，需要以大大降低的成本增加疫苗产量的新技术。
技术实现思路
公开了与增加细胞中的轮状病毒产量有关的方法和组合物。所公开的方法和组合物包括减少至少一种基因的表达，所述至少一种基因选自ZNF205、NEU2、NAT9、SVOPL、COQ9、BTN2A1、PYCR1、EP30本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种增加一种或多种轮状病毒的轮状病毒产量的方法，所述方法包括用轮状病毒感染细胞；其中所述细胞包含表达减少的至少一种基因，所述至少一种基因选自ZNF205、NEU2、NAT9、SVOPL、COQ9、BTN2A1、PYCR1、EP300、SEC61G、NDUFA9、RAD51AP1、COX20、MAPK6、WDR62、LRGUK、CDK6、KIAA1683、CRISP3、GRPR、DPH7、GEMIN8、KIAA1407、RFXAP、SMARRCA4、CCDC147、AACS、CDK9、C7ORF26、ZDHHC14、RNUT1、GAB1、EMC3、FAM96A、FAM36A、LOC55831...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171102 US 62/581,0201.一种增加一种或多种轮状病毒的轮状病毒产量的方法，所述方法包括用轮状病毒感染细胞；其中所述细胞包含表达减少的至少一种基因，所述至少一种基因选自ZNF205、NEU2、NAT9、SVOPL、COQ9、BTN2A1、PYCR1、EP300、SEC61G、NDUFA9、RAD51AP1、COX20、MAPK6、WDR62、LRGUK、CDK6、KIAA1683、CRISP3、GRPR、DPH7、GEMIN8、KIAA1407、RFXAP、SMARRCA4、CCDC147、AACS、CDK9、C7ORF26、ZDHHC14、RNUT1、GAB1、EMC3、FAM96A、FAM36A、LOC55831、LOC136306、DEFB126、MGC955、EPHX2、SRGAP1、PPP5C、MET、SELM、TSPYL2、TSARG6、NDUFB2、PLAU、FLJ36888、ADORA2B、FLJ22875、HMMR、NRK、LRIT3、FLJ44691、GPR154、ZGPAT、DRD1、FLJ27505、EDG5、SNRNP40、HPRP8BP、GPA33、JDP2、FLJ20010、FOXJ1、SCT、CHD1L、SULT1C1、STN2、MRS2L、RAD51AP1、DPH7、CLPP、ZNF37、AP3B2、DEGS2、PIR、D2LIC、CNTF、PAM、MYH9、PRPF4、SLC4A11、LRRCC1、FZD9、GPR43、LTF、ARIH1、PIK3R3、PTGFRN、HSPA5BP1、ZDHHC16、KIAA1764、C19ORF14、FLNA、FLJ32786、DKFZP434K046、C9ORF112和/或PIR51。


2.根据权利要求1所述的方法，其中相对于对照，所述基因表达减少了至少15％。


3.根据权利要求1所述的方法，其中所述减少通过与以下基因的编码区可操作地连接的调控区中的突变而发生：ZNF205、NEU2、NAT9、SVOPL、COQ9、BTN2A1、PYCR1、EP300、SEC61G、NDUFA9、RAD51AP1、COX20、MAPK6、WDR62、LRGUK、CDK6、KIAA1683、CRISP3、GRPR、DPH7、GEMIN8、KIAA1407、RFXAP、SMARRCA4、CCDC147、AACS、CDK9、C7ORF26、ZDHHC14、RNUT1、GAB1、EMC3、FAM96A、FAM36A、LOC55831、LOC136306、DEFB126、MGC955、EPHX2、SRGAP1、PPP5C、MET、SELM、TSPYL2、TSARG6、NDUFB2、PLAU、FLJ36888、ADORA2B、FLJ22875、HMMR、NRK、LRIT3、FLJ44691、GPR154、ZGPAT、DRD1、FLJ27505、EDG5、SNRNP40、HPRP8BP、GPA33、JDP2、FLJ20010、FOXJ1、SCT、CHD1L、SULT1C1、STN2、MRS2L、RAD51AP1、DPH7、CLPP、ZNF37、AP3B2、DEGS2、PIR、D2LIC、CNTF、PAM、MYH9、PRPF4、SLC4A11、LRRCC1、FZD9、GPR43、LTF、ARIH1、PIK3R3、PTGFRN、HSPA5BP1、ZDHHC16、KIAA1764、C19ORF14、FLNA、FLJ32786、DKFZP434K046、C9ORF112和/或PIR51基因。


4.根据权利要求1所述的方法，其中所述基因表达的减少通过外源控制元件发生。


5.根据权利要求4所述的方法，其中所述外源控制元件是siRNA、shRNA、小分子抑制剂或反义多核苷酸。


6.根据权利要求5所述的方法，其中所述外源控制元件靶向以下基因的所述编码区：ZNF205、NEU2、NAT9、SVOPL、COQ9、BTN2A1、PYCR1、EP300、SEC61G、NDUFA9、RAD51AP1、COX20、MAPK6、WDR62、LRGUK、CDK6、KIAA1683、CRISP3、GRPR、DPH7、GEMIN8、KIAA1407、RFXAP、SMARRCA4、CCDC147、AACS、CDK9、C7ORF26、ZDHHC14、RNUT1、GAB1、EMC3、FAM96A、FAM36A、LOC55831、LOC136306、DEFB126、MGC955、EPHX2、SRGAP1、PPP5C、MET、SELM、TSPYL2、TSARG6、NDUFB2、PLAU、FLJ36888、ADORA2B、FLJ22875、HMMR、NRK、LRIT3、FLJ44691、GPR154、ZGPAT、DRD1、FLJ27505、EDG5、SNRNP40、HPRP8BP、GPA33、JDP2、FLJ20010、FOXJ1、SCT、CHD1L、SULT1C1、STN2、MRS2L、RAD51AP1、DPH7、CLPP、ZNF37、AP3B2、DEGS2、PIR、D2LIC、CNTF、PAM、MYH9、PRPF4、SLC4A11、LRRCC1、FZD9、GPR43、LTF、ARIH1、PIK3R3、PTGFRN、HSPA5BP1、ZDHHC16、KIAA1764、C19ORF14、FLNA、FLJ32786、DKFZP434K046、C9ORF112和/或PIR51基因。


7.根据权利要求1所述的方法，其中所述基因表达的减少通过使用选自由锌指核酸酶(ZFN)、大范围核酸酶、转录激活因子样效应物(例如，TALEN)、三链体、表观遗传修饰介体、CRISPR和rAAV组成的组的核酸酶，插入、替换或缺失所述编码区的一部分而发生。


8.根据权利要求1所述的方法，其中所述轮状病毒选自轮状病毒A、轮状病毒B、轮状病毒C、轮状病毒D、轮状病毒E、轮状病毒F、轮状病毒G或轮状病毒H中的至少一种物种；优选地，所述轮状病毒是G1P7、G2、P7、G3P7、G4P7、G6P1A、G9变体、RotaTeq菌株、Rotarix菌株、CDC9菌株、116E菌株或RV3-BB菌株。


9.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞是马丁达比犬肾(MDCK)细胞、MA104细胞、Vero细胞、EB66或PERC6细胞。


10.根据权利要求1所述的方法，进一步包括在适于由所述细胞产生所述病毒的条件下孵育所述感染的细胞并收获所述病毒。


11.一种增加一种或多种轮状病毒的轮状病毒产量的方法，所述方法包括用轮状病毒感染细胞或细胞系；在适于由所述细胞产生所述病毒的条件下孵育所述感染的细胞，其中所述培养基包含抑制编码区的表达的RNA多核苷酸，所述编码区选自ZNF205、NEU2、NAT9、SVOPL、COQ9、BTN2A1、PYCR1、EP300、SEC61G、NDUFA9、RAD51AP1、COX20、MAPK6、WDR62、LRGUK、CDK6、KIAA1683、CRISP3、GRPR、DPH7、GEMIN8、KIAA1407、RFXAP、SMARRCA4、CCDC147、AACS、CDK9、C7ORF26、ZDHHC14、RNUT1、GAB1、EMC3、FAM96A、FAM36A、LOC55831、LOC136306、DEFB126、MGC955、EPHX2、SRGAP1、PPP5C、MET、SELM、TSPYL2、TSARG6、NDUFB2、PLAU、FLJ36888、ADORA2B、FLJ22875、HMMR、NRK、LRIT3、FLJ44691、GPR154、ZGPAT、DRD1、FLJ27505、EDG5、SNRNP40、HPRP8BP、GPA33、JDP2、FLJ20010、FOXJ1、SCT、CHD1L、SULT1C1、STN2、MRS2L、RAD51AP1、DPH7、CLPP、ZNF37、AP3B2、DEGS2、PIR、D2LIC、CNTF、PAM、MYH9、PRPF4、SLC4A11、LRRCC1、FZD9、GPR43、LTF、ARIH1、PIK3R3、PTGFRN、HSPA5BP1、ZDHHC16、KIAA1764、C19ORF14、FLNA、FLJ32786、DKFZP434K046、C9ORF112和/或PIR51。


12.根据权利要求11所述的方法，其中所述RNA多核苷酸是siRNA、shRNA、miRNA模拟物、miRNA抑制剂或反义多核苷酸。


13.一种细胞，所述细胞包含表达减少的至少一种基因，所述至少一种基因选自ZNF205、NEU2、NAT9、SVOPL、COQ9、BTN2A1、PYCR1、EP300、SEC61G、NDUFA9、RAD51AP1、COX20、MAPK6、WDR62、LRGUK、CDK6、KIAA1683、CRISP3、GRPR、DPH7、GEMIN8、KIAA1407、RFXAP、SMARRCA4、CCDC147、AACS、CDK9、C7ORF26、ZDHHC14、RNUT1、GAB1、EMC3、FAM96A、FAM36A、LOC55831、LOC136306、DEFB126、MGC955、EPHX2、SRGAP1、PPP5C、MET、SELM、TSPYL2、TSARG6、NDUFB2、PLAU、FLJ36888、ADORA2B、FLJ22875、HMMR、NRK、LRIT3、FLJ44691、GPR154、ZGPAT、DRD1、FLJ27505、EDG5、SNRNP40、HPRP8BP、GPA33、JDP2、FLJ20010、FOXJ1、SCT、CHD1L、SULT1C1、STN2、MRS2L、RAD51AP1、DPH7、CLPP、ZNF37、AP3B2、DEGS2、PIR、D2LIC、CNTF、PAM、MYH9、PRPF4、SLC4A11、LRRCC1、FZD9、GPR43、LTF、ARIH1、PIK3R3、PTGFRN、HSPA5BP1、ZDHHC16、KIAA1764、C19ORF14、FLNA、FLJ32786、DKFZP434K046、C9ORF112和/或PIR51。


14.根据权利要求13所述的细胞，其中选自ZNF205、NEU2、NAT9、SVOPL、COQ9、BTN2A1、PYCR1、EP300、SEC61G、NDUFA9、RAD51AP1、COX20、MAPK6、WDR62、LRGUK、CDK6、KIAA1683、CRISP3、GRPR、DPH7、GEMIN8、KIAA1407、RFXAP、SMARRCA4、CCDC147、AACS、CDK9、C7ORF26、ZDHHC14、RNUT1、GAB1、EMC3、FAM96A、FAM36A、LOC55831、LOC136306、DEFB126、MGC955、EPHX2、SRGAP1、PPP5C、MET、SELM、TSPYL2、TSARG6、NDUFB2、PLAU、FLJ36888、ADORA2B、FLJ22875、HMMR、NRK、LRIT3、FLJ44691、GPR154、ZGPAT、DRD1、FLJ27505、EDG5、SNRNP40、HPRP8BP、GPA33、JDP2、FLJ20010、FOXJ1、SCT、CHD1L、SULT1C1、STN2、MRS2L、RAD51AP1、DPH7、CLPP、ZNF37、AP3B2、DEGS2、PIR、D2LIC、CNTF、PAM、MYH9、PRPF4、SLC4A11、LRRCC1、FZD9、GPR43、LTF、ARIH1、PIK3R3、PTGFRN、HSPA5BP1、ZDHHC16、KIAA1764、C19ORF14、FLNA、FLJ32786、DKFZP434K046、C9ORF112和/或PIR51的所述至少一种基因的基因表达相对于对照减少了至少15％。
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【专利技术属性】
技术研发人员：R·A·特里普，S·M·汤普金斯，卡尔·柯克伍德，
申请(专利权)人：乔治亚大学研究基金公司，默多克儿童研究所，
类型：发明
国别省市：美国;US