一种检测非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞EGFR基因突变的试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术提供了一种检测非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞EGFR基因突变的试剂盒及检测方法，属于分子生物学技术领域。该试剂盒包括稀释液、脱色液、染色液A、染色液B、EGFR（小鼠）一抗、山羊抗小鼠IgG/HRP、0.1%Triton X‑100、0.3%H

【技术实现步骤摘要】
一种检测非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞EGFR基因突变的试剂盒及检测方法
本专利技术提供了一种检测非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞EGFR基因突变的试剂盒及检测方法，属于分子生物学

技术介绍
肺癌是导致癌症患者死亡的主要恶性肿瘤之一，在我国，肺癌的发病率和死亡率均居第一位。非小细胞肺癌（NSCLC）约占全部肺癌的85%，而这其中超过70%的NSCLC患者在确诊时已为晚期。尽管手术和放化疗等治疗技术不断提高，NSCLC患者5年生存率仍低于20%，主要死因包括局部复发与远处转移。循环肿瘤细胞（Circulatingtumorcell，CTC）是从实体肿瘤脱落进入外周血液循环的肿瘤细胞，自1989年被发现以来，目前已有多种方法用于外周血循环肿瘤细胞的检测。近期研究表明，其检测对于评估肿瘤患者尤其是晚期肿瘤患者的预后以及选择合适的个体化治疗具有重要的临床意义。因CTC检测具有微创、实时检测等特点，被称为肿瘤的“液态活检”。随着分子生物学的发展，近年来以表皮生长因子受体（epidermalgrowthfactorr本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞EGFR基因突变的试剂盒，其特征在于，包括稀释液45mL、脱色液1mL、染色液A 0.5mL、染色液B 1mL、EGFR（小鼠）一抗100μL、山羊抗小鼠 IgG/HRP 100μL、0.1% Triton X-100 100μL、0.3% H

【技术特征摘要】
1.一种检测非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞EGFR基因突变的试剂盒，其特征在于，包括稀释液45mL、脱色液1mL、染色液A0.5mL、染色液B1mL、EGFR（小鼠）一抗100μL、山羊抗小鼠IgG/HRP100μL、0.1%TritonX-100100μL、0.3%H2O2100μL、试剂A0.5mL、试剂B1mL、6×PBS缓冲液60mL；所述PBS缓冲液的pH值为7.4。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述稀释液是由1mmol/LEDTA+0.1%BSA+0.1%海藻糖+0.2%聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物组成，所述基础液为Tris-HCl缓冲剂。


3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述脱色液是由95%酒精与100%二甲苯按容积比1:1组成。


4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述染色液A为DAB染色液；所述染色液B为苏木素染色液。


5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂A为0.6%的羟丙基甲基纤维素水溶液；所述试剂B为乙醇和1，2-丙二醇按照体积比3：1组成。


6.一种利用权利要求1-5任一项所述的试剂盒非诊断目的检测非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞EGFR基因突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）利用膜过滤装置分离获取无法获得组织标本的晚期或复发非小细胞肺癌患者外周血中的CTC：采集无法获取组织标本的晚期或复发非小细胞肺癌患者外周血：肘正中静脉外周血5ml；
（2）外周血样预处理：将采集的外周血样采用稀释液进行10倍稀释，稀释后加多聚甲醛固定外周血样10分钟，固定终浓度为0.25%；
（3）利用膜过滤分离肿瘤细胞装置过滤外周血样，分离获得...

【专利技术属性】
技术研发人员：王振丹，黄宁，李胜，刘智鸿，李浩，
申请(专利权)人：山东省肿瘤防治研究院山东省肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：山东;37