【技术实现步骤摘要】
一种灵芝孢子粉及其产品中甾醇和脂肪酸类成分的HPLC测定方法
本专利技术涉及药物分析领域,具体是建立一种灵芝孢子粉及其产品中甾醇和脂肪酸类成分的HPLC测定方法。
技术介绍
灵芝是一种药用价值很高的名贵真菌,灵芝孢子是灵芝生长成熟期从菌褶弹射出来的卵形生殖细胞,含有脂肪酸类、三萜酸类、甾醇、多糖、核苷、生物碱等多种化学成分。灵芝孢子粉具有免疫调节、抗肿瘤、抗炎等多种生物活性,越来越多地被用于保健和医药产品之中。近年来,随着孢子粉收集和破壁技术的发展,灵芝孢子粉的药理作用已经受到消费者的广泛认可,目前灵芝孢子粉保健食品的市场占有率非常高,主要以灵芝孢子粉散剂和灵芝孢子油胶囊为主。现有的关于灵芝孢子粉的质量评价标准比较缺乏,常用灵芝子实体中的活性成分三萜或多糖作为质控指标,大量的研究已经证明,子实体中相关成分的测定方法并不适合灵芝孢子粉的测定,结果偏差大、呈现假阳性。为了更客观的评价和反映各种因素等对灵芝孢子粉的质量影响、控制其产品质量、规范产品优劣等级,亟需寻找更多可评价灵芝孢子粉质量的指标性成分,并建立相应的分析定量方法,为灵芝孢子粉及其产品的质量评价提供依据。灵芝孢子粉中脂溶性成分的含量高于20%,主要包括甘油三酯类化合物、游离脂肪酸、甾醇、脂溶性维生素和极微量的三萜类成分等。有学者认为,灵芝孢子粉尤其是灵芝孢子油产品的药理作用与其含有丰富的脂肪酸特别是不饱和脂肪酸如油酸、亚油酸有密切关系。另有研究表明,甾醇的抗肿瘤作用不容忽视,已有多种甾醇类单体成分报道具有抗肿瘤活性,如麦角甾醇、过氧化麦 ...
【技术保护点】
1.一种灵芝孢子粉及其产品中甾醇和脂肪酸类成分的HPLC测定方法,其特征在于,包括如下步骤:将灵芝孢子粉及其产品加入溶剂提取后,运用蒸发光散射检测器,通过高效液相色谱法对灵芝孢子粉及其产品中的甾醇和脂肪酸成分的含量进行测定。/n
【技术特征摘要】
1.一种灵芝孢子粉及其产品中甾醇和脂肪酸类成分的HPLC测定方法,其特征在于,包括如下步骤:将灵芝孢子粉及其产品加入溶剂提取后,运用蒸发光散射检测器,通过高效液相色谱法对灵芝孢子粉及其产品中的甾醇和脂肪酸成分的含量进行测定。
2.根据权利要求1的一种灵芝孢子粉及其产品中甾醇和脂肪酸类成分的HPLC测定方法,其特征在于,具体操作过程包括以下步骤:
(1)灵芝孢子粉及其产品的预处理步骤,将灵芝孢子粉或相关产品加入溶剂浸提,得到浸提液,离心,得上清液,经过滤后得到待测样品溶液;
(2)高效液相色谱检测步骤:采用蒸发光散射检测器,通过高效液相色谱仪对待测样品溶液进行高效液相色谱分析;
(3)指标成分是甾醇和脂肪酸类成分:其中甾醇类成分为啤酒甾醇、麦角甾醇过氧化物、麦角甾醇和星鱼甾醇;脂肪酸类成分为油酸、亚油酸、棕榈酸。
3.根据权利要求1-2的一种灵芝孢子粉及其产品中甾醇和脂肪酸类成分的HPLC测定方法,其特征在于,所述步骤(1)灵芝孢子粉及其产品的预处理步骤,浸提方法包括以下步骤:所用浸提溶剂为乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正己烷、石油醚、异丙醇、己烷:异丙醇(V/V=3:2)、己烷:乙醇(V/V=1:1)中的一种;提取方式为超声提取、加热震荡提取,优选超声提取;提取时间为10-90min,优选30min;料液比为1:10-1:50,其中孢子粉样品优选1:10,孢子油样品优选1:30;浸提次数包括一次浸提或反复浸提。
4.根据权利要求1-2的一种灵芝孢子粉及其产品中甾醇和脂肪酸类成分的HPLC测定方法,其特征在于,所述步骤(1)灵芝孢子粉及其产品的预处理步骤,浸提液的处理包括以下步骤:提取完成后,浸提液冷却至室温,摇匀,先经12000r/min离心5min,取上清液,经0.22μm微孔有机相滤膜过滤,备用。
5.根据权利要求1-2的一种灵芝孢子粉及其产品中甾醇和脂肪酸类成分的HPLC测定方法,其特征在于,所述步骤(2)高效液相色谱法包括以下步骤:
检测器为蒸发光散射检测器;色谱柱为反相C18色谱柱,流动相溶液成分为乙腈-甲醇-水-异丙醇四相梯度洗脱,其中水中冰醋酸的浓度为0.00%-0.02%,优选0.01%;柱温为20-40℃,优选30℃;流速0.8-1.2ml/min,优选1.0ml/min;进样体积为5-50μL,优选20μL。
6.根据权利要求5的一种灵芝孢子粉及其产品中甾醇和脂肪酸类成分的HPLC测定方法,其特征在于,蒸发光散射检测器的设定包括以下参数:
增益为100-1000,优选500;气体压力为20-40...
【专利技术属性】
技术研发人员:唐庆九,王金艳,冯娜,周帅,杨志空,张劲松,严培兰,王晨光,
申请(专利权)人:上海市农业科学院,上海科立特农科集团有限公司,
类型:发明
国别省市:上海;31
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