益生菌中药共培提取液、制备方法以及应用技术

本发明专利技术公开了一种益生菌中药共培提取液、制备方法以及应用，涉及益生菌发酵技术领域。所述的益生菌中药共培提取液是由益生菌通过分别与石斛和北虫草提取液制成的培养基共同培养发酵后，益生菌菌体经过高压破碎，所得提取液的抗炎作用显著提升，提示益生菌菌体抗炎作用机制与部分中药抗炎机制可能具有协同作用；所得提取液可以作为活性成分，通过特定方法添加到护肤品、个人护理和卫生用品等。基于益生菌中药共培提取液具有的抗炎作用，其在保健食品、个人护理和化妆品等方面有一定的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
益生菌中药共培提取液、制备方法以及应用
本专利技术涉及微生物发酵
，尤其涉及益生菌中药共培提取液、制备方法以及应用。
技术介绍
炎症(inflammation)是机体应对刺激的一种防御反应，表现为红、肿、热、痛和功能障碍。任何能够引起组织损伤的因素都可以成为炎症的原因，即致炎因子(inflammatoryagent)；致炎因子可归纳为以下几类：生物性因子、物理性因子、化学性因子等，但归根结底，炎症的发生与生物体内促炎性NF-κB通路的激活有重要联系。早在1998年，就有学者发现，在炎症患者体内，炎症活动区域中NF-κB亚基p65的表达水平比其他区域要高。在非炎症状态下，NF-κB保持与抑制性蛋白IκB复合的非活性细胞溶质形式，一旦接收到活化NF-κB信号，它的抑制子IκB就被磷酸化并导向通过泛素蛋白酶体途径的降解。NF-κB由抑制到释放并转运到细胞核中，导致很多细胞因子和趋化因子基因、细胞附着分子和免疫受体、炎症反应的所有重要介体的转录激活。在时代的发展下，益生菌越来越多地进入大众的视野。益生菌被定义为有益的活性微生物，在许多胃肠炎症例如炎性肠病(IBD)、肠炎、轮状病毒和抗生素有关的腹泻等等的治疗中发挥作用。此外，也有文献报道益生菌还具有促进消化吸收、提高免疫力，提高机体抗氧化水平和养殖水质的调节等功能。皮肤微生态是人体4个微生态系统(口腔、皮肤、泌尿、胃肠道)之一，也称为肌肤微生态。微生态的失衡，会造成皮肤产生湿疹、痤疮或者痕痒。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种可以促进益生菌抗炎作用的发酵方法，以及具有抗炎功效的益生菌共培发酵液，该发酵液可以与化妆品原料或者皮肤药物复配，可以用于改善肌肤的微生态。为了解决上述问题，本专利技术提出以下技术方案：一种益生菌中药共培提取液，由中药材与益生菌共同发酵而得，所述益生菌中药共培提取液具有抗炎作用。优选地，所述中药材包括石斛和/或北虫草。优选地，所述石斛、北虫草均为生药浓度0.01-20g/L的水提物。本专利技术提供的所述的益生菌中药共培提取液，在抑制由脂多糖诱导的RAW264.7细胞的炎症反应的应用。进一步地，所述的益生菌中药共培提取液在降低小鼠巨噬细胞(RAW264.7)中炎症因子NF-κB以及IL-6的表达量的应用。具体地，利用所述的益生菌中药共培提取液的抗炎作用在制备抗炎药物中的应用。本专利技术实施例还提供制备所述的益生菌中药共培提取液的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，在厌氧箱内挑取益生菌单菌落并接种于MRS培养基，在37℃，150～180rpm的厌氧环境中培养至对数生长期，得种子液；然后将种子液接种于中药培养基中，并于37℃，150～180rpm的厌氧环境中培养；根据益生菌生长曲线回收菌液；所述厌氧环境中H2:CO2:N2的体积比为1:1:8。S2，将所述菌液离心，去除培养液，保留菌体；S3，菌体在匀浆前，菌体与溶剂以1：5-1：100(W/V)的比例稀释，所述溶剂为水或乙醇；S4，高压匀浆或超声破碎，高压匀浆的破碎条件为10～50kpsi压力；S5，离心，取上清液，即为水提或醇提所得的所述益生菌中药共培提取液。优选地，步骤S3中，菌体与溶剂以1：15-50(W/V)的比例稀释。步骤S4中，破碎条件是100w超声，或10～50kpsi高压匀浆破碎一次。进一步地，所述的中药培养基包括MRS培养基以及中药材，中药培养基含有的中药材的生药浓度为0.01～20g/L。进一步地，所述步骤S3中，水提：以水为溶剂，水提部分用0.22μm滤膜过滤；醇提：以纯度100％的乙醇为溶剂提取；回收并干燥乙醇层，加入DMSO溶解。所述益生菌选自唾液乳杆菌、约氏乳杆菌、发酵乳杆菌、鼠李糖乳杆菌A、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌B、干酪乳杆菌B、加氏乳杆菌、德氏乳杆菌、婴儿双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、长双歧杆菌、青春双歧杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、动物双歧杆菌、嗜热链球菌或短双歧杆菌。需要说明的是，本专利技术应用所述的益生菌中药共培提取液制备方法，从上述的益生菌中筛选出抗炎活性较强的菌种。通过原料筛选，菌株培养及抗炎活性三方面进行对比实验，从19种益生菌菌株筛选出三种抗炎活性较强的益生菌：唾液酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌和副干酪乳杆菌。本专利技术还提供所述的益生菌中药共培提取液在具有抗炎功效的膏类护肤产品中的应用。进一步地，本专利技术提供一种护肤膏，配方成分中包括所述的益生菌中药共培提取液，优选地，包括益生菌与石斛的共培发酵液或益生菌与北虫草共培发酵液。本专利技术还提供所述的益生菌中药共培提取液，利用所述的益生菌中药共培提取液的抗炎功效用于临床疾病的预防与治疗。本专利技术还提供所述的益生菌中药共培提取液，在制备具有抗炎功效的药品、保健品、护肤品或化妆品中的应用，制成任何一种药品、保健品、护肤品、化妆品等，并用于商业用途。与现有技术相比，本专利技术所能达到的技术效果包括：本专利技术提供的益生菌中药共培提取液是由中药材与益生菌共同发酵得到，具有抗炎作用，经实验证明，该抗炎效果较单一的益生菌抗炎作用增强、较中药抗炎作用增强，表明益生菌的抗炎作用通过与中药材共同发酵后得到增强，具有协同作用。进一步地，本专利技术利用益生菌与中药共培养发酵，收集发酵后的菌体，经过高压破碎，取得的益生菌中药共培提取液，比单独益生菌抗炎作用明显增强。该益生菌中药共培提取液可以与化妆品原料或者皮肤药物复配，可以用与改善肌肤的微生态。本专利技术提供的益生菌中药共培提取液，利用其抗炎功效，可用于制备具有抗炎功效的任意药品、保健品、护肤品或化妆品等领域，用于临床疾病的预防与治疗等。附图说明·图1：19种益生菌采用不同提取工艺得到的提取液抗炎活性比较；·图2：19种益生菌中药共培提取液与单独中药提取液的抗炎活性比较；·图3A：唾液乳杆菌与不同中药提取液共培发酵液的抗炎活性比较；·图3B：鼠李糖乳杆菌与不同中药提取液共培发酵液的抗炎活性比较；·图3C：副干酪乳杆菌与不同中药提取液共培发酵液的抗炎活性比较；·图4A：唾液乳杆菌与不同浓度的石斛共培发酵的抗炎活性比较；·图4B：唾液乳杆菌与不同浓度的北虫草共培发酵的抗炎活性比较；·图4C：不同浓度的唾液乳杆菌的抗炎活性比较；·图5：使用酶联免疫吸附测定法检测不同发酵方法的益生菌抗炎活性。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。本专利技术提供的益生菌中药共培提取液以下也称“共培液”、“水提液”、“水提物”、“醇提液”或“醇提物”。实施例1：益生菌提取液的制备工艺，通过以下步骤制备而成：1.发酵，发酵的培养基为MRS培养基。2.离心去除培养液，保留菌体。3.菌体在高压匀浆前与水或乙本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种益生菌中药共培提取液，其特征在于，由中药材与益生菌共同发酵得到，所述益生菌中药共培提取液具有抗炎作用。/n

【技术特征摘要】
1.一种益生菌中药共培提取液，其特征在于，由中药材与益生菌共同发酵得到，所述益生菌中药共培提取液具有抗炎作用。


2.如权利要求1所述的益生菌中药共培提取液，其特征在于，所述中药材包括石斛、北虫草。


3.如权利要求2所述的益生菌中药共培提取液，其特征在于，所述石斛、北虫草均为生药浓度0.01-20g/L的水提物。


4.如权利要求1-3任一项所述的益生菌中药共培提取液，在抑制由脂多糖诱导的RAW264.7细胞的炎症反应的应用。


5.如权利要求4所述的应用，所述的益生菌中药共培提取液可降低小鼠巨噬细胞RAW264.7中炎症因子NF-κB以及IL-6的表达量。


6.制备权利要求1-5任一项所述的益生菌中药共培提取液的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1，在厌氧箱内挑取益生菌单菌落并接种于MRS培养基，在37℃，150～180rpm的厌氧环境中培养至对数生长期，得种子液；然后将种子液接种于中药培养基中，并于37℃，150～180rpm的厌氧环境中培养；根据益生菌生长曲线回收菌液；所述厌氧环境中H2:CO2:N2的体积比为1:1:8；
S2，将所述菌液离心，去除培养液，保留菌体；
S3，菌体在匀浆前，菌体与溶剂以1：5-1：100(W/V)的比例稀释，所述溶剂为水或乙醇；
S4，高压匀浆或超声破碎，高压匀浆的破碎条件为10～50kpsi压力；
S5，离心，取上清液，即为水提或...

【专利技术属性】
技术研发人员：詹华強，赵利生，赵键玮，董婷霞，伍嘉慧，郑钟毓，梁嘉荣，
申请(专利权)人：金活医药集团有限公司，
类型：发明
国别省市：中国香港;81