一组用于预测三阴乳腺癌免疫联合抗血管生成治疗效果的标志物及其应用和试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一组用于预测三阴乳腺癌免疫联合抗血管生成治疗效果的血清学生物标志物及其应用和试剂盒，属于生物医药技术领域。本发明专利技术所述生物标志物分别为HGF、IL‑8、CD152、TIM‑3、FGF‑2和NGF‑beta。利用本发明专利技术提供的HGF、IL‑8、CD152、TIM‑3、FGF‑2、NGF‑beta一组生物标志物或者其制备得到的试剂盒进行三阴乳腺癌免疫联合抗血管生成治疗效果的预测，具有检测快速、准确、费用低等优点，应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】
一组用于预测三阴乳腺癌免疫联合抗血管生成治疗效果的标志物及其应用和试剂盒
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一组用于预测乳腺癌免疫联合抗血管生成治疗效果的标志物及其应用和试剂盒。
技术介绍
随着肿瘤学、免疫学以及分子生物学等相关学科的迅速发展和交叉渗透，肿瘤免疫治疗的研究取得了突破性进展，逐步成为肿瘤治疗领域最有发展前景的研究方向之一。免疫治疗成为继手术、放射治疗和化学治疗之后又一种重要的抗肿瘤治疗手段。目前肿瘤免疫治疗主要包括疫苗、免疫检查点抑制剂治疗、过继性免疫细胞治疗、细胞因子治疗等，其中免疫检查点阻断疗法以其显著的临床疗效而备受瞩目。目前研究和应用得最广泛的免疫检查点分子包括CTLA4和PD-1/PD-L1。目前，美国食品与药物管理局(FDA)批准了多种免疫检查点抑制剂用于不同种类实体瘤(黑色素瘤、肺癌、胃癌、结直肠癌等)和血液恶性肿瘤的治疗。在临床前期研究，单一的免疫治疗在一定程度上能够缓解既往治疗耐受的晚期癌症进展，但免疫检查点抑制剂单药治疗的效果并不是很理想。为寻求患者生存获益的最大化，目前有较多的临床研究趋向于多种治疗方式的联合应用。化疗对免疫微环境有一定的改善作用，增强树突状细胞的活化，抑制骨髓源性抑制细胞及调节性T细胞的活性等，从而增强细胞免疫。抗血管生成与免疫治疗联用具有增强免疫细胞抗肿瘤作用。多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)抑制可通过促进Ⅰ型干扰素的活化、增加肿瘤新抗原等多种机制改善免疫微环境。免疫检查点抑制剂与CDK4/6抑制剂存在协同作用，促进T细胞活化和肿瘤组织的浸润，提高肿瘤细胞抗原表达的效率等。免疫治疗作为近来研究的热点及积极治疗乳腺癌的尝试也取得很大进展，目前多种免疫治疗方式联合化疗或抗血管生成等其他治疗方式的临床实验已广泛开展，是治愈乳腺肿瘤的新希望。晚期三阴性乳腺癌免疫单药治疗的客观缓解率不理想，提示联合用药可能是治疗乳腺癌的关键。免疫检查点抑制剂治疗通过近三十年的研究及临床应用，已经有越来越多的患者从中获益，然而由于只有一部分患者对免疫检查点阻断疗法比较敏感，筛选出可预测治疗效果和不良事件的生物标志物是一项至关重要的挑战。目前比较常用的疗效预测的生物标志物包括PD-1/PD-L1的表达量、微卫星不稳定(MSI)、错配基因修复缺失(MMR)、肿瘤突变负荷(TMB)、肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)等。然而，目前的各种生物标志物都有其局限性，并不能完全准确地预测患者的临床疗效和获益情况。因此，探索和开发预测癌症免疫治疗效果的生物标志物具有重要的临床意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一组用于预测三阴乳腺癌免疫联合抗血管生成治疗效果的血清学生物标志物及其应用和试剂盒。本专利技术提供了一组用于预测三阴乳腺癌免疫联合抗血管生成治疗效果的血清学生物标志物，所述血清学生物标志物包括HGF、IL-8、CD152、TIM-3、FGF-2和NGF-beta。本专利技术还提供了上述技术方案所述的血清学生物标志物在制备用于预测癌症免疫治疗效果的试剂盒中的应用。本专利技术还提供了一种用于预测三阴乳腺癌免疫联合抗血管生成治疗效果的试剂盒，所述试剂盒中包括：分别包被有HGF、IL-8、CD152、TIM-3、FGF-2、NGF-beta捕获抗体的编码微球，生物素分别标记的HGF、IL-8、CD152、TIM-3、FGF-2、NGF-beta检测抗体，链霉亲和素标记的藻红蛋白。优选的，所述HGF、IL-8、CD152、TIM-3、FGF-2和NGF-beta捕获抗体的克隆号分别为24516、3IL8-H10、A3.6B10.G1、024、10060和25623。优选的，所述IL-8、CD152、TIM-3和FGF-2检测抗体的克隆号分别为I8-S2、L3D10、10C10和10043，所述HGF和NGF-beta的检测抗体分别为多克隆抗体。优选的，所述编码微球包括羧基微球。优选的，所述生物素包括N-羧琥珀酰亚氨活化生物素。优选的，所述包被捕获抗体的编码微球的制备方法包括：将所述HGF、IL-8、CD152、TIM-3、FGF-2和NGF-beta捕获抗体分别与对应的编码微球偶联，分别得到包被有HGF、IL-8、CD152、TIM-3、FGF-2和NGF-beta捕获抗体的编码微球。优选的，所述生物素标记的检测抗体的制备方法包括：分别在HGF、IL-8、CD152、TIM-3、FGF-2和NGF-beta检测抗体上连接生物素，得到分别被生物素标记的HGF、IL-8、CD152、TIM-3、FGF-2和NGF-beta检测抗体。有益效果：本专利技术提供了一组用于预测乳腺癌免疫联合抗血管生成治疗效果的血清学生物标志物，所述生物标志物为HGF、IL-8、CD152、TIM-3、FGF-2、NGF-beta。实验表明，对免疫检查点阻断联合抗血管生成治疗有效(CR/PR)的患者，其治疗前血清中HGF、IL-8的基线浓度均显著低于对该治疗无效(SD/PD)的患者；同时，对免疫检查点阻断联合抗血管生成治疗有效(CR/PR)的患者，其血清中CD152、TIM-3两种细胞因子浓度变化(用药2月与基线比较)显著高于对该治疗无效(SD/PD)的患者；而FGF-2、NGF-beta、IL-8三种细胞因子浓度变化(用药2月与基线比较)显著低于对该治疗无效(SD/PD)的患者。本专利技术还提供了利用上述生物标志物制备用于预测乳腺癌免疫联合抗血管生成治疗效果的试剂盒的应用，所述试剂盒包括分别包被有HGF、IL-8、CD152、TIM-3、FGF-2、NGF-beta捕获抗体的编码微球、生物素分别标记的HGF、IL-8、CD152、TIM-3、FGF-2、NGF-beta检测抗体和链霉亲和素标记的藻红蛋白。利用本专利技术提供的HGF、IL-8、CD152、TIM-3、FGF-2、NGF-beta生物标志物或者其制备得到的试剂盒进行三阴乳腺癌免疫检查点阻断联合抗血管生成治疗效果的预测，具有检测快速、准确、费用低等优点，应用前景广阔。附图说明图1-6依次为检测血清中生物标志物HGF、IL-8、CD152、TIM-3、FGF-2、NGF-beta的标准曲线示意图；图7分别为液相芯片试剂盒检测到两组TNBC肿瘤患者免疫检查点阻断联合抗血管生成治疗前血清中HGF、IL-8的浓度的差异图(疗效有效组各细胞因子的浓度均显著低于无效组)；图8分别为HGF、IL-8对应TNBC患者免疫检查点阻断联合抗血管生成治疗的有效性预测的受试者工作特征曲线(ROC曲线)，每个细胞因子对应的曲线下面积(AUC)、95％置信区间(95％CI)和P值见图示；图9-10依次为肿瘤患者治疗前后血清中FGF-2,IL-8,CD152,NGF-beta,TIM-3五种生物标志物的浓度变化值，【变化值定义：(治疗后-治疗前)/治疗前】对三阴性乳腺癌患者免疫检查点阻断联合抗血管生成治疗疗效进行预测的效果(疗效好的患者(PR/CR)归为有效组，疗效差的患本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一组用于预测三阴乳腺癌免疫联合抗血管生成治疗效果的血清学生物标志物，其特征在于，所述血清学生物标志物包括HGF、IL-8、CD152、TIM-3、FGF-2和NGF-beta。/n

【技术特征摘要】
1.一组用于预测三阴乳腺癌免疫联合抗血管生成治疗效果的血清学生物标志物，其特征在于，所述血清学生物标志物包括HGF、IL-8、CD152、TIM-3、FGF-2和NGF-beta。


2.权利要求1所述的血清学生物标志物在制备用于预测乳腺癌免疫联合抗血管生成治疗效果的试剂盒中的应用。


3.一种用于预测三阴乳腺癌免疫联合抗血管生成治疗效果的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括：分别包被有HGF、IL-8、CD152、TIM-3、FGF-2、NGF-beta捕获抗体的编码微球，生物素分别标记的HGF、IL-8、CD152、TIM-3、FGF-2、NGF-beta检测抗体，链霉亲和素标记的藻红蛋白。


4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述HGF、IL-8、CD152、TIM-3、FGF-2和NGF-beta捕获抗体的克隆号分别为24516、3IL8-H10、A3.6B10.G1、024、10060和25623。


5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述IL-8、CD152、...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘强，刘洁琼，梁丹丹，陈欢，张恒辉，
申请(专利权)人：臻悦生物科技江苏有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32