一种痘苗病毒的冻干工艺制造技术

本发明专利技术涉及一种痘苗病毒的冻干工艺，所述冻干工艺包括如下步骤：步骤1：痘苗病毒的选取；步骤2：痘苗病毒液的取样、分装；步骤3：预冻；步骤4：升华干燥；步骤5：解析干燥；步骤6：冻干结束；步骤7：冻干病毒保存。本发明专利技术的优点在于：本发明专利技术痘苗病毒的冻干工艺，能够提高痘苗病毒传代遗传稳定性低，减少传代次数并降低生产成本，即毒种生产产量可提高一倍，生产成本降低40%。

【技术实现步骤摘要】
一种痘苗病毒的冻干工艺
本专利技术涉及一种冻干技术领，特别涉及一种痘苗病毒的冻干工艺。
技术介绍
免疫用的痘苗病毒液是通过家兔睾丸接种和传代建立种子库，制备为含痘苗病毒的兔睾丸组织培养物。现有技术采用兔睾丸组织混悬液于-80℃超低温冷柜中保存，保存期限为24个月。在实际生产中将这种冷冻的病毒液稀释后用于兔皮注射来生产相关的药物。这种保存方式，使痘苗病毒传代的次数较多，生产成本较高，带来病毒变异的风险。冷冻干燥技术是目前保持微生物、动物组织、细胞及蛋白质等活性物质生物活性的一个有效、普遍的方法，冷冻真空干燥活疫苗是将活疫苗分装后放入冷冻真空干燥机中，经预先冻结，在低温和真空条件下使水分升华、干燥成疏松多孔状、体积不变的干燥制品。由于冻干是在低温真空状态下完成的，可以保护蛋白质不变性，减少氧化环节，使微生物和某些酶活性不受影响。同时冻干疫苗在真空状态下封口保存，其代谢活动降低，处于休眠状态，从而能长时间存活，具有保存时间长，使用时加稀释液能迅速溶解，复原性状不变等优点，是目前活疫苗最常用的保存方法。冻干品可以长时间储存于4℃～25℃且便于传送，比毒种液在-80℃下保存具有明显的优势，提高了病毒传代的遗传稳定性，减少了传代次数，降低了生产成本。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种能够提高痘苗病毒传代遗传稳定性低，减少传代次数并降低生产成本的痘苗病毒的冻干工艺。为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案为：一种痘苗病毒的冻干工艺，其创新点在于：所述冻干工艺包括如下步骤：>步骤1：痘苗病毒的选取：将含有痘苗病毒的兔睾丸组织培养物接种于健康公兔的睾丸上，待发炎变硬后采集睾丸，经捣碎、反复冻融、离心后所得的上清液，并按照质量标准对上述提取的含有痘苗病毒的上清液进行外观、无菌、病毒含量、中和试验及综合检查，选取检定合格的病毒液，并进行冷冻；步骤2：痘苗病毒液的取样、分装：取出-80℃冷冻的病毒液，在生物安全柜中精密量取25～35毫升于专用的灭菌西林瓶中，分装结束后迅速进行冷冻真空干燥；步骤3：预冻：将上述灭菌西林瓶置于冻干架上放入冷冻干燥机中，于冷阱中预冻至-45℃～-55℃；步骤4：升华干燥：打开真空泵，使冻干架在冷阱中处于低压下，利用时间-温度程序来获得所需的制品温度，真空达到后按设定的搁板温度启动加热程序；步骤5：解析干燥：继续在低压低温下加热搁板，当物料温度达到25℃时再稳定数小时，以保证样品充分干燥；步骤6：冻干结束：压紧瓶塞，取出冻干瓶，消毒外表面，轧上铝盖做长期保存；步骤7：冻干病毒保存：于2～8℃避光保存。本专利技术的优点在于：本专利技术痘苗病毒的冻干工艺，能够提高痘苗病毒传代遗传稳定性低，减少传代次数并降低生产成本，即毒种生产产量可提高一倍，生产成本降低40％。具体实施方式下面的实施例可以使本专业的技术人员更全面地理解本专利技术，但并不因此将本专利技术限制在所述的实施例范围之中。实施例本实施例痘苗病毒的冻干工艺，该冻干工艺包括如下步骤：步骤1：痘苗病毒的选取：将含有痘苗病毒的兔睾丸组织培养物接种于健康公兔的睾丸上，待发炎变硬后采集睾丸，经捣碎、反复冻融、离心后所得的上清液，并按照质量标准对上述提取的含有痘苗病毒的上清液进行外观、无菌、病毒含量、中和试验及综合检查，选取检定合格的病毒液，并进行冷冻；冻干毒种进行以下检定，确认合格后说明冻干成功：(1)冻干后的物理性状(2)冻干复水后检定：复水性能、无菌检验、病毒含量、安全检验、外源病毒因子检测。冻干痘苗病毒测试报告步骤2：痘苗病毒液的取样、分装：取出-80℃冷冻的病毒液，在生物安全柜中精密量取25～35毫升于专用的灭菌西林瓶中，分装结束后迅速进行冷冻真空干燥；步骤3：预冻：将上述灭菌西林瓶置于冻干架上放入冷冻干燥机中，于冷阱中预冻至-45℃～-55℃；步骤4：升华干燥：打开真空泵，使冻干架在冷阱中处于低压下，利用时间-温度程序来获得所需的制品温度，真空达到后按设定的搁板温度启动加热程序；步骤5：解析干燥：继续在低压低温下加热搁板，当物料温度达到25℃时再稳定数小时，以保证样品充分干燥；步骤6：冻干结束：压紧瓶塞，取出冻干瓶，消毒外表面，轧上铝盖做长期保存；步骤7：冻干病毒保存：于2～8℃避光保存。毒种悬浮液冻干放大试验试验目的：通过放大冻干痘苗种子的制备工艺，获得理想的保持原有生物活性的痘苗种子，减少传代次数，延长保存期限。冻干机型：LYO-0.2备注：*所有规格的西林瓶、四叉橡胶胶塞、铝盖用纯化水洗涤干净后，用电热干燥箱烘干除水，包装密封，入电热恒温鼓风干燥箱(250℃，1h)或高压灭菌锅(121℃，30min)灭菌备用。冻干结果通过痘苗病毒毒力相关基因序列测定、细胞感染实验、噬斑实验、鸡胚感染实验和小鼠感染实验，分别对冻干前后痘苗病毒的毒力、安全性及稳定性进行了评价。痘苗病毒经冷冻干燥处理后在稳定性、毒力及安全性方面与未经冻干处理的痘苗病毒保持一致，批次间也未观察到显著差异。以上显示和描述了本专利技术的基本原理和主要特征以及本专利技术的优点。本行业的技术人员应该了解，本专利技术不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本专利技术的原理，在不脱离本专利技术精神和范围的前提下，本专利技术还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本专利技术范围内。本专利技术要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种痘苗病毒的冻干工艺，其特征在于：所述冻干工艺包括如下步骤：/n步骤1：痘苗病毒的选取：将含有痘苗病毒的兔睾丸组织培养物接种于健康公兔的睾丸上，待发炎变硬后采集睾丸，经捣碎、反复冻融、离心后所得的上清液，并按照质量标准对上述提取的含有痘苗病毒的上清液进行外观、无菌、病毒含量、中和试验及综合检查，选取检定合格的病毒液，并进行冷冻；/n步骤2：痘苗病毒液的取样、分装：取出-80℃冷冻的病毒液，在生物安全柜中精密量取25～35毫升于专用的灭菌西林瓶中，分装结束后迅速进行冷冻真空干燥；/n步骤3：预冻：将上述灭菌西林瓶置于冻干架上放入冷冻干燥机中，于冷阱中预冻至-45℃～-55℃；/n步骤4：升华干燥：打开真空泵，使冻干架在冷阱中处于低压下，利用时间-温度程序来获得所需的制品温度，真空达到后按设定的搁板温度启动加热程序；/n步骤5：解析干燥：继续在低压低温下加热搁板，当物料温度达到25℃时再稳定数小时，以保证样品充分干燥；/n步骤6：冻干结束：压紧瓶塞，取出冻干瓶，消毒外表面，轧上铝盖做长期保存；/n步骤7：冻干病毒保存：于2～8°C避光保存。/n

【技术特征摘要】
1.一种痘苗病毒的冻干工艺，其特征在于：所述冻干工艺包括如下步骤：
步骤1：痘苗病毒的选取：将含有痘苗病毒的兔睾丸组织培养物接种于健康公兔的睾丸上，待发炎变硬后采集睾丸，经捣碎、反复冻融、离心后所得的上清液，并按照质量标准对上述提取的含有痘苗病毒的上清液进行外观、无菌、病毒含量、中和试验及综合检查，选取检定合格的病毒液，并进行冷冻；
步骤2：痘苗病毒液的取样、分装：取出-80℃冷冻的病毒液，在生物安全柜中精密量取25～35毫升于专用的灭菌西林瓶中，分装结束后迅速进行冷冻真空干...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚隽，刘秀华，
申请(专利权)人：威世药业如皋有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32