一种用于检测奶牛金葡菌乳房炎的分子标记物及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种用于检测奶牛金葡菌乳房炎的分子标记物及其应用，属于医学检测技术领域，本发明专利技术公开的分子标记物包括bta‑miR‑223、bta‑miR‑205和bta‑miR‑21‑5p中的一种或几种，本发明专利技术进一步公开了用于检测奶牛金葡菌乳房炎的试剂盒，包括扩增bta‑miR‑223的引物对、扩增bta‑miR‑205的引物对和扩增bta‑miR‑21‑5p的引物对，本发明专利技术利用所述分子标记物及含有分子标记物引物组的试剂盒能够快速有效的检测患金葡菌乳房炎的奶牛，减少由奶牛金葡菌乳房炎带来的经济损失。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测奶牛金葡菌乳房炎的分子标记物及其应用
本专利技术涉及医学检测
，具体涉及一种用于检测奶牛金葡菌乳房炎的分子标记物及其应用。
技术介绍
奶牛乳房炎也叫做奶牛乳腺炎，这种炎症反应的持续发生，可引起患病奶牛的乳腺组织严重的病理损伤，乳腺的泌乳和防御功能被破坏，该疾病的爆发，将导致牛场倾倒大量质检不合格牛奶，且药物治疗成本增加，甚至可能导致患病奶牛死亡，从而使奶牛养殖业遭受巨大经济损失。奶牛乳房炎的致病菌以金黄色葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌为主，约占整个奶牛乳房炎病例的90％以上，目前在世界许多国家金黄色葡萄球菌是最常见和最重要的乳房炎致病菌，导致的经济损失最为严重。金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)乳房炎是奶牛乳腺组织受到金葡菌感染而引起炎症反应的一种常见临床性疾病。由于金葡菌特有的生物学特性，可逃避机体免疫系统，寄生乳腺组织后，降低乳腺免疫力，释放TNF-α、IL-6、IL-1β等，与其他致病菌型乳房炎相比，金葡菌乳房炎的特点是引起不平衡的免疫抑制、持续感染、潜伏期长。传统的乳房炎检测方法主要是利用乳汁病原微生物检查、体细胞计数法(SCC)等方法进行诊断，检测方法相对繁琐，结果判定主观性较强，准确度较低。研究发现，40％被金葡菌感染的奶牛的SCC反而低于未感染时，因此不能准确地断定高低SCC与金葡菌感染之间的关系，这也导致在奶牛生产中不能正确排除感染金葡菌的奶牛。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种用于检测奶牛金葡菌乳房炎的分子标记物及其应用。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种用于检测奶牛金葡菌乳房炎的分子标记物，所述的分子标记物包括bta-miR-223、bta-miR-205和bta-miR-21-5p中的一种或几种，所述的bta-miR-223的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，所述的bta-miR-205的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示，所述的bta-miR-21-5p的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示。本专利技术还提供了一种上述的分子标记物在制备检测奶牛金葡菌乳房炎的试剂盒中的应用。优选地，所述用于检测奶牛金葡菌乳房炎分子标记物的引物组，包括扩增bta-miR-223的引物对、扩增bta-miR-205的引物对和扩增bta-miR-21-5p的引物对；所述扩增bta-miR-223的引物对的序列如SEQIDNO：4和SEQIDNO：5所示；所述扩增bta-miR-205的引物对的序列如SEQIDNO：6和SEQIDNO：7所示；所述扩增bta-miR-21-5p的引物对的序列如SEQIDNO：8和SEQIDNO：9所示。本专利技术还提供了一种用于检测奶牛金葡菌乳房炎的试剂盒，包括上述的引物组。优选的，所述的试剂盒还包括RNA提取试剂、反转录试剂、定量PCR试剂。优选的，所述的试剂盒还包括阴性对照，所述阴性对照为正常乳腺组织的cDNA。与现有技术相比，本专利技术的技术方案的有益效果如下：本专利技术提供了一种用于检测奶牛金葡菌乳房炎的分子标记物及其应用，所述分子标记物包括bta-miR-223、bta-miR-205和bta-miR-21-5p中的一种或几种，扩增bta-miR-223、bta-miR-205或bta-miR-21-5p的上下游引物，通过检测bta-miR-223、bta-miR-205或bta-miR-21-5p基因的表达水平来诊断是否患奶牛金葡菌乳房炎，所述bta-miR-223、bta-miR-21-5p表达上调或bta-miR-205表达下调，表达倍数在1.24倍以上，若bta-miR-223、bta-miR-205和bta-miR-21-5p中任一一个分子标记物出现上述表达差异，则断定为患奶牛金葡菌乳房炎。本专利技术通过检测奶牛金葡菌乳房炎的分子标记物，与健康牛进行比较，检测快速、简便、特异和有效，从而实现奶牛金葡菌乳房炎的早诊断、早治疗，减少了奶牛金葡菌乳房炎带来的经济损失。附图说明图1为2号奶牛乳房炎病原菌分离鉴定结果图，其中(A)为大肠杆菌，(B)为链球菌，(C)为金葡菌；图2为1号、2号、4号、6号、7号、8号牛奶样中金葡菌nuc基因PCR鉴定结果图；图3为1号、2号、4号、6号、7号、8号牛乳腺组织中的bta-miR-223、bta-miR-205和bta-miR-21-5的PCR表达量图。具体实施方式本专利技术提供了一种用于检测奶牛金葡菌乳房炎的分子标记物，所述的分子标记物包括bta-miR-223、bta-miR-205或bta-miR-21-5p中的一种或几种，所述的bta-miR-223的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，具体如下：TGTCAGTTTGTCAAATACCCCA，所述的bta-miR-205的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示，具体如下：TCCTTCATTCCACCGGAGTCTG，所述的bta-miR-21-5p的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示，具体如下：TAGCTTATCAGACTGATGTTGACT。本专利技术还提供了一种上述的分子标记物在制备检测奶牛金葡菌乳房炎的试剂盒中的应用。本专利技术还提供了一种用于检测奶牛金葡菌乳房炎的分子标记物引物组，包括扩增bta-miR-223的引物对、扩增bta-miR-205的引物对和扩增bta-miR-21-5p的引物对。本专利技术中，所述扩增bta-miR-223的引物对的序列如SEQIDNO：4和SEQIDNO：5所示，具体如下：GCGCGTGTCAGTTTGTCAAAT(SEQIDNO：4)，AGTGCAGGGTCCGAGGTATT(SEQIDNO：5)；所述扩增bta-miR-205的引物对的序列如和SEQIDNO：7所示，具体如下：CGTCCTTCATTCCACCGG(SEQIDNO：6)，AGTGCAGGGTCCGAGGTATT(SEQIDNO：7)；所述扩增bta-miR-21-5p的引物对的序列如SEQIDNO：8和SEQIDNO：9所示，具体如下：CGCGTAGCTTATCAGACTGATG(SEQIDNO：8)，AGTGCAGGGTCCGAGGTATT(SEQIDNO：9)。本专利技术还提供了一种用于检测奶牛金葡菌乳房炎的试剂盒，包括上述的引物组。在本专利技术中，所述的试剂盒优选的还包括RNA提取试剂、反转录试剂、定量PCR试剂和阴性对照，所述的RNA提取试剂优选为5min极速RNA提取试剂盒，所述阴性对照优选为正常乳腺组织的cDNA，在本专利技术中，所述的正常乳腺组织cDNA取自健康牛，优选的体积为1.5cm×1.5cm×0.3cm。本专利技术对所述RNA提取试剂、反转录试剂、定量PCR试剂的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可；在本专利技术具体实施过程中，所述的5min极速RNA提取试剂盒购自杭州海基生物技术有限公司，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测奶牛金葡菌乳房炎的分子标记物，其特征在于，所述的分子标记物包括bta-miR-223、bta-miR-205和bta-miR-21-5p中的一种或几种，所述的bta-miR-223的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述的bta-miR-205的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述的bta-miR-21-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于检测奶牛金葡菌乳房炎的分子标记物，其特征在于，所述的分子标记物包括bta-miR-223、bta-miR-205和bta-miR-21-5p中的一种或几种，所述的bta-miR-223的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，所述的bta-miR-205的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示，所述的bta-miR-21-5p的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示。


2.根据权利要求1所述的分子标记物在制备检测奶牛金葡菌乳房炎的试剂盒中的应用。


3.根据权利要求1所述分子标记物的引物组，其特征在于，包括扩增bta-miR-223的引物对、扩增bta-miR-205的引物对和扩增bta-miR-21...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈冰蕾，韩硕，刘娟，邹紫雯，李鑫丽，罗林，赵志辉，武瑞，王长远，
申请(专利权)人：黑龙江八一农垦大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23