一种类风湿性关节炎诊断标记物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种类风湿性关节炎诊断标记物及其应用，所述标记物为p38IP；可通过检测外周血单核细胞内p38IP浓度水平实现诊断类风湿性关节炎。本发明专利技术利用免疫印迹检测p38IP的蛋白水平或荧光定量PCR检测p38IP的mRNA水平，对类风湿关节炎的发生进行风险评估以及初步诊断，具有操作简便，容易判断等优点，也为类风湿性关节炎的研究和治疗提供了新的思路，具有较大的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种类风湿性关节炎诊断标记物及其应用
本专利技术涉及生物检测
，更具体地，涉及一种类风湿性关节炎诊断标记物及其应用。
技术介绍
类风湿性关节炎(Rheumaticarthritis，RA)是一类典型的自身免疫疾病，其病理生理学表现为滑膜慢性炎症，可破坏关节软骨和关节旁骨。类风湿关节炎的一个重要特征是多个关节滑膜内浸润T细胞、B细胞和单核细胞。滑膜成纤维细胞样和巨噬细胞样细胞的扩张导致滑膜增生，这种扩张的滑膜通常能够侵入软骨-骨交界处的关节周围骨，导致骨糜烂和软骨退化。如不治疗或对治疗无反应，炎症和关节破坏会导致身体功能丧失，严重影响患者的生活质量，并伴随沉重的社会经济负担。因此筛查RA的新型生物标志物，建立早期疾病诊断模型和预防手段是控制RA免疫炎症、预防并减缓后期骨骼损伤或畸形的极为重要的战略措施。p38结合蛋白(p38interactingprotein，p38IP)首次发现于酵母双杂交实验中，因其能直接与p38结合而得名(NCBIAccession#AF093250)。p38IP蛋白分子量约83kDa，其N端含有一个NLS核定位信号序列以及一个spt20结构域，中间部分具有一个PEST序列，C端有两个丝氨酸富集区域。遗传学研究表明，在小鼠原肠胚形成期，p38IP促进p38的活化以及E-cadherin的下调，进一步调节胚胎阶段的眼部发育、原肠胚形成和神经管闭合。p38IP与酵母蛋白spt20高度同源，是人SAGA(Spt-Ada-Gcn5acetyltransferase)复合物的重要亚基，对该复合物的组装以及完整性是必须的。此外，p38IP还能够通过与启动子区域结合调节内质网压力诱导的基因表达。还有报道表明，p38IP参与自噬的调节。GCN5是SAGA复合物中的关键组分，p38IP能与GCN5相互作用并阻止GCN5发生蛋白酶体依赖的泛素化降解，进而促进α-tubulin的乙酰化影响细胞周期。在单核细胞向巨噬细胞分化过程中，miR-200b-3p可以调控p38IP的表达进而调节单核细胞分化。专利CN104975041A公开了一种促进单核细胞向巨噬细胞分化的方法，通过下调单核细胞内p38IP蛋白水平从而促进单核细胞向巨噬细胞分化。而关于p38结合蛋白在类风湿性关节炎诊断中的作用，目前还未见相关研究报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供一种类风湿性关节炎诊断标记物及其应用。本专利技术的另一目的在于提供所述类风湿性关节炎诊断标记物的应用。本专利技术的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：一种类风湿性关节炎诊断标记物，所述标记物为p38IP。本专利技术通过研究发现，RA患者中p38IP的表达低于健康人，而与之相应，RA患者的p38MAPK和NF-κB过度激活。无论是用免疫印迹的方法检测p38IP蛋白水平还是用荧光定量的方法检测p38IP的mRNA水平都能为RA的诊断提供依据。表明p38IP可以作为一种新型的类风湿性关节炎诊断标记物。本专利技术还提供一种用于类风湿性关节炎诊断的荧光定量PCR引物，包含：上游引物：5'-TGGCAAACTCTGCTGGACTT-3'，下游引物：5'-TTGAACCTTGCTCAGAACCCT-3'。所述荧光定量PCR引物为通过检测外周血单核细胞内p38IP的mRNA水平来实现类风湿性关节炎诊断。本专利技术还提供一种用于类风湿性关节炎诊断的抗体，所述抗体可特异性识别并结合p38IP。所述抗体可以为商品化的anti-p38IP，任何可以特异识别并结合p38IP的抗体均在本专利技术保护范围内。本专利技术还请求保护p38IP标记物在制备类风湿性关节炎诊断产品中的应用。一种用于类风湿性关节炎诊断的产品，包含检测待测样品中p38IP标记物表达的水平的试剂。具体为检测外周血单核细胞内p38IP浓度水平的试剂，本专利技术对于检测外周血单核细胞内p38IP浓度水平的方式不做限制，任何可以分析、检测任p38IPmRNA或蛋白水平进行RA诊断的技术都可以实现本专利技术目的。例如可通过免疫印迹检测p38IP的蛋白水平或荧光定量PCR检测p38IP的mRNA水平，或通过ELISA，流式等分析p38IP蛋白水平或芯片法分析p38mRNA水平。优选地，所述产品包含上述的荧光定量PCR引物和/或上述p38IP特异性抗体，从而通过免疫印迹检测p38IP的蛋白水平或荧光定量PCR检测p38IP的mRNA水平。优选地，所述产品为试剂盒。本专利技术还请求保护一种诊断类风湿性关节炎的方法，是通过检测外周血单核细胞内p38IP浓度水平实现的，具体是通过检测外周血单核细胞中p38IP的蛋白或者mRNA水平，实现对类风湿性关节炎的发生进行风险评估以及初步诊断。所述蛋白水平检测方法为免疫印迹法。所述mRNA检测方法为荧光定量PCR方法。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供了一种新型的类风湿性关节炎的诊断标志物p38IP；可通过检测外周血单核细胞内p38IP浓度水平实现诊断类风湿性关节炎。可以通过检测外周血单核细胞中p38IP的蛋白或者mRNA水平，实现对RA的发生进行风险评估以及初步诊断。相较于现有的临床观察等确诊RA耗时且判断因素复杂的方法，本专利技术具有方便快捷，结果容易判断等优点。附图说明图1为免疫印迹法检测p38IP的蛋白水平结果。用p38IP抗体p-16以及p-p38，IκB-α，actin抗体对健康人和RA患者蛋白样品进行检测，结果显示RA患者中p38IP水平比健康人低，p38的磷酸化水平普遍偏高而IκB-α水平低。图2为免疫印迹法检测p38IP的蛋白水平结果。与图1类似，只是换另外的p38IP抗体4112进行检测也得到同样的结果。图3为p38IP的蛋白水平多次免疫印迹的统计结果。共对59个健康人样本和60个RA患者样本进行了统计，统计时每个蛋白相对actin内参做均一化处理，且每次结果最终都以一个相同样品作为统一标准。图4为荧光定量PCR方法检测p38IP的mRNA水平结果。荧光定量PCR实验结果表明RA患者外周血单核细胞中p38IP的mRNA水平低于健康人。具体实施方式以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。1、人外周血样本健康人或RA患者外周血样本由广州军区总医院馈赠。2、抗体：anti-p38IP(p16；sc-84118),anti-IκB-α(C-21；sc-371),anti-β-actin(C4；sc-47778)购自SantaCruzBiotechnology公司；anti-p-p38(Thr180/Tyr182)(12F8；#4631)购自CST公司；anti-p38IP(4112)由本实验室自本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种类风湿性关节炎诊断标记物，其特征在于，所述标记物为p38IP。/n

【技术特征摘要】
1.一种类风湿性关节炎诊断标记物，其特征在于，所述标记物为p38IP。


2.一种用于类风湿性关节炎诊断的荧光定量PCR引物，其特征在于，包含：
上游引物：5'-TGGCAAACTCTGCTGGACTT-3'，
下游引物：5'-TTGAACCTTGCTCAGAACCCT-3'。


3.一种用于类风湿性关节炎诊断的抗体，其特征在于，所述抗体可特异性识别并结合p38IP。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：李迎秋，赵晨思，王旭东，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东;44