TREM-1在监测血吸虫病肝纤维化发展过程方面的应用制造技术

本发明专利技术提供一种TREM‑1在监测血吸虫病肝纤维化发展过程方面的应用，其特征在于，采用动物模型动态监测TREM‑1在血吸虫病肝脏中的表达方法。本发明专利技术还提供TREM‑1在制备监测血吸虫病药物方面的应用。所述药物为药物试剂盒，所述药物试剂盒用于监测TREM‑1的表达。本发明专利技术通过检测感染血吸虫的不同时间时，检测TREM‑1在血吸虫病肝脏中的表达，从而监测肝纤维化发展过程，为监测肝纤维化发展过程，提供了新的监测靶点，从而提供一种新的药物试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
TREM-1在监测血吸虫病肝纤维化发展过程方面的应用
本专利技术属于生物医药
，具体涉及TREM-1在监测血吸虫病肝纤维化发展过程方面的应用。
技术介绍
髓系细胞触发受体（triggeringreceptorexpressedonmyeloidcells,TREM）是一类隶属于免疫球蛋白超家族的细胞表面受体，主要包括TREM-1和TREM-2等，在炎症和免疫调节中发挥重要作用。研究表明，TREM-1与巨噬细胞的M1型极化存在较大的相关性，TREM-1的缺失能够促进M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞极化。在曼氏血吸虫病模型中，曼氏血吸虫感染早期脾脏巨噬细胞中TREM-1表达上调，与M1极化趋势相一致。然而，曼氏血吸虫病纤维化模型肝脏组织中TREM-1的表达未见明显变化。日本血吸虫与曼氏血吸虫虽然同属于裂体属，但其生物学特性及引起虫卵肉芽肿、肝纤维化的机制不尽完全相同。TREM-1在血吸虫病肝纤维化进程中的表达及应用未见报道。
技术实现思路
专利技术目的：针对现有技术中存在问题或不足，本专利技术提供TREM-1在监测血吸虫病肝纤维化发展过程方面的应用。为实现上述专利技术目的，本专利技术的实施例提供一种TREM-1在监测血吸虫病肝纤维化发展过程方面的应用，其特征在于，采用动物模型动态监测TREM-1在血吸虫病肝脏中的表达方法。进一步的，一种TREM-1在监测血吸虫病肝纤维化发展过程方面的应用，其特征在于，包括以下步骤：（1）、建立小鼠动物模型（1-1）动物分组：选取30只的8周龄雌性C57BL/6小鼠，饲养于12h昼夜循环，且湿度为55%的洁净空间内；随机选取6只小鼠作为健康对照组，其余分配为血吸虫病组；（1-2）动物模型制备取血吸虫病组的小鼠，剃除小鼠腹部毛暴露出皮肤，固定于小鼠架，从感染性钉螺中溢出日本血吸虫尾蚴，取血吸虫尾蚴挑取于盖玻片上，并紧贴小鼠腹部皮肤保持15min，使尾蚴充分进入小鼠皮肤感染小鼠；（2）RNA抽提（2-1）分别取步骤（1-2）所感染血吸虫后0周、3周、6周、9周、12周小鼠肝脏组织，按50-100mg组织中加入1mlTrizol的比例加入Trizol，置于匀浆器中，冰上研磨后转至EP管内；随后按照0.2ml氯仿/mlTrizol加入氯仿，轻轻混匀后室温放置10min；（2-2）4℃12000rpm离心15min；（2-3）小心吸取上层水相0.5ml，按照1:1体积比加入异丙醇，轻轻混匀后室温放置10min；（2-4）4℃12000rpm离心20min，去除上清；（2-5）加入1ml预冷的75%乙醇，震荡混匀4℃12,000rpm离心5min；（2-6）弃上清，静置干燥RNA，用DEPC水溶解沉淀；（3）RT-qPCR检测将步骤（2）所获得的RNA用Thermo生产的REVERTAID1STCDNASYNTHKIT逆转录为cDNA；获得的cDNA用TAKARA生成的TBGreen™PremixExTaq™II试剂盒进行实时定量PCR检测TREM-1的表达。进一步的，所述步骤（3）中，定量PCR检测中，所用引物序列如下：mTREM-1F:CTGCTGTGCGTGTTCTTTGTCTC；mTREM-1R:AGGGTTCCTTCCCGTCTGGTA；mGAPDHF:TGGAAAGCTGTGGCGTGAT；mGAPDHR:TGCTTCACCACCTTCTTGAT。本专利技术的实施例还提供TREM-1在制备监测血吸虫病药物方面的应用。进一步的，所述药物为药物试剂盒，所述药物试剂盒用于监测TREM-1的表达。进一步的，所述药物试剂盒包括EP管、氯仿、异丙醇、75%乙醇、定量PCR检测所用引物mTREM-1F、mTREM-1R、mGAPDHF、mGAPDHR。其中，定量PCR检测中所用引物的序列如下：mTREM-1F:CTGCTGTGCGTGTTCTTTGTCTC；mTREM-1R:AGGGTTCCTTCCCGTCTGGTA；mGAPDHF:TGGAAAGCTGTGGCGTGAT；mGAPDHR:TGCTTCACCACCTTCTTGAT。本专利技术的上述技术方案的有益效果如下：本专利技术通过检测感染血吸虫的不同时间时，检测TREM-1在血吸虫病肝脏中的表达，从而监测肝纤维化发展过程，为监测肝纤维化发展过程，提供了新的监测靶点，从而提供一种新的药物试剂盒。本专利技术的实施例通过日本血吸虫病小鼠肝脏中TREM-1的检测，结果表明，日本血吸虫病小鼠肝脏中TREM-1的表达上升，感染日本血吸虫12周后，小鼠肝脏组织中TREM-1表达有所下降，但仍维持在较高水平。附图说明图1为本专利技术的实施例1中日本血吸虫病肝脏组织中0到12周TREM-1表达变化图。图2为本专利技术的实施例1中TREM-1定量PCR溶解曲线图。图3为本专利技术的实施例1中内参GAPDH定量PCR溶解曲线图。具体实施方式为使本专利技术要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例进行详细描述。实施例1动态监测血吸虫病肝纤维化发展过程一种TREM-1在监测血吸虫病肝纤维化发展过程方面的应用，包括以下步骤：（1）、建立小鼠动物模型（1-1）动物分组：选取30只的8周龄雌性C57BL/6小鼠，饲养于12h昼夜循环，且湿度为55%的洁净空间内；随机选取6只小鼠作为健康对照组，其余分配为血吸虫病组。（1-2）动物模型制备取血吸虫病组的小鼠，剃除小鼠腹部毛暴露出皮肤，固定于小鼠架，从感染性钉螺中溢出日本血吸虫尾蚴，取血吸虫尾蚴（15±2）挑取于盖玻片上，并紧贴小鼠腹部皮肤保持15min，使尾蚴充分进入小鼠皮肤感染小鼠。（2）RNA抽提（2-1）分别取步骤（1-2）所感染血吸虫后0周、3周、6周、9周、12周小鼠肝脏组织，按50-100mg组织中加入1mlTrizol的比例加入Trizol，置于匀浆器中，冰上研磨后转至EP管内；随后按照0.2ml氯仿/mlTrizol加入氯仿，轻轻混匀后室温放置10min；（2-2）4℃12000rpm离心15min；（2-3）小心吸取上层水相0.5ml，按照1:1体积比加入异丙醇，轻轻混匀后室温放置10min；（2-4）4℃12000rpm离心20min，去除上清；（2-5）加入1ml预冷的75%乙醇，震荡混匀4℃12,000rpm离心5min；（2-6）弃上清，静置干燥RNA，用DEPC水溶解沉淀；（3）RT-qPCR检测将步骤（2）所获得的RNA用Thermo生产的REVERTAID1STCDNASYNTHKIT(货号K1622)逆转录为cDNA。获得的cDNA用TAKARA生成的TBGreen™PremixExTaq™II(TliRNaseHP本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种TREM-1在监测血吸虫病肝纤维化发展过程方面的应用，其特征在于，采用动物模型动态监测TREM-1在血吸虫病肝脏中的表达方法。/n

【技术特征摘要】
1.一种TREM-1在监测血吸虫病肝纤维化发展过程方面的应用，其特征在于，采用动物模型动态监测TREM-1在血吸虫病肝脏中的表达方法。


2.根据权利要求1所述的一种TREM-1在监测血吸虫病肝纤维化发展过程方面的应用，其特征在于，包括以下步骤：
（1）、建立小鼠动物模型
（1-1）动物分组：选取30只的8周龄雌性C57BL/6小鼠，饲养于12h昼夜循环，且湿度为55%的洁净空间内；随机选取6只小鼠作为健康对照组，其余分配为血吸虫病组；
（1-2）动物模型制备
取血吸虫病组的小鼠，剃除小鼠腹部毛暴露出皮肤，固定于小鼠架，从感染性钉螺中溢出日本血吸虫尾蚴，取血吸虫尾蚴挑取于盖玻片上，并紧贴小鼠腹部皮肤保持15min，使尾蚴充分进入小鼠皮肤感染小鼠；
（2）RNA抽提
（2-1）分别取步骤（1-2）所感染血吸虫后0周、3周、6周、9周、12周小鼠肝脏组织，按50-100mg组织中加入1mlTrizol的比例加入Trizol，置于匀浆器中，冰上研磨后转至EP管内；随后按照0.2ml氯仿/mlTrizol加入氯仿，轻轻混匀后室温放置10min；
（2-2）4℃12000rpm离心15min；
（2-3）小心吸取上层水相0.5ml，按照1:1体积比加入异丙醇，轻轻混匀后室温放置10min；
（2-4）4℃12000rpm离心20min，去除上清；
（2-5）加入1ml预冷的75%乙醇，震荡混匀4℃12,000rpm离心5min；
（2-6）弃上清，静置干燥RNA，用DEPC水溶解沉淀；
（3）RT-qPCR检测
将步骤（2）所获得的RNA用Thermo生产的REVERTAID1STCDNASYNTH...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱丹丹，段义农，陈金铃，高文曦，段练，沈培，黄爱龙，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32