一种牛胎盘素的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种牛胎盘素的制备方法，属于胎盘素制备技术领域。本发明专利技术在整个牛胎盘素制备过程中，通过控温匀浆、酶解等方式保护牛胎盘素有效成分的活性，有效避免了牛胎盘素中有效成分构象改变，使牛胎盘素具有较高活性；采用离心、过滤、超滤手段，去除杂质，截留有效成分，生产出的牛胎盘素的分子量小，便于人体吸收。本发明专利技术提供的方法周期短，生产出来的牛胎盘素纯度高、活性高，主要成分为小分子肽段，其中100～1000Da的肽含量达到95％以上，0.05mg/mL即能对HFF‑1(人皮肤成纤维细胞)起到促增殖的效果。生产全过程无污染，无毒副作用，成本低，应用前景良好。

【技术实现步骤摘要】
一种牛胎盘素的制备方法
本专利技术涉及一种牛胎盘素的制备方法，属于胎盘素制备

技术介绍
胎盘又名“紫车河”，自古被认为是不老药，普遍作为医疗、保健、美容、抗衰老的药物。现代医学药理研究及临床试验也表明：胎盘可增加微循环，提高新陈代谢水平，调节和平衡内分泌，修复受伤的皮肤组织，溶解老化的角质、美化肌肤等。胎盘素含有氨基酸、蛋白质、糖类、核酸、矿物质、维生素、成长因子等，其中多肽类物质优于大分子蛋白质，便于机体吸收，优于氨基酸，便于以完整形式被机体吸收，同时也是活化细胞的基本要素。因此对于牛胎盘多肽的提取，具有较大的开发价值，此外，在提取牛胎盘多肽时，需尽可能保留有效成分的活性。但在现有技术中，常高温预处理胎盘原料，导致蛋白肽链丧失天然结构，有效成分流失，从而严重影响产品活性。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述问题，本专利技术提供一种牛胎盘素的制备方法。本专利技术提供的制备方法具有制备周期短、产物活性高、无污染、成本低等优点，制备得到的牛胎盘素可开发为化妆品原料。本专利技术的技术方案如下：一种牛胎盘素的制备方法，包括以下步骤：(1)清洗去除血水和血管的牛胎盘；(2)在清洗后的牛胎盘中加入纯化水，搅碎得牛胎盘肉糜液，搅碎时控制温度在30℃以内；(3)在牛胎盘肉糜液中加入胰酶，35～40℃条件下酶解反应4～17h，得到酶解液；(4)将酶解液离心后，取上清液进行过滤、超滤，得到过滤液；(5)将过滤液进行干燥，得到牛胎盘素。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(1)中，牛胎盘去除血水和血管后，用纯化水洗涤2～3遍。优选地，步骤(1)中，牛胎盘去除血水和血管后，用纯化水洗涤3遍。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(2)中，加入1～2倍牛胎盘质量的纯化水。优选地，步骤(2)中，加入1倍牛胎盘质量的纯化水。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(2)中，采用匀浆机搅碎。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(3)中，加入0.1％～0.6％牛胎盘肉糜液质量的胰酶。优选地，步骤(3)中，加入0.3％牛胎盘肉糜液质量的胰酶，37℃酶解反应4h。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(4)中，所述离心是在3000～5000r/min离心8～15min。优选地，步骤(4)中，在4500r/min条件下离心10min。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(4)中，所述过滤，使用的滤膜孔径是0.2～0.5μm；所述超滤，使用的滤膜孔径是9～11kDa。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(5)中，所述干燥的方式为真空冻干。本专利技术的有益效果：本专利技术在整个牛胎盘素制备过程中，通过控温匀浆、酶解等保护牛胎盘素有效成分的活性，相对于现有技术中，采用蒸煮预处理原料、喷雾干燥制备成品等方式，可有效避免牛胎盘素中有效成分构象改变，使牛胎盘素具有较高活性；采用离心、过滤、超滤手段，去除杂质，截留有效成分，生产出的牛胎盘素的分子量小，便于人体吸收。本专利技术提供的方法周期短，生产出来的牛胎盘素纯度高、活性高，主要成分为小分子肽段，其中100～1000Da的肽含量达到95％以上，0.05mg/mL即能对HFF-1起到促增殖的效果。生产全过程无污染，无毒副作用，成本低，应用前景良好。具体实施方式下面结合实施例，对本专利技术进行具体描述。实施例1清洗1kg新鲜牛胎盘，去除血水和血管，用纯化水洗涤2遍；在清洗后的牛胎盘中加入1.5倍牛胎盘质量的纯化水，搅碎得牛胎盘肉糜液，搅碎时控制温度为28℃；加入0.1％牛胎盘肉糜液质量的胰酶，然后40℃处理17h，得到酶解液；5000r/min离心8min，得到上清；上清经0.22μm滤膜过滤得滤液；然后经10kDa超滤膜超滤，得到收集液；最后将收集液进行真空冻干，得到牛胎盘素。实施例2清洗1kg新鲜牛胎盘，去除血水和血管，用纯化水洗涤3遍；在清洗后的牛胎盘中加入1倍牛胎盘质量的纯化水，搅碎得牛胎盘肉糜液，搅碎时控制温度为25℃；加入0.3％牛胎盘肉糜液质量的胰酶，然后37℃处理4h，静置过夜，得到酶解液；4500r/min离心10min，得到上清；上清经0.22μm滤膜过滤得滤液；然后经10kDa超滤膜超滤，得到收集液；最后将收集液进行真空冻干，得到牛胎盘素。实施例3清洗1kg新鲜牛胎盘，去除血水和血管，用纯化水洗涤3遍；在清洗后的牛胎盘中加入2倍牛胎盘质量的纯化水，搅碎得牛胎盘肉糜液，搅碎时控制温度为30℃；加入0.6％牛胎盘肉糜液质量的胰酶，然后35℃处理8h，静置过夜，得到酶解液；3000r/min离心15min，得到上清；上清经0.22μm滤膜过滤得滤液；然后经10kDa超滤膜超滤，得到收集液；最后将收集液进行真空冻干，得到牛胎盘素。测试例1牛胎盘素的收率结果如表1所示。表1牛胎盘素的收率实施例1实施例2实施例3收率0.67％0.59％0.54％计算公式：收率＝牛胎盘素质量/胎盘质量×100％测试例2根据本行业常用的高效液相分析方法检测分子量的GB31645-2018标准(附录A)，对本专利技术所述的牛胎盘素进行相对分子量分布测试。结果如表2所示。可见，利用本专利技术提供的制备方法制得的牛胎盘素主要成分为小分子肽段，其中100～1000Da的肽含量达到95％以上。表2牛胎盘素的分子量分布分子量分布(Da)实施例1实施例2实施例3>10005.15％2.98％3.79％500～10007.08％6.39％7.87％200～50052.96％49.49％45.16％100～20034.81％41.14％43.18％测试例3取生长良好的人皮肤成纤维细胞(HFF-1)，经胰酶消化后，加入培养液使细胞均匀悬浮，调整细胞悬液浓度，稀释至约5×104/mL，吸取100μL细胞液均匀铺于96孔平底细胞培养板，37℃过夜培养。将实施例1-3中得到的牛胎盘素分别配成0、0.05、0.1、0.2、0.5mg/mL，分别吸取10μL样品液加入铺有HFF-1细胞的96孔板中，37℃培养24h。将细胞液吸出，用PBS洗去残留的培养液和悬浮细胞。向有样品的细胞培养液中加入100μL的MTT溶液，避光培养4h。将MTT溶液吸出，加入100μL的DMSO，置摇床上37℃低速振荡30min。在酶标仪570nm处测量各样品的吸光度，将不同浓度样品的吸光值与对照组比对，确定样品对细胞起增促作用的最低浓度。结果如表3所示。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种牛胎盘素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)清洗去除血水和血管的牛胎盘；/n(2)在清洗后的牛胎盘中加入纯化水，搅碎得牛胎盘肉糜液，搅碎时控制温度在30℃以内；/n(3)在牛胎盘肉糜液中加入胰酶，35～40℃条件下酶解反应4～17h，得到酶解液；/n(4)将酶解液离心后，取上清液进行过滤、超滤，得到过滤液；/n(5)将过滤液进行干燥，得到牛胎盘素。/n

【技术特征摘要】
1.一种牛胎盘素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)清洗去除血水和血管的牛胎盘；
(2)在清洗后的牛胎盘中加入纯化水，搅碎得牛胎盘肉糜液，搅碎时控制温度在30℃以内；
(3)在牛胎盘肉糜液中加入胰酶，35～40℃条件下酶解反应4～17h，得到酶解液；
(4)将酶解液离心后，取上清液进行过滤、超滤，得到过滤液；
(5)将过滤液进行干燥，得到牛胎盘素。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，牛胎盘去除血水和血管后，用纯化水洗涤2～3遍。


3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，加入1～2倍牛胎盘质量的纯化水。
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【专利技术属性】
技术研发人员：许亚丽，陆金婷，石丽虹，程咏梅，任伟业，
申请(专利权)人：无锡可尚生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32