一种中药微生态制剂的制备方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种中药微生态制剂的制备方法及其应用，属于禽用中药微生态制剂技术领域。海带加水、辅料，灭菌后加入海带降解菌种子液培养发酵，随后以海带发酵液体积为基准，分别加入麦芽汁、红糖、黄芪粉灭菌备用；待发酵罐温度下降后加入5％混合菌种行二次发酵，发酵结束后过滤除渣，得液体制剂，或制成干粉，即得中药微生态制剂。本发明专利技术利用海带降解菌进行液态发酵，再加入黄芪粉等由混合菌种行二次液体发酵，有效解决了黄芪单味中药抗菌能力及其他药效低下的缺陷，最终达到显著提升抑菌效果和药物有效成分的效果。经试验证实，由本发明专利技术制得的中药微生态制剂相比传统抗生素对家禽禽源致病性大肠杆菌体外抑菌效果更佳，且不会产生耐药性。

【技术实现步骤摘要】
一种中药微生态制剂的制备方法及其应用
本专利技术属于禽用中药微生态制剂
，具体涉及一种用于提高SPF鸡生长性能、提升抗病力、成活率的中药微生态制剂，同时还涉及该中药微生态制剂的制备方法。
技术介绍
我国中医药博大精深，在中国疾病防治史中占据重要地位。中草药作为天然有机物，具有绿色天然、无残留、不引起细菌耐药性等特点。在动物中使用中药后，能显著提高机体的免疫力，有效地减少养殖动物疾病的发生，且可以不同程度地改善动物制品的风味和肉质。不仅具有保健、治病的功效，而且还可以改善生态环境，中兽药作为饲料添加剂在畜禽养殖中的作用也就愈加重要。然而，由于养殖动物的饲养成本受限，中药材价格高涨，往往用于养殖业的中兽药原料均来自优等中药材的下脚料或次品，临床疗效不能得到很好地反馈。因此，如何以较低成本提高中药材活性成分的释放及药理作用的发挥，在兽医临床至关重要。中草药发酵技术是在继承中草药炮制法的基础上，吸取微生态学研究成果，结合现代微生物工程而形成的高科技中草药制药新技术，利用生物体的生物转化功能，以提高中草药中活性成分物质含量、改变某一成分或产生一些中草药中不具有的活性成分，从而为活性化合物的筛选提供了新的途径。现代的中药发酵技术摒弃了传统的自然发酵工艺，将来源于人或动物消化道的益生菌作为发酵菌株，模拟体外“胃肠发酵系统”，完成中草药有效成分的转化，直接获得可吸收且具有较强药理活性代谢产物和有效成分的小分子物质。大幅度提高中药活性物质含量，改善中药性味，降低中药毒副作用，去除中药中的大分子杂质。同时，中草药中的某些成分亦能促进益生菌的生长，微生物在发酵中产生大量的有机酸(乳酸、丙酸)、肽类等，对机体免疫系统也起到促进作用。随着人们对食品安全和卫生健康问题的重视，绿色环保的健康养殖模式是今后畜牧业发展的必然趋势。基于此，研究和开发一种无毒副作用、又能防病促生长的、减抗替抗型、绿色高效的兽用制剂或饲料添加剂，意义重大。
技术实现思路
本技术方案利用生物技术制备海带发酵液，加入黄芪粉和辅助的营养物质，再接种益生菌进行发酵，制备含海藻多糖、黄芪多糖、海藻寡糖的中药微生态制剂。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用下述技术方案为：一种中药微生态制剂的制备方法，包括：(1)备料灭菌：海带切片后置入发酵罐内，加入清水和辅料，灭菌备用；(2)初次发酵：待发酵罐内温度下降至40℃以下，向备料中加入5％海带降解菌种子液培养发酵，得海带发酵液；(3)二次备料灭菌：将海带发酵液离心，得上清液备用；以上清液体积为基准，分别加入10％麦芽汁(v/v)、10％红糖(m/v)、7％～10％黄芪粉(m/v)灭菌备用；(4)二次发酵：待发酵罐内温度降至40℃以下，向加入5％混合菌种行二次发酵；(5)检测：发酵结束后进行检测，经检测符合条件后停止发酵，得发酵产物备用；(6)制得成品：发酵产物过滤除渣，分装得液体制剂，或经喷雾干燥，制成干粉，即得一种中药微生态制剂。进一步的，步骤(1)所述海带选自干海带或新鲜海带中任意一种；所述辅料包括但不限于硫酸铵、氯化钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸锰。所述灭菌条件为：100℃下灭菌30min。进一步的，以干海带发酵时，加入50倍量的水；以新鲜海带发酵时，加入6倍量的水。进一步的，步骤(2)所述海带降解菌种子液由如下方法制得：(1)取自然生长的海带样品，按5％(m/v)加入到利用海带、硫酸铵、氯化钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸锰等制备的培养液中，37℃、150rpm转速下培养直至海带90％以上分解；(2)取一定量的上述海带分解液，按5％(v/v)接种新的利用海带、硫酸铵、氯化钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸锰等制备的培养液中，继续培养至海带分解，连续重复本步骤2～3次；(3)取一定量最后一次培养的海带分解液，经一系列稀释后涂布牛肉膏蛋白胨平板，37℃培养，待平板上有菌落生长后，挑取单菌落继续在牛肉膏蛋白胨平板上划线，至有单菌落出现，继续挑取单菌落在牛肉膏蛋白胨平板上重复划线2次，待有单菌落生长后即为纯菌株；(4)挑取上述纯化的单菌落，分别接种在含有海藻酸钠和果胶为唯一碳源的培养基表面，若有菌落生长即为分解海藻酸钠或果胶的菌株，各选取一株分解海藻酸钠和果胶，其中效果最好的菌株和在一起作为种子菌种；(5)取上述种子菌种接种利用海带、硫酸铵、氯化钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸锰等制备的培养液中，37℃、150rpm转速下培养直至海带90％以上分解，即为原始种子液；(6)取原始种子液，按5％(v/v)接种于利用海带、硫酸铵、氯化钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸锰等制备培养液中，在37℃、150rpm转速下培养1～2天至90％海带分解成液体，即为生产种子液。进一步的，步骤(2)所述发酵终点以90％海带完全分解为止。进一步的，步骤(3)所述灭菌条件为：121℃下灭菌20min。进一步的，步骤(4)所述混合菌种由枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌按菌数比例1:1:2混合制成；所述枯草芽孢杆菌由无锡阿尔宝尔生物工程有限公司提供；凝结芽孢杆菌由洛阳欧科拜克生物技术股份有限公司提供；植物乳杆菌由天津市育琪生物技术有限公司提供。进一步的，步骤(5)所述发酵条件为37℃、pH6.5-6.8、转速100rpm下发酵48h。进一步的，步骤(6)所述检测符合条件选自如下任意3个或4个：①pH值≤5.0；②芽孢杆菌数量≥1×108CFU；②乳酸菌数量≥1×109CFU；④总多糖含量比发酵前增加超过30％～50％；所述总多糖包括黄芪多糖、海藻多糖和海藻寡糖。本专利技术还公开了一种如上述任一制备方法制得的中药微生态制剂。通过上述的技术方案，本专利技术的有益效果是：1、本专利技术采用从海带降解菌种子液对海带进行发酵，解决了传统技术采用酶解陆生植物的复合酶制剂降解效果差的缺陷，使海带中所含的褐藻胶降解率达90％以上。再加入黄芪、混合菌种(益生菌)进行二次液体发酵，有效解决了黄芪单味中药抗菌能力及其他药效低下的缺陷，最终达到显著提升抑菌效果和药物有效成分的效果。2、本专利技术两次发酵均采用液体发酵，技术含量高、效果可控，发酵产物彻底、明确，可随时监测。3、由本专利技术制得的中药微生态制剂能有效改善传统抗生素对家禽带来的中药微生态制剂对禽源致病性大肠杆菌体外抑菌效果的试验。4、需要说明的是本专利技术的技术效果是个工艺步骤及参数相互协同、相互作用的结果，并非简单的工艺的叠加，各工艺的有机结合产生的效果远远超过各单一工艺功能和效果的叠加，具有较好的先进性和实用性。附图说明图1为混合菌种发酵前后对黄芪粗多糖含量的影响比较；图2为混合菌种发酵前后对黄芪总黄酮含量的影响比较；图3为混合菌种发酵前后对黄芪总皂苷含量的影响比较。具体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种中药微生态制剂的制备方法，包括：/n(1)备料灭菌：海带切片后置入发酵罐内，加入清水和辅料，灭菌备用；/n(2)初次发酵：待发酵罐内温度下降至40℃以下，向备料中加入5％海带降解菌种子液培养发酵，得海带发酵液；/n(3)二次备料灭菌：将海带发酵液离心，得上清液备用；以上清液体积为基准，分别加入10％麦芽汁(v/v)、10％红糖(m/v)、7％～10％黄芪粉(m/v)灭菌备用；/n(4)二次发酵：待发酵罐内温度降至40℃以下，向加入5％混合菌种行二次发酵；/n(5)检测：发酵结束后进行检测，经检测符合条件后停止发酵，得发酵产物备用；/n(6)制得成品：发酵产物过滤除渣，分装得液体制剂，或经喷雾干燥，制成干粉，即得一种中药微生态制剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种中药微生态制剂的制备方法，包括：
(1)备料灭菌：海带切片后置入发酵罐内，加入清水和辅料，灭菌备用；
(2)初次发酵：待发酵罐内温度下降至40℃以下，向备料中加入5％海带降解菌种子液培养发酵，得海带发酵液；
(3)二次备料灭菌：将海带发酵液离心，得上清液备用；以上清液体积为基准，分别加入10％麦芽汁(v/v)、10％红糖(m/v)、7％～10％黄芪粉(m/v)灭菌备用；
(4)二次发酵：待发酵罐内温度降至40℃以下，向加入5％混合菌种行二次发酵；
(5)检测：发酵结束后进行检测，经检测符合条件后停止发酵，得发酵产物备用；
(6)制得成品：发酵产物过滤除渣，分装得液体制剂，或经喷雾干燥，制成干粉，即得一种中药微生态制剂。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其中：
步骤(1)所述海带选自干海带或新鲜海带中任意一种；
所述辅料包括但不限于硫酸铵、氯化钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸锰。
所述灭菌条件为：100℃下灭菌30min。


3.根据权利要求2所述的制备方法，其中：
以干海带发酵时，加入50倍量的水；
以新鲜海带发酵时，加入6倍量的水。


4.根据权利要求1所述的制备方法，其中：
步骤(2)所述海带降解菌种子液由如下方法制得：
(1)取自然生长的海带样品，按5％(m/v)加入到利用海带、硫酸铵、氯化钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸锰等制备的培养液中，37℃、150rpm转速下培养直至海带90％以上分解；
(2)取一定量的上述海带分解液，按5％(v/v)接种新的利用海带、硫酸铵、氯化钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸锰等制备的培养液中，继续培养至海带分解，连续重复本步骤2～3次；
(3)取一定量最后一次培养的海带分解液，经一系列稀释后涂布牛肉膏蛋白胨平板，37℃培养，待平板上有菌落生长后，挑取单菌落继续在牛肉膏蛋白胨平板上划线，至有单菌落出现，继续挑取单菌落在牛肉膏...

【专利技术属性】
技术研发人员：王琳超，陈营，李晶，韩易航，梁玉，宋捷，赵志成，贾立华，张丽娜，孙利杰，付晓娟，张贤秋，吕淑荣，刘哲林，
申请(专利权)人：烟台绿叶动物保健品有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37