一种全肝缺血诱发缺血再灌注损伤的动物模型的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种全肝缺血诱发缺血再灌注损伤的动物模型的构建方法。本发明专利技术所述动物模型设计合理、操作简单、重复性好，符合大鼠原味肝移植无肝期血流改变，术后存活率高。同时在术后经病理分析，可导致肝外多器官(心脏、胰腺、结肠、小肠、肾脏)损伤。能有效解决现有研究目标必须完整复制肝移植过程，时间久、死亡率高、人员技术要求高等问题。同时可延伸到其他需阻断肝脏血流造成肝外器官缺血再灌注损伤的基础研究。

【技术实现步骤摘要】
一种全肝缺血诱发缺血再灌注损伤的动物模型的构建方法
本专利技术涉及动物模型构建
，具体是指置一种全肝缺血诱发缺血再灌注损伤的动物模型的构建方法。
技术介绍
肝移植技术是治疗终末期肝病的唯一手段，有效的肝移植能成功提高终末期肝病患者的存活率，改善预后，提高患者生活质量。但肝移植后的腹腔内感染、缺血再灌注损伤等肝外并发症严重制约移植的成功率，影响患者住院时间、住院费用及预后。目前虽然肝移植技术已经成熟，但是在术后肝外器官的并发症的防治方面仍存在诸多问题。肝移植后肝外器官缺血再灌注损伤的机制研究尚不清楚，其中移植过程中的无肝期血流动力学急剧变化，是导致肝移植后肝外器官缺血再灌注损伤的重要原因。目前临床上要求尽可能缩短无肝期，以保证肝外器官的血流稳定，减少缺血再灌注损伤。目前对于大鼠肝移植的模型，多采用二袖套法，以及在此基础上的改良。而目前研究肝移植肝外器官缺血再灌注损伤的方法，多基于该模型。但使用该模型不仅练习耗时久，技术要求高，而且需要解剖显微镜的硬件支持。此外肝外器官的损害意味着模型高死亡率，不利于后续的研究。除此以外肝脏外伤及肝脏肿瘤手术，有时也需要夹闭肝脏血流，造成肝外器官缺血再灌注损伤，故此也需要动物模型建立，对缺血再灌注损伤进行基础研究。因此，一种用于研究大鼠全肝缺血无肝期血流动力学变化诱发肝外器官缺血再灌注损伤动物模型亟待研究解决。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案为：一种全肝缺血诱发缺血再灌注损伤的动物模型的构建方法，包括以下步骤：(1)：选取在室温25±2℃、湿度50±10％的情况下饲养的重量为200～250g的SPF级大鼠，在手术前24小时禁食，但不禁水；(2)：对大鼠称重选取体质量相同的大鼠，对大鼠进行异氟醚吸入麻醉并腹部消毒；(3)：在大鼠剑突下正中切口3cm左右打开大鼠腹腔，拉钩暴露肝脏，游离肝胃韧带，用纱布包裹住肝中叶，将肝脏上翻，暴露肝门部的手术视野；(4)：游离胆管、门静脉及肝动脉，将小肠推向左下腹腔，并用湿纱布覆盖暴露的肝、胃及肠道，游离肝下下腔静脉至右肾静脉水平；(5)：切开大鼠下肢皮肤，暴露股静脉，经股静脉缓慢推注低分子肝素625IU/Kg，全身肝素化；(6)：用3-0号丝线结扎门静脉、肝动脉及右肾静脉上下腔静脉并持续0～60min，在此期间减少吸入麻醉；(7)：结扎结束后松开门静脉、肝动脉及右肾静脉上下腔静脉，逐层缝合大鼠肌肉层、皮肤层，缝合完毕后停止吸入麻醉；(8)：手术后，大鼠麻醉清醒后在室温25±2℃、湿度50±10％的情况下继续饲养，观察大鼠的生存情况。作为改进，所述步骤(6)中用3-0号丝线结扎门静脉、肝动脉及右肾静脉上下腔静脉持续时间为45min。采用以上方法后，本专利技术具有如下优点：本专利技术设计合理、操作简单、重复性好，符合大鼠原位肝移植无肝期血流改变，术后存活率高。同时在术后经病理分析，可导致肝外多器官(心脏、胰腺、结肠、小肠、肾脏)损伤。能有效解决现有研究目标必须完整复制肝移植过程，时间久、死亡率高、人员技术要求高等问题。附图说明图1是本专利技术一种全肝缺血诱发缺血再灌注损伤的动物模型的构建方法大鼠术后肺HE染色对比图。图2是本专利技术一种全肝缺血诱发缺血再灌注损伤的动物模型的构建方法大鼠术后肾HE染色对比图。图3是本专利技术一种全肝缺血诱发缺血再灌注损伤的动物模型的构建方法大鼠术后结肠HE染色对比图。图4是本专利技术一种全肝缺血诱发缺血再灌注损伤的动物模型的构建方法大鼠术后小肠HE染色对比图。图5是本专利技术一种全肝缺血诱发缺血再灌注损伤的动物模型的构建方法大鼠术后胰腺HE染色对比图。图6是本专利技术一种全肝缺血诱发缺血再灌注损伤的动物模型的构建方法大鼠术后心脏HE染色对比图。图7是本专利技术一种全肝缺血诱发缺血再灌注损伤的动物模型的构建方法大鼠术中血压变化对比图。图8是本专利技术一种全肝缺血诱发缺血再灌注损伤的动物模型的构建方法大鼠术中后心率变化对比图。如图所示：A:假手术组，B:缺血组，C：再灌注6h组D：再灌注12h组E：再灌注24h组F：再灌注48h组G：再灌注72h组H：再灌注7d组I：再灌注14d组。具体实施方式实施例一：大鼠对无肝期血流动力学变化的最大耐受时间1、实验材料：重量为200-250g的SPF级大鼠、异氟醚、低分子肝素、3-0号丝线、眼科剪，眼科镊、拉钩等；2、制备方法：(1)：选取在室温25±2℃、湿度50±10％的情况下饲养的重量为200～250g的SPF级大鼠，在手术前24小时禁食，但不禁水；(2)：对大鼠称重选取体质量相同的大鼠50只，分为假手术组、缺血15min组、缺血30min组、缺血45min组、缺血60min组共计五组，每组10只，对大鼠进行异氟醚吸入麻醉并腹部消毒；(3)：在大鼠剑突下正中切口3cm左右打开大鼠腹腔，拉钩暴露肝脏，游离肝胃韧带，用纱布包裹住肝中叶，将肝脏上翻，暴露肝门部的手术视野；(4)：游离胆管、门静脉及肝动脉，将小肠推向左下腹腔，并用湿纱布覆盖暴露的肝、胃及肠道，游离肝下下腔静脉至右肾静脉水平；(5)：切开大鼠下肢皮肤，暴露股静脉，经股静脉缓慢推注低分子肝素625IU/Kg，全身肝素化；(6)：对假手术组解剖肝门部结构后不予处理，对缺血15min组、缺血30min组、缺血45min组、缺血60min组共计五组的大鼠分别用3-0号丝线结扎门静脉、肝动脉及右肾静脉上下腔静脉并持续15min、30min、45min、60min，在此期间减少吸入麻醉；(7)：结扎结束后松开门静脉、肝动脉及右肾静脉上下腔静脉，逐层缝合大鼠肌肉层、皮肤层，缝合完毕后停止吸入麻醉；(8)：手术后，大鼠麻醉清醒后在室温25±2℃、湿度50±10％的情况下继续饲养，观察大鼠的生存情况。表1：大鼠对无肝期的耐受时间(观察时间14天)与假手术组相比，具有统计学意义。通过上表缺血组与假手术组的对比，充分的显示了大鼠对无肝期最大耐受时间为45min左右。实施例二：模拟大鼠无肝期血流动力学变化1、实验材料：实验材料：重量为200-250g的SPF级大鼠、异氟醚、低分子肝素、3-0号丝线、眼科剪，眼科镊、拉钩等；2、制备方法：(1)：选取在室温25±2℃、湿度50±10％的情况下饲养的重量为200～250g的SPF级大鼠，在手术前24小时禁食，但不禁水；(2)：对大鼠称重选取体质量相同的大鼠90只，分为假手术组、缺血组、再灌注6h组、再灌注12h组、再灌注24h组、再灌注48h组、再灌注72h组、再灌注7d组、再灌注14d组共计九组，每组10只，对大鼠进行异氟醚吸入麻醉并腹部消毒；(3)：在大鼠剑突下正中切口3cm左右打开大鼠腹腔，拉钩暴露肝脏，游离肝胃韧带，用纱布包裹住肝中叶，将肝脏上翻，暴露肝门部的手术视野本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种全肝缺血诱发缺血再灌注损伤的动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)：选取在室温25±2℃、湿度50±10％的情况下饲养的重量为200～250g的SPF级大鼠，在手术前24小时禁食，但不禁水；/n(2)：对大鼠称重选取体质量相同的大鼠，对大鼠进行异氟醚吸入麻醉并腹部消毒；/n(3)：在大鼠剑突下正中切口3cm左右打开大鼠腹腔，拉钩暴露肝脏，游离肝胃韧带，用纱布包裹住肝中叶，将肝脏上翻，暴露肝门部的手术视野；/n(4)：游离胆管、门静脉及肝动脉，将小肠推向左下腹腔，并用湿纱布覆盖暴露的肝、胃及肠道，游离肝下下腔静脉至右肾静脉水平；/n(5)：切开大鼠下肢皮肤，暴露股静脉，经股静脉缓慢推注低分子肝素625IU/Kg，全身肝素化；/n(6)：用3-0号丝线结扎门静脉、肝动脉及右肾静脉上下腔静脉并持续0～60min，在此期间减少吸入麻醉；/n(7)：结扎结束后松开门静脉、肝动脉及右肾静脉上下腔静脉，逐层缝合大鼠肌肉层、皮肤层，缝合完毕后停止吸入麻醉；/n(8)：手术后，大鼠麻醉清醒后在室温25±2℃、湿度50±10％的情况下继续饲养，观察大鼠的生存情况。/n

【技术特征摘要】
1.一种全肝缺血诱发缺血再灌注损伤的动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)：选取在室温25±2℃、湿度50±10％的情况下饲养的重量为200～250g的SPF级大鼠，在手术前24小时禁食，但不禁水；
(2)：对大鼠称重选取体质量相同的大鼠，对大鼠进行异氟醚吸入麻醉并腹部消毒；
(3)：在大鼠剑突下正中切口3cm左右打开大鼠腹腔，拉钩暴露肝脏，游离肝胃韧带，用纱布包裹住肝中叶，将肝脏上翻，暴露肝门部的手术视野；
(4)：游离胆管、门静脉及肝动脉，将小肠推向左下腹腔，并用湿纱布覆盖暴露的肝、胃及肠道，游离肝下下腔静脉至右肾静脉水平；
(5)：切开大鼠下肢皮肤，...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁园，黄静，田原，陈蒙华，
申请(专利权)人：宁波市医疗中心李惠利医院，
类型：发明
国别省市：浙江;33