蛋白质的制造方法技术

本发明专利技术提供蛋白质的制造方法。通过培养基培养以使YscB蛋白质的活性降低的方式进行了修饰并且具有靶蛋白生产能力的Talaromyces cellulolyti cus，从而制造靶蛋白。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】蛋白质的制造方法
本专利技术涉及蛋白质的制造方法。
技术介绍
作为蛋白质的制造方法，报告了使用了棒状细菌、芽孢杆菌属细菌、酵母、丝状菌等的各种微生物的方法。例如，非专利文献1公开了，使用了丝状菌Talaromycescellulolyticus(旧名：Acremoniumcellulolyticus)的宿主由来的纤维素酶的生产。此外，专利文献1中公开了，使用了丝状菌的抗体的生产。此外，专利文献2公开了，使用了Talaromycescellulolyticus等的丝状菌并且具有内腔的多聚体蛋白质的生产。此外，专利文献3～4中公开了，使用了内源性蛋白酶的活性弱化了的丝状菌的异源蛋白的生产。此外，专利文献5中公开了，使用了内源性碱蛋白酶的活性弱化了的丝状菌的异源蛋白的生产。此外，专利文献6中公开了，使用了缺乏羧肽酶yscα活性的酵母的异源蛋白的生产。该文献中指出，该酵母还可以缺乏选自yscA、yscB、yscY和yscS中的肽酶活性。然而，尚不知Talaromycescellulolyticus中的YscB蛋白质与蛋白质生产的关系。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特表2006-512891专利文献2：日本特开2016-158599专利文献3：日本特表2015-512611专利文献4：日本特表2016-523552专利文献5：日本特表2000-507106专利文献6：日本特开1990-104279非专利文献r>非专利文献1：InoueH,etal.,Constructionofastarch-induciblehomologousexpressionsystemtoproducecellulolyticenzymesfromAcremoniumcellulolyticus.JIndMicrobiolBiotechnol.2013Aug；40(8):823-30.
技术实现思路
专利技术所解决的技术问题本专利技术的目的是提供蛋白质的制造方法。解决问题的技术手段本专利技术人等为了解决所述问题而进行了深入研究，结果发现，以使YscB蛋白质的活性降低的方式对Talaromycescellulolyticus进行修饰，从而能够提高Talaromycescellulolyticus的蛋白质生产能力，完成了本专利技术。即，本专利技术可以举例如下。1、一种靶蛋白的制造方法，其包含下述工序：通过培养基培养具有生产靶蛋白的能力的Talaromycescellulolyticus，其中，所述Talaromycescellulolyticus经过了修饰，以使得与非修饰菌株相比YscB蛋白质的活性降低。2、所述方法，其中，通过降低yscB基因的表达或破坏yscB基因，而使所述YscB蛋白质的活性降低。3、所述方法，其中，通过yscB基因的缺失而使所述YscB蛋白质的活性降低。4、所述方法，其中，所述YscB蛋白质为下述(a)、(b)或(c)所述的蛋白质：(a)包含SEQIDNO.43表示的氨基酸序列的蛋白质；(b)包含在SEQIDNO.43表示的氨基酸序列中含有1～10个的氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加的氨基酸序列，并且具有蛋白酶活性的蛋白质；(c)包含相对于SEQIDNO.43表示的氨基酸序列具有90％以上的同源性的氨基酸序列，并且具有蛋白酶活性的蛋白质。5、所述方法，其中，所述Talaromycescellulolyticus经过了修饰，以使得与非修饰菌株相比CreA蛋白质的活性降低。6、所述方法，其中，通过降低creA基因的表达或破坏creA基因，而使所述CreA蛋白质的活性降低。7、所述方法，其中，通过creA基因的缺失，而使所述CreA蛋白质的活性降低。8、所述方法，其中，所述Talaromycescellulolyticus为源自TalaromycescellulolyticusS6-25菌株(NITEBP-01685)的修饰菌株。9、所述方法，其还包含下述工序：回收靶蛋白。10、所述方法，其中，通过所述培养而使靶蛋白积蓄于所述培养基中。11、所述方法，其中，靶蛋白作为与在Talaromycescellulolyticus中发挥功能的信号肽形成的融合蛋白而进行表达。12、所述方法，其中，靶蛋白为异源蛋白。13、所述方法，其中，靶蛋白为源自人的蛋白质。14、所述方法，其中，靶蛋白为人血清白蛋白。15、所述方法，其中，靶蛋白为抗体相关分子。16、所述方法，其中，靶蛋白为生长因子。附图说明[图1]表示基于T.cellulolyticusF09菌株和F09ΔyscB菌株的人血清白蛋白(HSA)生产的结果的图(照片)。[图2]表示基于T.cellulolyticusF09菌株和F09ΔyscB菌株的曲妥珠单抗生产的结果的图(照片)。[图3]表示基于T.cellulolyticusF09菌株和F09ΔyscB菌株的角质细胞生长因子(Keratinocytegrowthfactor)1(KGF-1)生产的结果的图(照片)。[图4]表示基于T.cellulolyticusF09菌株和F09ΔyscB菌株的血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor)(VEGF)生产的结果的图(照片)。[图5]表示T.cellulolyticusF09菌株的培养上清液的蛋白酶活性的评价结果的图(照片)。[图6]表示T.cellulolyticusF09菌株及其蛋白酶缺陷菌株的培养上清液的蛋白酶活性的评价结果的图(照片)。具体实施方式以下，对本专利技术详细地进行说明。本专利技术的方法是利用了Talaromycescellulolyticus的靶蛋白的制造方法。也将该方法中利用的Talaromycescellulolyticus称为“本专利技术的微生物”。<1>本专利技术的微生物本专利技术的微生物是，以使YscB蛋白质的活性降低的方式进行了修饰的、具有靶蛋白生产能力的Talaromycescellulolyticus。需要说明的是，在本专利技术的微生物的说明中，有时将本专利技术的微生物或用于构建它们的Talaromycescellulolyticus称为“宿主”。<1-1>Talaromycescellulolyticus本专利技术的微生物为Talaromycescellulolyticus。Talaromycescellulolyticus的旧名为Acremoniumcellulolyticus。即，Acremoni本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种靶蛋白的制造方法，其包含下述工序：/n通过培养基培养具有生产靶蛋白的能力的Talaromyces cellulolyticus，其中，/n所述Talaromyces cellulolyticus经过了修饰，以使得与非修饰菌株相比YscB蛋白质的活性降低。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171010 JP 2017-1965381.一种靶蛋白的制造方法，其包含下述工序：
通过培养基培养具有生产靶蛋白的能力的Talaromycescellulolyticus，其中，
所述Talaromycescellulolyticus经过了修饰，以使得与非修饰菌株相比YscB蛋白质的活性降低。


2.根据权利要求1所述的方法，其中，
通过降低yscB基因的表达或破坏yscB基因，而使所述YscB蛋白质的活性降低。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，
通过yscB基因的缺失而使所述YscB蛋白质的活性降低。


4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，
所述YscB蛋白质为下述(a)、(b)或(c)所述的蛋白质：
(a)包含SEQIDNO.43表示的氨基酸序列的蛋白质；
(b)包含在SEQIDNO.43表示的氨基酸序列中含有1～10个的氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加的氨基酸序列，并且具有蛋白酶活性的蛋白质；
(c)包含相对于SEQIDNO.43表示的氨基酸序列具有90％以上的同源性的氨基酸序列，并且具有蛋白酶活性的蛋白质。


5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，
所述Talaromycescellulolyticus经过了修饰，以使得与非修饰菌株相比CreA蛋白质的活性降低。


6.根据权利要求5所述的方法，其中，
通过降低...

【专利技术属性】
技术研发人员：深田宽朗，河口礼佳，十仓充范，
申请(专利权)人：味之素株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP