一种高通量筛选真核生物必需基因和生长抑制基因的方法技术

本发明专利技术涉及一种一种高通量筛选真核生物必需基因和生长抑制基因的方法，首先建立真核生物CRISPR/Cas全基因组编辑载体文库，然后将载体文库转染真核细胞，之后将细胞均匀的分成两部分，一部分直接收细胞，抽提基因组备用，一部分培养约1个月后，收细胞，抽提基因组备用，另一部分培养约2个月后，收细胞，抽提基因组备用。通过PCR扩增方法和高通量测序技术，对三组细胞的sgRNA丰度进行比较，最后分析出真核生物的必需基因和生长抑制基因。本发明专利技术的载体文库的递送系统是piggyBac转座子系统，不需要包装病毒，可直接转染真核生物细胞，极大的节省了成本，对于研究真核生物必需基因和生长抑制基因具有极大的推动作用。

【技术实现步骤摘要】
一种高通量筛选真核生物必需基因和生长抑制基因的方法
本专利技术属于高通量测序
，涉及一种高通量筛选真核生物必需基因和生长抑制基因的方法。
技术介绍
随着越来越多的生物完成了全基因组测序，功能基因组研究日益成为生命科学研究的重点领域，面对海量的功能基因，传统的逐个研究功能基因的正向遗传学显得力不从心，开发高通量研究功能基因的技术方案势在必行。目前已经广泛应用的高通量研究功能基因组的方法主要有高通量RNAi技术、RNA-Seq技术、高通量CRISPR技术等，其中高通量CRISPR技术因其廉价高效而受到越来越广泛的应用。必需基因是指一个生物完成其生命周期所必须的基因，是一个生物的核心基因，必需基因的缺失或突变，往往会引起生物的变异甚至死亡。研究必需基因对于研究生物的功能基因组至关重要，对于生物种质改良和突变体素材的创制具有基础指导意义。生长抑制基因是指对生物的生长繁殖具有抑制作用的基因，这些基因的转录表达往往会抑制生物的增殖，其中许多生长抑制基因是分泌型基因，许多是生物与外界环境相互作用的基因。研究生长抑制基因对于研究功能基因组和探究生本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高通量筛选真核生物必需基因和生长抑制基因的方法，其特征在于，具体步骤如下：/n(1)构建转基因系统递送的CRISPR/Cas全基因组编辑载体文库；/n(2)将步骤(1)构建的载体文库稳定整合到真核生物细胞基因组上，构成真核生物全基因组编辑细胞文库。将该真核生物全基因组编辑细胞文库均匀分成三份，其中一份细胞直接收集后抽提基因组，一份细胞用完全培养基培养1个月，另一份细胞用完全培养基培养2个月，然后收集细胞并且抽提基因组；/n(3)分别在步骤(1)所得载体文库的U6启动子部分和sgRNA scaffold部分设计正向引物和反向引物，然后分别以步骤(2)收集的三组细胞基因组全部作为模板，扩增...

【技术特征摘要】
1.一种高通量筛选真核生物必需基因和生长抑制基因的方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)构建转基因系统递送的CRISPR/Cas全基因组编辑载体文库；
(2)将步骤(1)构建的载体文库稳定整合到真核生物细胞基因组上，构成真核生物全基因组编辑细胞文库。将该真核生物全基因组编辑细胞文库均匀分成三份，其中一份细胞直接收集后抽提基因组，一份细胞用完全培养基培养1个月，另一份细胞用完全培养基培养2个月，然后收集细胞并且抽提基因组；
(3)分别在步骤(1)所得载体文库的U6启动子部分和sgRNAscaffold部分设计正向引物和反向引物，然后分别以步骤(2)收集的三组细胞基因组全部作为模板，扩增sgRNA...

【专利技术属性】
技术研发人员：马三垣，常珈菘，夏庆友，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：重庆;50