本发明专利技术提供细胞培养装置，其在使用形成有多个凹部的细胞培养袋进行细胞培养时，防止细胞在凹部间移动，并将在凹部内表面粘附的细胞或细胞凝集团块剥离，提高细胞或细胞凝集团块的增殖、诱导分化效率。本发明专利技术提供细胞培养方法，其使用细胞培养袋(1)，所述细胞培养袋具备由密封了周边部的上表面膜(21)及下表面膜(22)构成的袋主体(2)和安装在袋主体(2)的端口(3)，并在下表面膜(22)形成有多个凹部(4)，所述方法包括：将袋主体(2)中容纳的培养基(S)从端口(3)排出，以上表面膜(21)封闭多个凹部(4)的封闭工序；和在被封闭的多个凹部(4)的一部分或全部的凹部(4)中，将在该凹部(4)的内表面粘附的球状体剥离的剥离工序。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞培养方法及装置
本专利技术涉及细胞培养方法及装置，更具体而言，涉及使用设有多个凹部的细胞培养袋的细胞培养方法及装置。
技术介绍
近年来，在药物的生产、基因治疗，再生医疗，免疫疗法等领域中，要求将细胞(包括组织，微生物，病毒等)在人工的环境中效率良好地大量培养、诱导分化。在这样的细胞培养中，为了避免污染的风险，有时使用封闭体系的细胞培养袋。细胞培养袋例如由密封周边部的塑料膜构成的袋主体、和安装于袋主体的端口构成。在专利文献1中记载了通过在袋主体的底面设有多个凹部，抑制细胞培养袋内的细胞的移动的细胞培养袋。另一方面，在细胞培养中，一般而言，如果伴随细胞的增殖，培养基中的细胞浓度变得太高，则由于对增殖必需的培养基成分枯竭、细胞自身的代谢产物的蓄积等导致细胞的生长受到阻碍，使细胞的增殖效率降低，另一方面，培养基中细胞浓度过低，细胞的增殖、诱导分化的效率也降低。因此，为了提高细胞的培养、诱导分化效率，需要将细胞浓度维持在合理的范围内。在使用设有多个凹部的细胞培养袋进行球状体培养的情况下，也需要将各凹部中的细胞浓度维持在合理的范围中，因此，以使得各凹部的细胞数均一的方式将细胞接种在各凹部中。进一步，在所述球状体培养中，为了在各凹部中形成均一且适当的大小的球状体(细胞凝集团块)，要求在各凹部中各形成1个球状体，将每1个凹部1个球状体保持到培养结束。为了在1个凹部中形成1个球状体，优选在细胞培养袋的内表面实施细胞难以粘附的细胞低粘附处理，将细胞集中在细胞培养袋的冠球状的凹部的底部中央。作为细胞低粘附处理，可列举包覆例如磷脂聚合物，聚乙烯醇衍生物，表面活性剂或白蛋白这样的蛋白质等而在塑料膜的表面阻碍细胞粘附性蛋白的吸附的处理等。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特开2009-11260号公报
技术实现思路
专利技术所要解决的问题可是，即使对细胞培养袋实施了细胞低粘附处理，由于处理的不均匀、培养细胞的粘附力等各种原因，存在细胞、球状体粘附于凹部的内表面的情况。例如，如图10所示，接种在容纳有培养基S的细胞培养袋1的各凹部4中的细胞C，可能会通过细胞粘附性蛋白与凹部4的内表面的多个部位粘附。在这样的情况下，由于各细胞C以粘附的位置为出发点分别形成球状体，因此，会在1个凹部4中形成较小的多个球状体。然后，由于粘附在凹部4的内表面的球状体不发生移动，因此，球状体彼此粘附无法形成1个球状体。因此，为了在各凹部中各形成一个球状体，需要将在凹部内表面的多个部位粘附的细胞剥离，集中到凹部内的1个位置(例如：底部中央)。另外，即使在各凹部中各形成1个球状体的情况下，球状体也可能与凹部的内表面粘附。在球状体中与凹部内表面粘附的部分中，培养基成分容易枯竭，且代谢产物容易蓄积，因此，球状体整体的细胞的增殖、诱导分化效率会降低。因此，在球状体培养中，为了提高细胞的增殖、诱导分化效率，要求将粘附在凹部内表面的球状体定期地(例如，在培养基交换时)剥离，从而改变球状体的粘附位置。如果是在使用了以往的孔板的细胞培养中，可以通过用移液器使孔(凹部)内的培养基发生激流而剥离在孔的内表面粘附的细胞(例如：刚接种的细胞，或形成了球状体的细胞)。具体而言，可以通过将移液器前端插入孔中，以不吸上细胞的方式同时轻轻的吸上培养基，然后，将吸上来的培养基有力地注入孔中而在培养基中发生激流，通过激流而将细胞剥离。然而，在使用了细胞培养袋的细胞培养中，难以在保持封闭体系不变的状况下将移液器插入细胞培养袋内的凹部。需要说明的是，在使用了细胞培养袋的细胞培养中，可考虑如图11(a)所示，从端口3强力注入培养基S而在细胞培养袋1内产生培养基S的水流，将在凹部4的内壁粘附的细胞C剥离的方法。但是，在该方法中，如图11(b)所示，在凹部4内沉淀的细胞C、经剥离的细胞C会移动到其它凹部4中，各凹部4内的细胞浓度会变得不均一。尤其是，如果在1个凹部4中进入了许多细胞C，则最后成为过大的团块C’，细胞的增殖、诱导分化效率会降低。本专利技术是鉴于上述的状况而进行的，目的在于提供细胞培养方法及装置，其在使用形成有多个凹部的细胞培养袋进行细胞培养的时候，防止细胞在凹部间移动，并将在凹部的内表面粘附的细胞或细胞凝集团块剥离，可提高细胞或细胞凝集团块的增殖、诱导分化效率。解决问题的方法本专利技术涉及一种细胞培养方法，所述方法使用细胞培养袋，其中，所述细胞培养袋具备由密封了周边部的上表面膜及下表面膜构成的袋主体和安装在上述袋主体的端口，并在上述下表面膜形成有多个凹部，所述方法包括：将上述袋主体中容纳的培养基从上述端口排出，以上述上表面膜封闭上述多个凹部的封闭工序，和在被封闭的上述多个凹部的一部分或全部的凹部中，从上述细胞培养袋的外部对上述凹部给予物理刺激，将在该凹部的内表面粘附的细胞或细胞凝集团块剥离的剥离工序。另外，本专利技术涉及细胞培养装置，所述细胞培养装置使用细胞培养袋，其中，所述细胞培养袋具备由密封了周边部的上表面膜及下表面膜构成的袋主体和安装在上述袋主体的端口，并在上述下表面膜形成有多个凹部，所述细胞培养装置具备：具有装载上述细胞培养袋的装载面的支架，和将上述袋主体中容纳的培养基从上述端口排出，直到上述上表面膜将上述多个凹部封闭的送液部件，和在被封闭的上述多个凹部的一部分或全部的凹部中，为了将在该凹部的内表面粘附的细胞或细胞凝集团块剥离而从上述细胞培养袋的外部对该凹部给予物理刺激的剥离部件。专利技术的效果根据本专利技术的细胞培养方法及装置，其在使用形成有多个凹部的细胞培养袋进行细胞培养的时候，可以防止细胞在凹部间的移动，并将在凹部的内表面粘附的细胞或细胞凝集团块剥离，提高细胞或细胞凝集团块的增殖、诱导分化效率。例如，在细胞培养袋的凹部的内表面的多个部位发生粘附的情况下，通过将凹部封闭并对凹部给予物理刺激，可以防止细胞在凹部间的移动，同时将细胞剥离并使其集中在一个部位，在1个凹部中效率良好地形成1个细胞凝集团块(球状体)，提高细胞的增殖、诱导分化效率。进一步，例如，当细胞凝集团块粘附在细胞培养袋的凹部的内表面的情况下，通过将凹部封闭，对凹部给予物理刺激，可以防止细胞凝集团块在凹部间的移动，同时将细胞凝集团块剥离并改变细胞凝集团块的粘附部位，提高细胞凝集团块的增殖、诱导分化效率。附图说明[图1](a)显示示出本专利技术的实施方式所使用的细胞培养袋的概略的平面图，(b)显示示出本专利技术的实施方式所使用的细胞培养袋的概略的侧面图，(c)显示示出本专利技术的实施方式所使用的细胞培养袋的概略的底视图。[图2](a)示出本专利技术的第1实施方式涉及的细胞培养装置的剖面模式图，且按压构件上提的状态，(b)示出本专利技术的第1实施方式涉及的细胞培养装置的剖面模式图，且按压构件下压的状态。[图3](a)显示示出本专利技术的第1实施方式中的细胞培养中的状态的剖面模式图，(b)示出本专利技术的第1实施方式中的封闭工序的细胞培养袋的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.细胞培养方法，所述方法使用细胞培养袋，其中，所述细胞培养袋具备由密封了周边部的上表面膜及下表面膜构成的袋主体和安装在所述袋主体的端口，并在所述下表面膜形成有多个凹部，/n所述方法包括：将所述袋主体中容纳的培养基从所述端口排出，以所述上表面膜封闭所述多个凹部的封闭工序；和/n在被封闭的所述多个凹部的一部分或全部的凹部中，将在该凹部的内表面粘附的细胞或细胞凝集团块剥离的剥离工序。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180109 JP 2018-0010911.细胞培养方法，所述方法使用细胞培养袋，其中，所述细胞培养袋具备由密封了周边部的上表面膜及下表面膜构成的袋主体和安装在所述袋主体的端口，并在所述下表面膜形成有多个凹部，
所述方法包括：将所述袋主体中容纳的培养基从所述端口排出，以所述上表面膜封闭所述多个凹部的封闭工序；和
在被封闭的所述多个凹部的一部分或全部的凹部中，将在该凹部的内表面粘附的细胞或细胞凝集团块剥离的剥离工序。
2.根据权利要求1所述的细胞培养方法，其中，
在所述剥离工序中，在被封闭的所述多个凹部的一部分或全部的凹部中，从所述细胞培养袋的外部对所述凹部给予物理刺激，将在该凹部的内表面粘附的细胞或细胞凝集团块剥离。
3.根据权利要求2所述的细胞培养方法，其中，在所述剥离工序中，对所述多个凹部中的一部分或全部的凹部给予振动或摇动。
4.根据权利要求2或3所述的细胞培养方法，其中，在所述剥离工序中，从外侧顶推所述多个凹部中的一部分或全部的凹部。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的细胞培养方法，其中，在所述剥离工序中，所述多个凹部保持封闭状态，将所述细胞培养袋上下翻转和/或使其倾斜。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的细胞培养方法，包括
在所述剥离工序中，将所述多个凹部的一部分的凹部内的细胞或细胞凝集团块选择性剥离，
接着所述剥离工序，
从所述端口向所述袋主体内注入培养基，解除利用所述上表面膜进行的所述多个凹部的封闭的解除工序；和
将在所述剥离工序中选择性剥离的细胞或细胞凝集团块与培养基一起从所述端口排出到所述袋主体的外部的排出工序。
7.根据权利要求6所述的细胞培养方法，其中，
在所述排出工序中，以将所述细胞培养袋上下翻转的状态将所述选择性剥离的细胞或细胞凝集团块与培养基一起从所述端口排出到所述袋主体的外部。
8.根据权利要求7所述的细胞培养方法，其中，
在所述排出工序中，以使所述端口位于所述多个凹部的下方的方式使所述细胞培...
【专利技术属性】
技术研发人员：末永亮，光石真稀，
申请(专利权)人：东洋制罐集团控股株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP
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