一种黑老虎果皮提取物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及天然药物化学技术领域，具体公开了一种黑老虎果皮提取物及其制备方法和应用。所述的黑老虎果皮提取物的制备方法，其包含如下步骤：取黑老虎果皮，加乙醇，在50～70℃下进行超声提取，将提取液进行浓缩干燥后得所述的黑老虎果皮醇提物，即所述的黑老虎果皮提取物。由该方法制备得到的黑老虎果皮提取物显示出一定的抗病毒活性。

【技术实现步骤摘要】
一种黑老虎果皮提取物及其制备方法和应用
本专利技术涉及天然药物化学
，具体涉及一种黑老虎果皮提取物及其制备方法和应用。
技术介绍
黑老虎(Kadsuracoccinea)为五味子科南五味子属多年生常绿攀援藤本，又名冷饭团、过山龙、布福娜、钻地风等，广泛分布于湖南、贵州、福建、云南等地。黑老虎是一种开发潜力较高的食药两用型野生水果，根茎俗称大血藤有较高的药用价值，是一种重要的中药材；果实较大，呈紫红色，为聚合浆果，味酸甜，可生食，含有丰富的氨基酸、矿物质元素和多酚类物质。目前，对于黑老虎根茎的化学成分、药理作用、挥发油成分等研究较多，多酚类、木质素类、萜类及挥发油等活性成分具有抗氧化、抗炎抑菌、抗肿瘤、保肝、抗HIV、抗凝血、调节血脂等作用。目前，对于黑老虎果皮的抗病毒研究报道几乎没有，那么黑老虎果皮中是否具有抗病毒成分，其有效成分可以抗哪些病毒，以及如何从黑老虎果皮中制备得到抗病毒成分；有待本领域技术人员进一步研究。
技术实现思路
为了克服现有技术对黑老虎果皮的研究不足，提供一种黑老虎果皮提取物的制备方法。本专利技术的技术方案如下：一种黑老虎果皮提取物的制备方法，其包含如下步骤：取黑老虎果皮，加乙醇，在50～70℃下进行超声提取，将提取液进行浓缩干燥后得所述的黑老虎果皮醇提物，即所述的黑老虎果皮提取物。优选地，所述的乙醇为体积分数为70～95％乙醇。最优选地，所述的乙醇为体积分数为80％乙醇。优选地，黑老虎皮和乙醇的料液比为1g：20～30mL。最优选地，黑老虎皮和乙醇的料液比为1g：25mL。优选地，所述的提取时间为30～50min。最优选地，所述的提取时间为35min。优选地，超声提取的功率为150～200W。最优选地，超声提取的功率为180W。优选地，所述的黑老虎果皮提取物的制备方法，进一步包括硅胶柱层析步骤；所述的硅胶柱层析步骤具体包括：取黑老虎果皮醇提物上硅胶柱，先用体积比为92～90：8～10的氯仿和甲醇组成的混合溶剂进行洗脱除杂；再用体积比为85～87：15～13的氯仿和甲醇组成的混合溶剂进行洗脱，收集该洗脱部位浓缩干燥后即得所述的黑老虎果皮提取物。最优选地，所述的硅胶柱层析步骤具体包括：取黑老虎果皮醇提物上硅胶柱，先用体积比为90：10的氯仿和甲醇组成的混合溶剂进行洗脱除杂；再用体积比为85：15的氯仿和甲醇组成的混合溶剂进行洗脱，收集该洗脱部位浓缩干燥后即得所述的黑老虎果皮提取物。最优选地，取黑老虎果皮醇提物上硅胶柱，先用3～5倍柱体积的体积比为92～90：8～10的氯仿和甲醇组成的混合溶剂进行洗脱除杂；再用3～5倍柱体积的体积比为85～87：15～13的氯仿和甲醇组成的混合溶剂进行洗脱，收集该洗脱部位浓缩干燥后即得所述的黑老虎果皮提取物。优选地，所述的黑老虎果皮提取物为具有抗病毒作用的黑老虎果皮提取物。本专利技术还提供一种由上述制备方法制备得到的黑老虎果皮提取物。本专利技术还提供一种上述黑老虎果皮提取物在制备抗病毒药物中的应用。优选地，所述的病毒为柯萨奇病毒和单纯疱疹病毒。有益效果：本专利技术首次对黑老虎果皮中的有效成分进行研究；首次发现，所述的黑老虎果皮提取物具有抗柯萨奇病毒和单纯疱疹病毒的作用；所述的提取物尤其是对柯萨奇病毒显示出较强的抑制活性；此外，所述的黑老虎果皮醇提物进一步经本专利技术所述的硅胶柱层析技术后得到的黑老虎果皮提取物对柯萨奇病毒的抑制作用进一步增强，这是由于本专利技术所述的硅胶柱层析技术富集了大量的抗柯萨奇病毒活性成分。具体实施方式以下结合具体实施例来进一步解释本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何限制。实施例1黑老虎果皮提取物的制备取黑老虎新鲜果皮，按料液比为1g：25mL加入体积分数为80％乙醇，在60℃下进行超声提取35min(超声提取的功率为180W)，将提取液进行减压浓缩得浸膏，再将浸膏干燥后得所述的黑老虎果皮醇提物，即所述的黑老虎果皮提取物。实施例2黑老虎果皮提取物的制备(1)取黑老虎新鲜果皮，按料液比为1g：25mL加入体积分数为80％乙醇，在60℃下进行超声提取35min(超声提取的功率为180W)，将提取液进行减压浓缩得浸膏，再将浸膏干燥后得所述的黑老虎果皮醇提物；(2)将黑老虎果皮醇提物上硅胶柱(硅胶柱中填充有200-300目的硅胶；硅胶的重量用量为黑老虎果皮醇提物重量的30倍)，先用5倍柱体积的体积比为90：10的氯仿和甲醇组成的混合溶剂进行洗脱除杂；再用5倍柱体积的体积比为85：15的氯仿和甲醇组成的混合溶剂进行洗脱，收集该洗脱部位浓缩干燥后即得所述的黑老虎果皮提取物。对比例1黑老虎果皮提取物的制备(1)取黑老虎新鲜果皮，按料液比为1g：25mL加入体积分数为80％乙醇，在60℃下进行超声提取35min(超声提取的功率为180W)，将提取液进行减压浓缩得浸膏，再将浸膏干燥后得所述的黑老虎果皮醇提物；(2)将黑老虎果皮醇提物上硅胶柱(硅胶柱中填充有200-300目的硅胶；硅胶的重量用量为黑老虎果皮醇提物重量的30倍)，先用5倍柱体积的体积比为85：15的氯仿和甲醇组成的混合溶剂进行洗脱除杂；再用5倍柱体积的体积比为80：20的氯仿和甲醇组成的混合溶剂进行洗脱，收集该洗脱部位浓缩干燥后即得所述的黑老虎果皮提取物。对比例1与实施例2的区别在于，硅胶洗脱条件不同，得到的黑老虎果皮提取物中的有效成分不同。实施例3黑老虎果皮提取物抗病毒活性测试测试方法：MDCK细胞在96孔细胞培养板中长满单层后，用Eagle’s液清洗弃去上清液，然后在每孔中加入100μL100TCID50的病毒液；接着在每孔中加入100μL用MEM倍比稀释的药液，置于温度为37℃、5％CO2以及饱和湿度的培养箱中孵育48h，然后去除96孔板中的旧液，每孔加入10μL的CCK8溶液；培养箱孵育1h后，用酶标仪在450nm测吸光度。同时设细胞对照组和病毒对照组，并计算IC50值。测试病毒为柯萨奇病毒B3(VR30株)以及单纯疱疹病毒I型(SM44株)；测试药物为实施例1和2以及对比例1制备得到的黑老虎果皮提取物。IC50计算方式为：以药物浓度为X轴，细胞存活率为Y轴，在Origin作图，求出50％细胞存活率对应的药物浓度则为IC50；细胞存活率＝(加药孔OD值－病毒对照组OD值)/(细胞对照组OD值－病毒对照组OD值)×100％。表1.黑老虎果皮提取物抗病毒活性测试结果从表1数据中可以看出，本专利技术所述的黑老虎果皮提取物具有抗柯萨奇病毒以及单纯疱疹病毒作用；其中所述的提取物的抗柯萨奇病毒活性要更加优于单纯疱疹病毒。其中实施例2进一步经本专利技术硅胶柱层析技术制备得到的黑老虎果皮提取物，具有更加好的抗柯萨奇病毒作用；不过其抗单纯疱疹病毒的作用提升得并不明显。这说明经本专利技术硅胶柱层析方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种黑老虎果皮提取物的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：/n取黑老虎果皮，加乙醇，在50～70℃下进行超声提取，将提取液进行浓缩干燥后得所述的黑老虎果皮醇提物，即所述的黑老虎果皮提取物。/n

【技术特征摘要】
1.一种黑老虎果皮提取物的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：
取黑老虎果皮，加乙醇，在50～70℃下进行超声提取，将提取液进行浓缩干燥后得所述的黑老虎果皮醇提物，即所述的黑老虎果皮提取物。


2.根据权利要求1所述的黑老虎果皮提取物的制备方法，其特征在于，所述的乙醇为体积分数为70～95％乙醇；最优选地，所述的乙醇为体积分数为80％乙醇。


3.根据权利要求1所述的黑老虎果皮提取物的制备方法，其特征在于，黑老虎皮和乙醇的料液比为1g：20～30mL；最优选地，黑老虎皮和乙醇的料液比为1g：25mL。


4.根据权利要求1所述的黑老虎果皮提取物的制备方法，其特征在于，所述的提取时间为30～50min；最优选地，所述的提取时间为35min。


5.根据权利要求1所述的黑老虎果皮提取物的制备方法，其特征在于，超声提取的功率为150～200W；最优选地，超声提取的功率为180W。


6.根据权利要求1所述的黑老虎果皮提取物的制备方法，其特征在于，进一步包括硅胶柱层析步骤；所述的硅胶柱层析步骤具体包括：
取黑老虎果皮醇提物上硅...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺灵芝，梁忠厚，
申请(专利权)人：湖南环境生物职业技术学院，
类型：发明
国别省市：湖南;43