桦树花粉用于制备桦树花粉过敏药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了中国桦树花粉的一种新的用途，用于制备治疗中国桦树花粉引起过敏哮喘等一系列疾病的药物，并利用桦树花粉构建了一种过敏哮喘小鼠模型。

【技术实现步骤摘要】
桦树花粉用于制备桦树花粉过敏药物中的应用
本专利技术涉及医学制药
，具体涉及桦树花粉用于制备桦树花粉过敏药物的用途。
技术介绍
过敏性哮喘是由吸入变应原引起的复杂的多因素作用的疾病，多种遗传因素、生物介质、环境因素等共同参与了哮喘的发生发展过程。桦树花粉是重要的致敏原，是春季花粉症的重要病因之一。在欧洲，70％的桦树过敏患者会合并有花粉相关的食物过敏。目前除了对症治疗外，尚没有能长期有效控制过敏性哮喘症状，及减少患者吸入激素用量的方法。目前研究发现，CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与产生IL-17的Th17细胞的比例失调和功能缺陷，在过敏性哮喘的发生、发展中有重要作用，涉及多种细胞因子和信号通路，已成为目前研究的热点。多数研究认为，过敏性症状的缓解与Th2细胞因子减少，Th1/Th2左偏移密切相关。Treg细胞和Th17细胞是机体免疫系统中不可或缺的调节细胞，相互拮抗，共同维持机体内环境的平衡。Th17细胞受转录因子RORC家族调控，分泌IL-17，包括(IL-17A～F)6种亚型，主要通过激活促炎因子，引起炎症的发生。Treg细胞是体内重要的负调控细胞，生成受转录调控因子Foxp3的调控，分泌IL-10和TGF-β，主要通过抑制炎性介质及炎性趋化因子的分泌，抑制炎症的发生。还有研究认为，IgG4的产生能与IgE相互拮抗，抑制IgE交联，从而防止肥大细胞脱颗粒。但是对于桦树花粉过敏出现的哮喘症状的机制并不明确，免疫应答的改变也不明确。如何明确我国桦树花粉过敏出现的哮喘症状的机制，及其免疫应答的改变，对临床上过敏性哮喘的治疗有重大意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供中国桦树花粉一种新的用途，用于制备治疗中国桦树花粉引起过敏哮喘等一系列疾病的药物。为实现上述目的，本专利技术采用以下的技术方案为：中国桦树花粉用于制备治疗桦树花粉过敏药物中的应用。本专利技术研究发现中国桦树花粉可采用中国桦树花粉溶于PBS溶液中，用于治疗中国桦树花粉过敏的症状。中国桦树花粉能应用于治疗花粉过敏相关疾病。当用于治疗过敏性花粉相关疾病时，所述中国桦树花粉溶于PBS溶液和佐剂联合使用，用于针剂使用。进一步的，针对18-20g的小鼠，治疗时，桦树花粉用量为300μg。一种构建桦树花粉过敏的哮喘小鼠模型的方法，包括以下步骤：(1).分别于第1天、第8天和第15天对每只小鼠麻醉后，颈后皮下注射100μL的中国桦树花粉溶液和100μL氢氧化铝溶液的作为哮喘组；同时采用颈后皮下注射100μLPBS和100μL氢氧化铝溶液的作为对照组；(2).第24-26天，将所述步骤(1)后的小鼠进行雾化吸入的中国桦树花粉溶液，连续3天，每天30分钟；(3).第27天，对步骤(2)后的小鼠，测定小鼠的肺功能比气道阻力sRaw值，所述比气道阻力sRaw值为气道阻力与胸腔气量的乘积，当乙酰甲胆碱浓度大于等于25mg/mL时，测得哮喘组的比气道阻力sRaw值高于对照组时，哮喘模型小鼠构建成功；(4).特异性免疫治疗：桦树花粉致敏激发小鼠，从第32天开始，颈后皮下注射150μL浓度为2μg/μL的桦树花粉溶液，隔天一次，总计8次；第53-55天，雾化吸入0.1％的桦树花粉溶液，连续3天，每天30分钟；第56天行肺功能检查，24小时后取材。如上所述的方法，优选地，在所述步骤(1)中，所述中国桦树花粉溶液中中国桦树花粉的浓度为0.25μg/μL，溶液为PBS。如上所述的方法，优选地，在所述步骤(1)中，所述麻醉采用1％苯巴比妥。如上所述的方法，优选地，在所述步骤(2)中，所述中国桦树花粉浓度为0.1％。本专利技术通过先构建的桦树花粉过敏的哮喘小鼠模型，通过系统地对肺功能，肺组织病理，支气管肺泡灌洗液细胞因子量，sIgE含量等进行综合评定，该模型的建立能更好的贴近临床现象。通过采用中国桦树花粉对构建的哮喘小鼠模型的治疗获得如下结果：(1)研究发现哮喘组小鼠肺功能比气道阻力sRaw值较对照组明显升高，特别是在乙酰甲胆碱浓度为25mg/mL和50mg/mL时(P<0.01)，证明小鼠哮喘模型建立成功。经中国桦树花粉治疗后，治疗组sRAW值较哮喘组降低，特别是在乙酰胆碱浓独为25mg/mL和50mg/mL时(P<0.01)，证明中国桦树花粉治疗改善了小鼠的气道高反应性。(2)哮喘组小鼠支气管肺泡灌洗液中炎症细胞总数，中性粒细胞数，淋巴细胞数，单个核细胞数，嗜酸性粒细胞数数量相比于对照组都明显升高(P＜0.01)；说明哮喘组小鼠的气道发生了严重的炎症反应，且炎症细胞的浸润以嗜酸性淋巴细胞(EOS)为主，EOS％也明显增高(P＜0.01)，说明哮喘模型建立成功。经过中国桦树花粉治疗后，治疗组小鼠支气管肺泡灌洗液中炎症细胞总数，中性粒细胞数，淋巴细胞数，嗜酸性粒细胞数数量相比于哮喘组都明显降低(P＜0.01)，EOS％也明显下降(P＜0.01)，说明中国桦树花粉脱敏治疗能有效抑制小鼠气道炎症，减少细胞浸润。嗜碱性粒细胞数量在各组中均没有明显区别。(3)研究发现哮喘组小鼠血清中桦树花粉sIgE的表达量显著高于对照组小鼠(P＜0.01)，证明本实验建模成功，可以诱导小鼠产生大量桦树花粉特异性IgE。经过中国桦树花粉治疗后，治疗组小鼠血清中桦树花粉sIgE的表达量相对于哮喘组明显降低(P＜0.01)，证明中国桦树花粉治疗能成功抑制桦树花粉特异性IgE产生。(4)肺组织H&E染色发现哮喘组小鼠肺部气管及周围血管旁有大量炎性细胞浸润，形成多层细胞环，同时伴有气道壁增厚和水肿。对照组未见特殊异常。经中国桦树花粉治疗后，小鼠肺部气管和周围血管旁的炎症细胞浸润和水肿明显缓解；肺组织AB-PAS染色发现：哮喘组气道壁广泛被染成蓝紫色，气道内也可以看到弥散的蓝紫色，说明产生大量的粘液物质；气道上皮中增生的杯状细胞占气道上皮细胞总数＞75％。对照组未见明显异常，气道上皮中增生的杯状细胞占气道上皮细胞总数<25％。治疗组气道壁部分被染成蓝紫色，气道上皮中增生的杯状细胞占气道上皮细胞总数<50％。(5)哮喘组小鼠脾脏Th17的转录因子Rorc的表达量(3.39±1.39)较对照组(1.79±1.19)显著升高P<0.01，证明哮喘能激发Th17型免疫应答。经治疗后，治疗组Th17的转录因子Rorc的表达量(0.65±0.23)明显降低P<0.01，有统计学意义，证明中国桦树花粉治疗能有效缓解Th17型免疫应答。(6)模型组小鼠脾脏Th17百分比(0.37±0.16)较对照组(0.18±0.86)显著升高P<0.05，证明哮喘能激发Th17型免疫应答。经中国桦树花粉治疗后，治疗组Th17(0.16±0.16)降低P<0.05，有统计学意义，证明中国桦树花粉治疗能有效缓解Th17型免疫应答。(7)激发安全性监测：激发后，每10分钟检测一次小鼠核心体温，持续3次本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.中国桦树花粉用于制备治疗桦树花粉过敏药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.中国桦树花粉用于制备治疗桦树花粉过敏药物中的应用。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述桦树花粉为中国桦树花粉。


3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述中国桦树花粉溶于PBS溶液和佐剂联合使用，用于针剂使用。


4.一种构建桦树花粉过敏的哮喘小鼠模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1).分别于第1天、第8天和第15天对每只小鼠麻醉后，颈后皮下注射100μL的桦树花粉溶液和100μL氢氧化铝溶液作为哮喘组；
同时采用颈后皮下注射100μLPBS和100μL氢氧化铝溶液作为对照组；
(2).第24-26天，将所述步骤(1)后的小鼠进行雾化吸入的中国桦树花粉溶液，连续3天，每天30分钟；
(3).第27天，对步骤(2)后的小鼠，测定小鼠的肺功能比气道阻力sRaw值，所述比气道阻力sRa...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢枝隽，尹佳，周俊雄，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：北京;11