一种驴用精子稀释液及其制备方法和应用技术

一种驴用精子稀释液，以所述驴用精子稀释液的质量计，包括以下组分：Tris 30.4±0.5g，柠檬酸17.0±0.2g，葡萄糖7.5±0.1g，牛磺酸12.5±0.2mg，丙酮酸钠36.3±0.5mg，果糖1.5±0.1g，改性卵磷脂2±0.1g，己酮可可碱1.5±0.1g，大豆异黄酮25.4±0.3mg，以注射用水溶解。本发明专利技术通过采用改性卵磷脂，规避了普通磷脂中不规则颗粒对于精子的伤害，同时起到调节渗透压，保护精子细胞膜的作用，有利于提高精子存活率；采用己酮可可碱，使精子胞浆内的cAMP浓度增加，激活cAMP依赖性蛋白酶，使精子尾部磷酸化，增强其运动能力；采用大豆异黄酮，清除精子在体外环境中过多的自由氧，避免精子受到氧化损伤，维持精子活力，提高人工授精的成功率。

【技术实现步骤摘要】
一种驴用精子稀释液及其制备方法和应用
本专利技术涉及一种驴用精子稀释液及其制备方法和应用。
技术介绍
驴是农役的重要资源，肉、药、皮革的辅助性资源，但由于养殖效益差的原因，近年来存栏数量持续减少。采用人工授精技术，不仅能够保留优秀公驴的遗传信息资源，改良驴种，同时能够在养殖少量公驴，降低饲养成本的情况下保证较高的繁育率。在驴的人工授精技术中，取得种驴的鲜精后，需使用精子稀释液将一份原精稀释为若干份精液，向处于发情期的多头母驴配种。目前市面上已有的部分精子稀释液添加了卵黄等物质，但是卵黄来源于鸡蛋，存在潜在生物风险，卵黄的生物活性蛋白物质存在潜在过敏反应，在后期清洗中难以去除。现有的稀释液不能有效地向鲜精提供营养物质，导致稀释后的精液活力低，最终导致母驴的受孕率低。
技术实现思路
本专利技术克服现有技术存在的缺陷，提出了一种精子稀释液及其制备方法，解决现有产品中添加卵黄物质带来的生物安全问题，以及稀释后精子活力不足的问题。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：以所述驴用精子稀释液的质量计，所述驴用精子稀释液包括以下组分：Tris30.4±0.5g，柠檬酸17.0±0.2g，葡萄糖7.5±0.1g，牛磺酸12.5±0.2mg，丙酮酸钠36.3±0.5mg，果糖1.5±0.1g，改性卵磷脂2±0.1g，己酮可可碱1.5±0.1g，大豆异黄酮25.4±0.3mg，以注射用水溶解。进一步地，所述驴用精子稀释液中还包括以下组分：谷氨酰胺146.1±0.5mg，甘氨酸7.5±0.1mg，庆大霉素1000000U。一种驴用精子稀释液的制备方法，包括如下步骤：S1、按配方称取30.4±0.5gTris、17.0±0.2g柠檬酸、7.5±0.1g葡萄糖、12.5±0.2mg牛磺酸、36.3±0.5mg丙酮酸钠和1.5±0.1g果糖，在800mL注射用水中溶解；S2、向S1中混合液中加入2±0.1g改性卵磷脂、1.5±0.1g大豆异黄酮、25.4±0.3mg己酮可可碱定容至1L后采用0.22μm滤膜过滤；S3、将S2中所得溶液按每瓶200mL无菌分装，2-8℃避光保存。进一步地，所述S1混合液中还加入有146.1±0.5mg谷氨酰胺、7.5±0.1mg甘氨酸和1000000U庆大霉素。进一步地，所述S2中所得精子稀释液渗透压为295-305mOsm/Kg，pH为7.0～7.3。进一步地，所述精子稀释液用于人工授精中驴精液的稀释。与现有技术相比，本专利技术的有益效果包括：1)通过采用改性卵磷脂，比普通卵磷脂可更好的分散于溶液中，规避了普通磷脂中不规则颗粒对于精子的伤害，同时起到调节渗透压，降低精液中电解质浓度，保护精子膜的作用，有利于精子存活；2)通过采用己酮可可碱，可通过抑制磷酸二酯酶(PDE)的活性，减少精细胞内环磷酸腺苷(cAMP)的降解，使精子胞浆内的cAMP浓度增加，激活cAMP依赖性蛋白酶，使精子尾部磷酸化，增强其运动能力；3)通过采用大豆异黄酮，可起到清除自由基，提高抗氧化酶的活性，并作为一种抗氧化剂，清除精子在体外环境中过多的自由氧，避免精细胞受到氧化损伤，维持精细胞活力，提高人工授精的成功率。附图说明参照附图来说明本专利技术的公开内容。应当了解，附图仅仅用于说明目的，而并非意在对本专利技术的保护范围构成限制。在附图中，相同的附图标记用于指代相同的部件。其中：图1为驴精液经本专利技术稀释液以及驴场自配稀释液稀释前后精子活力曲线图。具体实施方式容易理解，根据本专利技术的技术方案，在不变更本专利技术实质精神下，本领域的一般技术人员可以提出可相互替换的多种结构方式以及实现方式。因此，以下具体实施方式以及附图仅是对本专利技术的技术方案的示例性说明，而不应当视为本专利技术的全部或者视为对本专利技术技术方案的限定或限制。改性卵磷脂，比普通卵磷脂可更好的分散于溶液中，规避了普通磷脂中不规则颗粒对于精子的伤害，同时起到调节渗透压，降低精液中电解质浓度，保护精子膜的作用，有利于精子存活。己酮可可碱，可通过抑制磷酸二酯酶(PDE)的活性，减少精细胞内环磷酸腺苷(cAMP)的降解，使精子胞浆内的cAMP浓度增加，激活cAMP依赖性蛋白酶，使精子尾部磷酸化，增强其运动能力。大豆异黄酮，可起到清除自由基，提高抗氧化酶的活性，并作为一种抗氧化剂，清除精子在体外环境中过多的自由氧，避免精细胞受到氧化损伤，维持精细胞活力，提高人工授精的成功率。Tris和柠檬酸作为缓冲物质，平衡由精子新陈代谢带来的酸碱度变化，维持精子生存环境。所用葡萄糖、果糖作为营养物质，为精子提供外源性营养和能源，同时也可调节稀释液的渗透压。牛磺酸、谷氨酰胺、丙酮酸钠、甘氨酸为抗氧化剂，用于保护精细胞膜上磷质层完整性，降低细胞内氧自由基水平，保护精细胞。庆大霉素，为防护在人工授精各过程中可能受到的细菌污染，抑制细菌在稀释液或精液中的滋生。稀释方法中对精液、容器、稀释液温度的要求，是为了防止精液对温度骤变产生的应激反应导致活力降低或死亡。实施例1按配方称取Tris30.4g，柠檬酸17.0g，葡萄糖7.5g，牛磺酸12.5mg，谷氨酰胺146.1mg，丙酮酸钠36.3mg，甘氨酸7.5mg，果糖1.5g，改性卵磷脂2.0g，已酮可可碱1.5g，大豆异黄酮25.4mg和庆大霉素1000000U。将上述Tris、柠檬酸、葡萄糖、牛磺酸和丙酮酸钠置于800mL注射用水中溶解后经0.22μm滤膜过滤，去除上述无机盐固体中的杂质。加入组分中的谷氨酰胺、甘氨酸和庆大霉素搅拌均与后测得溶液渗透压为306mOms/kg，pH为7.06向上述溶液中再次加入改性卵磷脂、大豆异黄酮以及已酮可可碱后定容至1L，再次经过0.22μm滤膜过滤，按每瓶200mL无菌分装，2-8℃避光保存。实施例2按配方称取Tris29.9g，柠檬酸16.8g，葡萄糖7.4g，牛磺酸12.3mg，谷氨酰胺145.6mg，丙酮酸钠35.8mg，甘氨酸7.4mg，果糖1.4g，改性卵磷脂1.9g，已酮可可碱1.4g，大豆异黄酮25.1mg和庆大霉素1000000U。将上述Tris、柠檬酸、葡萄糖、牛磺酸和丙酮酸钠置于800mL注射用水中溶解后经0.22μm滤膜过滤，去除上述无机盐固体中的杂质。加入组分中的谷氨酰胺、甘氨酸和庆大霉素搅拌均与后测得溶液渗透压为298mOms/kg，pH为7.14向上述溶液中再次加入改性卵磷脂、大豆异黄酮以及已酮可可碱后定容至1L，再次经过0.22μm滤膜过滤，按每瓶200mL无菌分装，2-8℃避光保存。实施例3按配方称取Tris30.9g，柠檬酸17.2g，葡萄糖7.6g，牛磺酸12.7mg，谷氨酰胺146.6mg，丙酮酸钠36.8mg，甘氨酸7.6mg，果糖1.6g，改性卵磷脂2.1g，已酮可可碱1.6g，大豆异黄酮25.7mg和庆大霉素1000000本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种精子稀释液，其特征在于，以所述精子稀释液的质量计，包括以下组分：Tris30.4±0.5g，柠檬酸17.0±0.2g，葡萄糖7.5±0.1g，牛磺酸12.5±0.2mg，丙酮酸钠36.3±0.5mg，果糖1.5±0.1g，改性卵磷脂2±0.1g，己酮可可碱1.5±0.1g，大豆异黄酮25.4±0.3mg，以注射用水溶解。/n

【技术特征摘要】
1.一种精子稀释液，其特征在于，以所述精子稀释液的质量计，包括以下组分：Tris30.4±0.5g，柠檬酸17.0±0.2g，葡萄糖7.5±0.1g，牛磺酸12.5±0.2mg，丙酮酸钠36.3±0.5mg，果糖1.5±0.1g，改性卵磷脂2±0.1g，己酮可可碱1.5±0.1g，大豆异黄酮25.4±0.3mg，以注射用水溶解。


2.根据权利要求1所述的精子稀释液，其特征在于，所述精子稀释液中还包括以下组分：谷氨酰胺146.1±0.5mg，甘氨酸7.5±0.1mg，庆大霉素1000000U。


3.一种精子稀释液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、按配方称取30.4±0.5gTris、17.0±0.2g柠檬酸、7.5±0.1g葡萄糖、12.5±0.2mg牛磺酸、36.3±0.5mg丙酮...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘年，
申请(专利权)人：太东镇江生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32