可抑制CALB2蛋白表达的抑制剂的应用和肝癌药物制造技术

本发明专利技术涉及抑制肝癌转移的方法和试剂。本发明专利技术提供了一种可抑制CALB2蛋白表达的抑制剂在制备治疗肝癌转移药物中的应用。肝癌转移是影响肝癌患者预后的重大障碍。本发明专利技术提供了一种可抑制肝癌转移的方法和试剂，用于治疗肝癌转移，提高肝癌患者预后效果。

【技术实现步骤摘要】
可抑制CALB2蛋白表达的抑制剂的应用和肝癌药物
本专利技术涉及肝癌治疗领域，特别地，涉及一种可抑制CALB2蛋白表达的抑制剂在制备治疗肝癌转移药物中的应用。
技术介绍
肝脏是人体物质代谢，能量转换及供应的枢纽和主导器官。癌症是人口死亡的第二位原因。肝癌发病率高而且死亡率高，其5年生存率仅5％-6％。目前原发性肝癌已上升为我国第二位癌症杀手。由于原发性肝癌早期一般无任何症状，一旦出现临床表现，病情大多已进入中期或晚期，而且恶性程度高、预后差、侵袭转移性强。临床数据显示，肝癌的高侵袭转移能力和术后高复发转移率是影响肝癌病人长期生存的重要因素。因此，肝癌转移是生命科学需要迫切解决的问题。肝癌转移分为远处转移和肝内转移。转移进程大体包含肿瘤细胞获得向外侵袭的能力使得细胞脱离原发器官侵入周围组织并穿入淋巴管和血管；随循环系统运行，停留；肿瘤细胞增殖，形成转移灶。染色体水平的变化，癌基因表达增加，抑癌基因的失活，上皮细胞-间充质转化，肿瘤细胞间蛋白水解酶的合成，细胞与基底膜的黏着，免疫系统免疫识别低下，一些细胞因子及受体的改变等因素都可能促进肝癌的转移。细胞迁移与运动能力的提高是引起肿瘤侵入周围组织和发生远处转移的关键因素。但是，调控肝癌细胞运动侵袭能力的分子机制仍不明朗，难以开发出有效的抑制肝癌转移的药物，因此，寻找并发现肝癌转移相关蛋白用于转移和复发研究、药物靶标的设计，这对于实现肝癌病人生存率的提高，具有重要意义。CALB2是一种钙结合蛋白，在听觉神经元中含量丰富。CALB2蛋白在多种细胞功能中起作用，包括信息靶向和细胞内钙缓冲，参与钙信号传导通路。Ca2+是协调内质网-线粒体的相互作用，调节细胞凋亡的信使。线粒体Ca2+动力学还参与细胞能量代谢的调节以及细胞运动和神经递质释放等过程。CALB2还是一种间皮瘤诊断标志(DoglioniC,etal.Calretinin:ANovelImmunocytochemicalMarkerforMesothelioma.AmericanJournalofSurgicalPathology,1996,20(9):1037–1046；ChuAY,etal，UtilityofD2-40,anovelmesothelialmarker,inthediagnosisofmalignantmesothelioma.ModernPathology,2005,18(1):105–110.)。有研究显示，正常结肠上皮细胞中没有CALB2的表达，但在原发性结肠癌细胞中发现有表达(GotzosV,etal.Selectivedistributionofcalretinininadenocarcinomasofthehumancolonandadjacenttissues.AmericanJournalofSurgicalPathology,1999,23(6):701–711；GotzosV,etal.Heterogeneityofexpressionofthecalcium-bindingproteincalretinininhumancoloniccancercelllines.AnticancerResearch,1996,16(6B):3491–3498.)。结直肠癌细胞经5-FU治疗后，CALB2可通过内在的线粒体途径参与凋亡诱导(StevensonL,etal.Calbindin2(CALB2)Regulates5-FluorouracilSensitivityinColorectalCancerbyModulatingtheIntrinsicApoptoticPathway.PlosOne,2011,6(5):1575-1581.)。还有报道显示CALB2作为间质细胞内的因子,通过PLC-Ca2+-PKC信号通路参与调节类固醇激素的合成，并可能是通过加强PI3K-AKT和ERKl/2信号促进间质细胞增殖(XuW,etal.CalretininParticipatesinRegulatingSteroidogenesisbyPLC-Ca2+-PKCPathwayinLeydigCells.ScientificReports,2018,8.)。然而目前，关于CALB2能否调控肝癌细胞的生长，迁移和侵袭以及如何调控，并没有报道。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种可抑制CALB2蛋白表达的抑制剂在制备治疗肝癌转移药物中的应用，以解决现有技术中肝癌患者术后肝癌细胞侵袭转移的技术问题。为实现上述目的，本专利技术提供了一种可抑制CALB2蛋白表达的抑制剂在制备治疗肝癌转移药物中的应用。进一步地，药物含有效剂量的抑制CALB2蛋白的基因的病毒载体。进一步地，病毒载体为慢病毒载体，采用的慢病毒包装质粒为PSPAX，PVSVG，抑制CALB2蛋白的基因序列有三种中的一种或二种或三种，优选sh1。转染细胞后采用抗生素进行筛选。CALB2-sh1sh1fullhairpinTGCTGTTGACAGTGAGCGCTAACGCCALB2-sh1TGATCTTCTTCAGGTTAACCCAACAGAAGGCTCGAGAAGGTATATTGCTGTTGACAGTGAGCGCTAACGCsh1fullhairpinGATCTTCACATTTTATAGTGAAGCCACAGATGTATAAAATGTGAAGATCGCGTTAATGCCTACTGCCTCGCALB2-sh1GATCTTCACATTTTATAGTGAAGCCACAGATGTATAAAATGTGAAGATCGCGTTAATGCCTACTGCCTCGsh1fullhairpinGACALB2-sh1GAATTCAAGGGGCTACTTTAGGAGCAATTATCTTGTTTACTAAAACTGAATACCTTGCTATCTCTTTGATsh1fullhairpinCALB2-sh1ACATTTTTACAAAGCTGAATTAAAATGGTATAAATTAAATCACTTTTTTGGCCGGCCCCAGCTCTGGAGTCALB2-sh2sh2fullhairpinTGCTGTTGACAGTGAGCGATACGAGAAAAACALB2-sh2TCTTCTTCGGTTACCCAACAGAAGGCTCGAGAAGGTATATTGCTGTTGACAGTGAGCGATACGAGAAAAAsh2fullhairpinCAAAAAGGAATAGTGAAGCCACAGATGTATTCCTTTTTGTTTTTCTCGTACTGCCTACTGCCTCGGACALB2-sh2CAAAAAGGAATAGTGAAGCCACAGATGTATTCCTTTTTGTTTTTCTCGTACTGCCTACTGCCTCGGAATTsh2fullhairpinCALB2-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可抑制CALB2蛋白表达的抑制剂在制备治疗肝癌转移药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.一种可抑制CALB2蛋白表达的抑制剂在制备治疗肝癌转移药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述可抑制CALB2蛋白表达的抑制剂在制备抑制肝癌细胞的侵袭和/或转移的药物中的应用。


3.根据权利要求1或2所述的治疗肝癌转移的药物，其特征在于，所述抑制剂包括能够抑制CALB2或涉及CALB2上游或下游途径的物质的表达或活性的抑制剂中的一种或二种以上。


4.一种治疗肝癌转移的药物，其特征在于，所述药物以可抑制CALB2蛋白表达的抑制剂为活性成份。


5.根据权利要求1所述的药物，其特征在于，所述抑制剂包括能够抑制CALB2或涉及CALB2上游或下游途径的物质的表达或活性的抑制剂中的一种或二种以上。


6.一种治疗肝癌转移的药物，其特征在于，所述药物包含有效剂量的可抑制CALB2蛋白的基因的病毒载体。


7.根据权利要求6所述的治疗肝癌转移的药物，其特征在于，所述病毒载体为慢病毒载体，采用的慢病毒包装质粒为PSPAX，PVSVG，以及抑制CALB2蛋白的基因序列有三种中的一种或二种或三种，优选sh1；
CALB2-sh1
sh1fullhairpin
TGCTGTTGACAGTGAGCGCTAACGC
CALB2-sh1
TGATCTTCTTCAGGTTAACCCAACAGAAGGCTCGAGAAGGTATATTGCTGTTGACAGTGAGCGCTAACGC
sh1fullhairpin
GATCTTCACATTTTATAGTGAAGCCACAGATGTATAAAATGTGAAGATCGCGTTAATGCCTACTGCCTCG
CALB2-sh1
GATCTTCACATTTTATAGTGAAGCCACAGATGTATAAAATGTGAAGATCGCGTTAATGCCTACTGCCTCG
sh1fullhairpin
GA
CALB2-sh1
GAATTCAAGGGGCTACTTTAGGAGCAATTATCTTGTTTACTAAAACTGAATACCTTGCTATCTCTTTGAT
sh1fullhairpin
CALB2-sh1
ACATTTTTACAAAGCTGAATTAAAATGGTATAAATTAAATCACTTTTTTGGCCGGCCCCAGCTCT...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽华，褚宏伟，赵宝锋，杨开广，梁振，张玉奎，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21