一种用于治疗仔猪腹泻的组合型噬菌体制剂制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体是一种用于治疗仔猪腹泻的组合型噬菌体制剂。包括大肠杆菌噬菌体vB_EcoP_E21，大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_F2和志贺氏菌噬菌vB_SsoM_Z31；大肠杆菌噬菌体vB_EcoP_E21保藏编号为：CGMCC 18869，大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_F2保藏编号为：CGMCC 18871，志贺氏菌噬菌体vB_SsoM_Z31保藏编号为：CGMCC 18870。本发明专利技术的组合型噬菌体制剂，以直接灌服的方式施用，可降低大肠杆菌和志贺菌丰度，有效防治养殖过程中仔猪腹泻疾病的发生，提高仔猪成活率，减少经济损失。本发明专利技术提供的组合型噬菌体制剂可代替传统饲用抗生素的使用，具有安全、高效、无残留等特点，是一种理想的抗生素替代品。

【技术实现步骤摘要】
一种用于治疗仔猪腹泻的组合型噬菌体制剂
本专利技术属于生物
，涉及三株能够特异性裂解仔猪产肠毒素大肠杆菌、多重耐药大肠杆菌及痢疾志贺菌菌株的噬菌体分离物及其在治疗仔猪腹泻中的应用。
技术介绍
初生仔猪因肠道未建立稳定的微生态系统，自身抵抗力较低，对外界刺激敏感，易受病原微生物的侵染和各种应激因素的影响。引起仔猪腹泻的传染性因素有病毒性和细菌性两大类，其中细菌性腹泻主要由大肠杆菌和志贺菌引起。仔猪大肠杆菌感染具有流行面广、发病率和死亡率高等特点，往往导致仔猪成活率下降、生长受阻甚至死亡。在临床上，治疗大肠杆菌和志贺菌感染的基本方法是采用抗菌药物。近些年，随着抗菌药物的大量使用，尤其是作为饲料添加剂长期添加于饲料中，使得大肠杆菌产生耐药性，耐药谱不断扩大，传播速度越来越快，多重耐药大肠杆菌的数量也在不断增加，严重威胁着人们的健康和公共卫生安全。当前，全球养殖业已经全面掀起“禁抗”的热潮，2019年7月10日，农业农村部发布194号公告，自2020年1月1日起，退出除中药外的所有促生长类药物饲料添加剂品种，加快了我国进入“无抗时代”的脚步。噬菌体是一类可感染细菌、真菌和放线菌的病毒总称，结构简单、分布广泛，被誉为生物圈中最为丰富的生物实体。噬菌体疗法与传统抗生素相比，具有自我复制能力强、宿主专一性高、安全、研发成本低等优势，是理想的抗生素替代品。但是噬菌体疗法也存在裂解谱过于狭窄、作用效果不稳定、裂解活性不强等问题。本专利技术选用的噬菌体专门针对引起仔猪腹泻的产肠毒素大肠杆菌、多重耐药大肠杆菌和痢疾志贺菌，具有效价高、稳定性好和较强的裂解活性，这三种噬菌体的混合制剂克服了以往噬菌体产品裂解谱窄的缺点，能够有效防治仔猪腹泻细菌性疾病。
技术实现思路
为了防治由大肠杆菌、志贺菌等引起的仔猪腹泻，本专利技术提供了一种产肠毒素大肠杆菌、多重耐药大肠杆菌和痢疾志贺菌组合型噬菌体制剂，同时提供了该噬菌体制剂在防治仔猪腹泻的应用。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术提供了一种组合型噬菌体制剂，包括三种噬菌体，大肠杆菌噬菌体vB_EcoP_E21、大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_F2和志贺氏菌噬菌体vB_SsoM_Z31，大肠杆菌噬菌体vB_EcoP_E21于2019年11月06日保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏号为CGMCCNO.18869，分类命名为大肠杆菌噬菌体；大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_F2于2019年11月06日保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏号为CGMCCNO.18871，分类命名为大肠杆菌噬菌体；志贺氏菌噬菌体vB_SsoM_Z31于2019年11月06日保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏号为CGMCCNO.18870，分类命名为志贺氏菌噬菌体。中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：10010。本专利技术大肠杆菌噬菌体vB_EcoP_E21透射电镜观察表明，该噬菌体属于有尾噬菌体目，短尾噬菌体科，头部衣壳直径52.1±1.2nm，尾部长10.4±1.1nm，一步生长曲线表明该噬菌体裂解细菌的潜伏期为20min，裂解量为370PFU/mL；大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_F2透射电镜观察表明，该噬菌体属于有尾噬菌体目，肌尾噬菌体科，头部衣壳直径160±1.1nm，尾部长19±1.4nm，一步生长曲线表明该噬菌体潜伏期为30min，裂解量为110PFU/mL；志贺氏菌噬菌体vB_SsoM_Z31透射电镜观察表明，该噬菌体属于有尾噬菌体目，肌尾噬菌体科，头部直径63.8±1.3nm，尾部长102±2.3nm，一步生长曲线表明该噬菌体潜伏期为10min，裂解量为115PFU/mL。上述技术方案中，进一步地，所述大肠杆菌噬菌体vB_EcoP_E21、大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_F2和志贺氏菌噬菌体vB_SsoM_Z31的体积比为1:1:1。本专利技术另一方面还提供了一种组合型噬菌体制剂在防治仔猪腹泻的细菌性疾病中的初步应用，使用本专利技术噬菌体液对发病期的仔猪进行灌服，组合型噬菌体效价≥1010PFU/mL，每天灌服1次，连续进行3-7天，可以有效治疗或预防仔猪腹泻。进一步地，灌服时，先灌服100mL浓度为1.2-1.4％的小苏打溶液，10-15min后，再灌服100mL组合型噬菌体制剂裂解液。本专利技术的有益效果：本专利技术的组合型噬菌体制剂，以直接灌服的方式施用，可降低大肠杆菌和志贺菌丰度，有效防治养殖过程中仔猪腹泻疾病的发生，提高仔猪成活率，减少经济损失。使用本专利技术组合型噬菌体制剂控制仔猪腹泻，能够减少抗生素在仔猪养殖过程中的使用量，降低耐药菌株的出现几率，从源头上维护养殖业生产安全、动物源性食品安全、公共卫生安全和生态环境安全，本专利技术提供的组合型噬菌体制剂可代替传统饲用抗生素的使用，具有安全、高效、无残留等特点，是一种理想的抗生素替代品。附图说明图1投射电镜观察噬菌体形态，a.噬菌体vB_EcoP_E21，b.vB_EcoM_F2，c.vB_SsoM_Z31；图2噬菌体温度稳定性，a.噬菌体vB_EcoP_E21，b.vB_EcoM_F2，c.vB_SsoM_Z31；图3噬菌体pH值稳定性，a.噬菌体vB_EcoP_E21，b.vB_EcoM_F2，c.vB_SsoM_Z31；图4噬菌体一步生长曲线，a.噬菌体vB_EcoP_E21，b.vB_EcoM_F2，c.vB_SsoM_Z31；图5实施例6试验猪直肠温度图；图6实施例6试验猪粪便评分图。具体实施方式根据下述实施例，可以更好地理解本专利技术。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本专利技术，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本专利技术。实施例1噬菌体的分离与筛选(一)宿主菌的准备本专利技术涉及三种宿主菌，其中产肠毒素大肠杆菌(EnterotoxigenicEscherichiacolik88,CVCC83902)购自中国兽医微生物菌种保藏管理中心(ChinaVeterinaryCultureCollectionCenter,CVCC)，志贺菌(Shigelladysenteriae,CGMCC21535)购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(ChinaGeneralMicrobiologicalCultureCollectionCenter,CGMCC)；多重耐药大肠杆菌F2(JIsnky-E.coliF2)分离自吉林省农业科学院(JilinAcademyofAgriculturalSciences,JAAS)养猪场的仔猪腹泻粪便，由吉林省农业科学院畜牧分院抗生素替代品实验室自主保藏，经药敏试验鉴定其对氨苄西林、舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢呋辛、头孢呋辛酯、头孢替坦、亚胺培南、复方新诺明等9种抗生素具有耐药性。多重耐药大肠杆菌F2具本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种组合型噬菌体制剂，其特征在于，包括大肠杆菌噬菌体vB_EcoP_E21，大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_F2和志贺氏菌噬菌体vB_SsoM_Z31；所述大肠杆菌噬菌体vB_EcoP_E21保藏编号为：CGMCC NO.18869，所述大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_F2保藏编号为：CGMCC NO.18871，所述志贺氏菌噬菌体vB_SsoM_Z31保藏编号为：CGMCC NO.18870。/n

【技术特征摘要】
1.一种组合型噬菌体制剂，其特征在于，包括大肠杆菌噬菌体vB_EcoP_E21，大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_F2和志贺氏菌噬菌体vB_SsoM_Z31；所述大肠杆菌噬菌体vB_EcoP_E21保藏编号为：CGMCCNO.18869，所述大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_F2保藏编号为：CGMCCNO.18871，所述志贺氏菌噬菌体vB_SsoM_Z31保藏编号为：CGMCCNO.18870。


2.根据权利要求1所述的组合型噬菌体制剂，其特征在于，所述大肠杆菌噬菌体vB_EcoP_E21、大肠杆菌噬菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏炳栋，徐永平，于维，郑琳，陈龙，李淑英，李纪彬，杨欢，
申请(专利权)人：吉林省农业科学院，吉林省吉嘉饲料添加剂有限公司，大连赛姆生物工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22