使用磷酸化的TBeta4和其他因子生成人诱导多能干细胞制造技术

本发明专利技术提供使用外源Tβ4、外源Sox2和外源Oct4在非胚性和/或体细胞中诱导多能性的组合物和方法。诱导多能干细胞可以是类人猿或鼠。外源Tβ4可以是磷酸化的。外源Tβ4、外源Sox2和外源Oct4中的至少一种可以与细胞膜穿透部分和/或细胞核靶向部分偶联，从而使它们到达细胞核。另外，诱导多能干细胞在至少100次传代中保持多能性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用磷酸化的TBeta4和其他因子生成人诱导多能干细胞本申请要求于2017年8月25日提交的第62/550,337号美国临时专利申请以及于2018年7月24日提交的标题为“使用磷酸化的TBeta4和其他因子生成人诱导多能干细胞”的美国专利申请16/044,142的利益和优先权，其全部内容通过引用并入本申请。本文讨论的这些和所有其他外部材料通过引用整体并入本文。当术语的定义或使用在并入的参考文献中与本文提供的术语的定义不一致或相反时，适用本文提供的该术语的定义，而参考文献中该术语的定义不适用。
本专利技术的
是生成人诱导多能干细胞的组合物和方法。
技术介绍
以下背景讨论包括可用于理解本专利技术的信息。不承认本文提供的任何信息是现有技术或与当前要求保护的专利技术有关，或明确或隐含引用的任何出版物均为现有技术。目前针对治疗退行性疾病存在需求，而胚胎干细胞植入已显示出一些希望。(OlleLindvall&ZaalKokaia,Stemcellsforthetreatmentofneurologicaldisorders,441NATURE1094-96,2006)。但是，胚胎干细胞的使用存在争议。在2006年，Yamanaka等人报道了使用四种转录因子Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klft从小鼠胚胎成纤维细胞中诱导多能干细胞的产生。azutoshiTakahashi&ShinyaYamanaka(Inductionofpluripotentstemcellsfrommouseembryonicandadultfibroblastculturesbydefinedfactors,126CELL663-76,2006)。在2007年，这些转录因子被用于诱导人类成纤维细胞的多能干细胞。(KazutoshiTakahashietal.,InductionofPluripotentStemCellsfromAdultHumanFibroblastsbyDefinedFactors,131CELL861-72,2007)。诱导多能干细胞具有与胚胎干细胞相似的特性，并且还可以发展成退行性疾病疗法。另外，为了研究疾病进展，可以通过对健康和患病个体的体细胞进行程序重调来生成iPSC(诱导多能干细胞)。然后可以通过引入或纠正可能引起疾病的突变，而对iPSC进行基因修饰。然后将iPSC分化为目标细胞类型。(YuFenSamanthaSeahetal.,InducedPluripotencyandGeneEditinginDiseaseModelling:PerspectivesandChallenges,16INT.J.MOL.SCI.28614-34,2015)。然而，几个问题阻止了iPSC在治疗中的广泛使用。其中一个问题是肿瘤的形成，因为Yamanaka转录因子促进肿瘤发生，从而使植入的细胞不能正常运转。此外，由于使用病毒载体进行永久性基因组修饰，我们无法预测后果。本文所标记的所有出版物都以相同的程度通过引用并入本文，如同每个单独的出版物或专利申请被具体地和单独地指示通过引用并入一样。当术语的定义或使用在并入的参考文献中与本文提供的术语的定义不一致或相反时，适用本文提供的该术语的定义，而参考文献中该术语的定义不适用。在一些实施例中，用于描述和要求保护本专利技术的某些实施例的表示成分数量、性质(例如浓度、反应条件等)的数字应理解为在某些情况下被术语“约”修饰。因此，在一些实施例中，在说明书和所附权利要求书中阐述的数字参数是近似值，其可以根据特定实施例试图获得的期望特性而变化。在一些实施例中，应该根据报告的有效数字的数目并通过应用普通的舍入技术来解释数字参数。尽管列出本专利技术的一些实施例的广泛范围的数值范围和参数是近似值，但是在具体示例中列出的数值尽可能精确地报告。在本专利技术的一些实施例中呈现的数值可能包含某些误差，这些误差必然是由它们各自的测试测量中发现的标准偏差引起的。如本文的说明书和随后的权利要求书中所使用的，除非上下文另外明确指出，否则“一个”，“一种”和“该”的含义包括复数形式。此外，如本文的描述中所使用的，“在...中”的含义包括“在...中”和“在...上”，除非上下文另外明确指出。本文中数值范围的列举仅旨在用作分别指代落入该范围内的每个单独数值的速记方法。除非本文另外指出，否则将具有范围的每个单独的值并入说明书中，就如同其在本文中单独列举一样。除非本文另外指出或与上下文明显矛盾，否则本文描述的所有方法可以以任何合适的顺序执行。相对于本文的某些实施例提供的任何和所有示例或示例性语言(例如“例如”)的使用仅旨在更好地阐明本专利技术，并且不对以其他方式要求保护的本专利技术的范围构成限制。说明书中的任何语言都不应解释为表示对实施本专利技术必不可少的任何未要求保护的要素。本文公开的本专利技术的替代元件或实施例的分组不应解释为限制。每个群组成员可以单独引用或要求保护，也可以与该群组的其他成员或本文中的其他元件组合使用。出于方便和/或可专利性的原因，一个群组中的一个或多个成员可以包含在一个群组中、或从一个群组中删除。当发生任何这样的包含或删除时，说明书在本文中被认为包含经修改的群组，从而满足所附权利要求中使用的所有马库什群组的书面描述。因此，仍然需要诱导多能干细胞，其缺乏永久的基因组修饰，并且在植入患者体内时不形成肿瘤。
技术实现思路
本专利技术的主题提供了使用外源Tβ4、外源Sox2和外源Oct4在非胚性细胞和/或体细胞中诱导多能性的组合物和方法。诱导多能干细胞可衍生自非胚性细胞或体细胞。预期的诱导多能干细胞可以是类人猿(例如人诱导多能干细胞)或鼠类(例如小鼠诱导多能干细胞)。本专利技术人还设想可以在源自家畜的细胞中诱导多能性。本文的某些实施例提供的任何和所有实施例或示例性语言(例如，“例如”)的使用仅旨在更好地阐明本专利技术，并且不对所要求保护的本专利技术的范围构成限制。优选地，外源Τβ4为磷酸化的。磷酸化的Τβ4通过激活p53途径并抑制Ras致癌基因和JAK-STAT途径而促进多能性。为了提高转染效率，可以将细胞膜穿透部分与外源Tβ4、外源Sox2和/或外源Oct4偶联。如本文所用，术语“与...偶联”是指共价键合、静电的、抗生物素/抗生蛋白链菌素等。该偶联包括连接子和/或间隔子。如本文所用，除非上下文另有指示，否则术语“偶联至”旨在包括直接偶联(其中彼此偶联的两个元件彼此接触)和间接偶联(其中至少一个附加元件位于两个元件之间)。因此，术语“偶联至”和“与...偶联”同义地使用。优选地，细胞膜穿透部分包括阳离子肽。阳离子肽包括精氨酸和赖氨酸，优选为基本上由R9-K9组成的序列(RRRRRRRRRKKKKKKKKK)。阳离子肽可包括一个或多个甘氨酸间隔子。任选地，柔性连接子可以将阳离子肽连接至Tβ4、Sox2和/或Oc4。该讨论提供了本专利技术主题的许多示例性实施例。尽管每个实施例代表专利技术元素的单个组合，但是专利技术主题被认为包括所公开元素的所有可能的组合。因此，如果一个实本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.诱导多能干细胞，其包括：/n外源Τβ4；/n外源Sox2；和/n外源Oct4。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170825 US 62/550,337;20180724 US 16/044,1421.诱导多能干细胞，其包括：
外源Τβ4；
外源Sox2；和
外源Oct4。


2.如权利要求1所述的诱导多能干细胞，其中所述诱导多能干细胞包括类人猿诱导多能干细胞。


3.如权利要求2所述的诱导多能干细胞，其中所述诱导多能干细胞包括人诱导多能干细胞。


4.如权利要求1所述的诱导多能干细胞，其中所述类人猿诱导多能干细胞包括鼠类诱导多能干细胞。


5.如权利要求4所述的诱导多能干细胞，其中所述啮齿动物诱导多能干细胞包括小鼠诱导多能干细胞。


6.如权利要求1所述的诱导多能干细胞，其中所述外源Tβ4为磷酸化的。


7.如权利要求1所述的诱导多能干细胞，其中所述外源Tβ4、外源Sox2和外源Oct4中的至少一种与细胞膜穿透部分偶联。


8.如权利要求7所述的诱导多能干细胞，其中所述细胞膜穿透部分包括阳离子肽。


9.如权利要求8所述的诱导多能干细胞，其中所述阳离子肽具有基本上由RRRRRRRRRKKKKKKKKK组成的序列。


10.如权利要求1所述的诱导多能干细胞，其中所述外源Tβ4、外源Sox2和外源Oct4中的至少一种与细胞核靶向部分偶联。


11.如权利要求10所述的诱导多能干细胞，其中所...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿维纳什·赛斯，
申请(专利权)人：素氧生命科学公司，阿维纳什·赛斯，
类型：发明
国别省市：美国;US