【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于使用外排体相关基因编辑来治疗癌症的方法和组合物相关申请的参考本申请要求于2017年12月15日提交的美国临时申请号62/599,340的优先权权益，其全部内容通过引用并入本文。
技术介绍
1.
本专利技术总体上涉及医学和肿瘤学领域。更特别地，其涉及外排体用于体内递送核酸酶复合物以进行基因编辑的用途。2.相关技术描述基因编辑是一种允许在活细胞内修饰靶基因的技术。最近，利用CRISPR的细菌免疫系统根据需求执行基因编辑，彻底改变了科学家进行基因组编辑的方式。CRISPR系统的Cas9蛋白是一种RNA指导的DNA内切核酸酶，可通过改变其指导RNA序列而相对容易地被工程化为靶向新位点。该发现使得序列特异性基因编辑功能上有效。当前的CRISPR/Cas9技术提供了可靠的在体外编辑培养的细胞中的基因的方法；然而，需要靶向体内不同器官中特定细胞的新方法。专利技术概述因此，提供了被工程化以高效地将CRISPR-Cas9携带至不同器官和肿瘤从而使得能够进行治疗性基因编辑以控制癌症和其他遗传性疾病的外排体。在一个实施方案中，提供了包含外排体的组合物，其中所述外排体在其表面上包含CD47，并且其中所述外排体包含CRISPR系统。在一些方面中，CRISPR系统包含内切核酸酶和指导RNA(gRNA)。在一些方面中，内切核酸酶是Cas内切核酸酶。在一些方面中，内切核酸酶是Cas9内切核酸酶。在另一些方面中，内切核酸酶是Cpfl内切核酸酶。在一些方面中，指导RNA是单gRNA。在一些方面中，单g...
【技术保护点】
1.包含外排体的组合物，其中所述外排体在其表面上包含CD47，并且其中所述外排体包含CRISPR系统。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171215 US 62/599,3401.包含外排体的组合物，其中所述外排体在其表面上包含CD47，并且其中所述外排体包含CRISPR系统。
2.权利要求1所述的组合物，其中所述CRISPR系统包含内切核酸酶和指导RNA(gRNA)。
3.权利要求2所述的组合物，其中所述内切核酸酶是Cas内切核酸酶。
4.权利要求3所述的组合物，其中所述内切核酸酶是Cas9内切核酸酶。
5.权利要求2所述的组合物，其中所述内切核酸酶是Cpf1内切核酸酶。
6.权利要求2所述的组合物，其中所述指导RNA是单gRNA。
7.权利要求6所述的组合物，其中所述单gRNA是CRISPR-RNA(crRNA)。
8.权利要求6所述的组合物，其中所述单gRNA包含crRNA和反式激活CRISPRRNA(tracrRNA)的融合体。
9.权利要求2所述的组合物，其中所述指导RNA包含crRNA和tracrRNA。
10.权利要求2所述的组合物，其中所述内切核酸酶和所述gRNA在所述外排体内的单个核酸分子上编码。
11.权利要求1所述的组合物，其中所述CRISPR系统靶向致病突变。
12.权利要求11所述的组合物，其中所述致病突变是致癌突变。
13.权利要求12所述的组合物，其中所述致癌突变是癌基因中的激活突变。
14.权利要求12所述的组合物，其中所述致癌突变是肿瘤抑制基因中的抑制性突变。
15.权利要求12所述的组合物，其中所述致癌突变是KrasG12D。
16.权利要求2所述的组合物，其中所述外排体的至少50％包含内切核酸酶和gRNA。
17.权利要求16所述的组合物，其中所述外排体的至少60％包含内切核酸酶和gRNA。
18.权利要求17所述的组合物，其中所述外排体的至少70％包含内切核酸酶和gRNA。
19.权利要求18所述的组合物，其中所述外排体的至少80％包含内切核酸酶和gRNA。
20.权利要求19所述的组合物，其中所述外排体的至少90％包含内切核酸酶和gRNA。
21.药物组合物，其包含权利要求1至20中任一项所述的外排体和赋形剂。
22.权利要求21所述的组合物，其中所述组合物被配制用于肠胃外施用。
23.权利要求22所述的组合物，其中所述组合物被配制用于静脉内、肌内、皮下或腹膜内注射。
24.权利要求22所述的组合物，其还包含抗菌剂。
25.权利要求24所述的组合物，其中所述抗菌剂是苯扎氯铵、苄索氯铵、苄醇、布罗波尔、西曲溴铵、十六烷基氯化吡啶氯己定、氯丁醇、氯甲酚、氯二甲苯酚、甲酚、乙醇、甘油、海克替啶、咪唑烷脲、苯酚、苯氧乙醇、苯乙醇、硝酸苯汞、丙二醇或硫柳汞。
26.在有此需要的患者中治疗疾病的方法，所述方法包括向所述患者施用权利要求21至25中任一项所述的组合物，从而在所述患者中治疗所述疾病。
27.权利要求26所述的方法，其中施用引起所述患者的患病细胞中的基因编辑。
28.权利要求26所述的方法，其中所述疾病是癌症。
29.权利要求28所述的方法，其中所述癌症是胰腺导管腺癌。
30.权利要求26所述的方法，其中所述施用是全身性施用。
31.权利要求30所述的方法，其中所述全身性施用是静脉内施用。
32.权利要求26所述的方法，其还包括向所述患者施用至少第二治疗。
33.权利要求32所述的方法，其中所述第二治疗包括手术治疗、化学治疗、放射治疗、冷冻治疗、激素治疗或免疫治疗。
34.权利要求26所述的方法，其中所述患者是人。
35.权利要求34所述的方法，其中所述外排体对于所述患者是自体的。
36.包含外排体的组合物，其用于在患者中治疗疾病，其中所述外排体在其表面上包含CD47，并且其中所述外排体包含CRISPR系统。
37.权利要求36所述的组合物，其中所述CRISPR系统包含内切核酸酶和指导RNA(gRNA)。
38.权利要求37所述的组合物，其中所述内切核酸酶是Cas内切核酸酶。
39.权利要求38所述的组合物，其中所述内切核酸酶是Cas9内切核酸酶。
40.权利要求37所述的组合物，其中所述内切核酸酶是Cpf1内切核酸酶。
41.权利要求37所述的组合物，其中所述指导RNA是单gRNA。
42.权利要求41所述的组合物，其中所述单gRNA是CRISPR-RNA(crRNA)。
43.权利要求41所述的组合物，其中所述单gRNA包含crRNA和反式激活CRISPRRNA(tracrRNA)的融合体。
44.权利要求37所述的组合物，其中所述指导RNA包含crRNA和tracrRNA。
45.权利要求36所述的组合物，其中所述内切核酸酶和所述gRNA在所述外排体内的单个核酸分子上编码。
46.权利要求36所述的组合物，其中所述CRISPR系统靶向致病突...
【专利技术属性】
技术研发人员：拉古·卡尔卢里，瓦莱丽·勒布勒，肖斐，
申请(专利权)人：得克萨斯州大学系统董事会，
类型：发明
国别省市：美国;US
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