灰葡萄孢的RT-QPCR检测的引物、探针、试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了灰葡萄孢的RT‑QPCR检测的引物、探针、试剂盒及方法，属于生物技术领域。上游引物和下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；试剂盒包括上述引物及探针。荧光定量PCR检测方法包括：提取待测样品总DNA；制备反应体系；将模板梯度稀释制成标准曲线样品及阳性对照样品；将待测样品、标准曲线样品、阳性对照样品、阴性对照样品使用引物和探针进行荧光定量PCR扩增；绘制标准曲线，计算结果。本发明专利技术的引物、探针及试剂盒，具有高度特异性和良好的灵敏度，能快速、准确度地灰葡萄孢进行检测。

【技术实现步骤摘要】
灰葡萄孢的RT-QPCR检测的引物、探针、试剂盒及方法
本专利技术属于生物
，具体涉及灰葡萄孢的RT-QPCR检测的引物、探针、试剂盒及方法。
技术介绍
灰葡萄孢(Botrytiscinerea)是葡萄等多种植物灰霉病的病原菌，例如它容易感染天竺葵、西红柿和草莓。灰霉病由灰葡萄孢菌侵染所致，属真菌病害，花、果、叶、茎均可发病。灰霉病病苗色浅，叶片、叶柄发病呈灰白色，水渍状，组织软化至腐烂，高湿时表面生有灰霉。幼茎多在叶柄基部出现不规则水浸斑，很快变软腐烂，缢缩或折倒，最后病苗腐烂枯萎病死。灰葡萄孢菌是葡萄孢属中的一类丝状子囊真菌，根据其培养性状、分生孢子梗和分生孢子的形态特征进行鉴定，然而形态学鉴定不能区分不同的生物物种和具有共同形态特征而基因多样的有丝分裂菌株，如若采用传统的鉴定方法，容易出现偏差，且耗时较长。现有技术中，采用多重PCR检测灰葡萄孢虽然特异性好、准确性高，然而其PCR结果需要通过琼脂糖电泳进行分析，影响因素较多。随着分子生物学技术的不断发展，RT-QPCR(实时荧光定量PCR)目前已广泛应用于菌种的检测。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.灰葡萄孢的RT-QPCR检测的引物，其特征在于，所述引物包括上游引物和下游引物，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，/n上游引物：5'-ATTTACAGAGTTCATGCCCGAAA-3'；/n下游引物：5'-TGCCAGAACCAAGAGATCCG-3'。/n

【技术特征摘要】
1.灰葡萄孢的RT-QPCR检测的引物，其特征在于，所述引物包括上游引物和下游引物，其核苷酸序列分别如SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示，
上游引物：5'-ATTTACAGAGTTCATGCCCGAAA-3'；
下游引物：5'-TGCCAGAACCAAGAGATCCG-3'。


2.灰葡萄孢的RT-QPCR检测的探针，其特征在于，所述探针的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示：5'-TCTCTGGCGAGCATACAAGG-3'；优选地，所述探针5’端标记的荧光报告基团为VIC，3’端标记的荧光淬灭基团为BHQ。


3.灰葡萄孢的RT-QPCR检测的引物及探针组合，其特征在于，包括：
上游引物：5'-ATTTACAGAGTTCATGCCCGAAA-3'；
下游引物：5'-TGCCAGAACCAAGAGATCCG-3'；
探针：5'-TCTCTGGCGAGCATACAAGG-3'。


4.一种灰葡萄孢的RT-QPCR检测的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的引物、及权利要求2所述的探针。


5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包括QPCR模板，所述QPCR模板如SEQIDNO:4所示；优选地，所述模板是以质粒的形式存在。


6.根据权利要求4或5所述的试剂盒，其特征在于，还包括阴性样品；优选地，所述阴性对照样品为ddH2O。


7.根据权利要求4或5所述的试剂盒，其特征在于，还包括预混液；优选地，所述预混液为2×ProbeMix。


8.一种灰葡萄孢的RT-QP...

【专利技术属性】
技术研发人员：石勇，孙宗科，朱建宁，张镭，沈颂东，车团结，高恺，李潇玲，郑晓玲，
申请(专利权)人：兰州百源基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：甘肃;62