一种骨髓间充质干细胞成脂转化促进剂制造技术

本发明专利技术提供了一种骨髓间充质干细胞成脂转化促进剂，属于干细胞技术领域。所述成脂转化促进剂为长链非编码RNA LINC01607的基因抑制剂，所述基因抑制剂能够通过促进成脂转化相关基因PPARγ、C/EBPα和aP2的表达来促进骨髓间充质干细胞的成脂转化。本发明专利技术的有益效果在于：本发明专利技术提供了一种新的用于骨髓间充质干细胞成脂转化的促进剂，通过该促进剂可以有效的加快骨髓间充质干细胞的成脂转化，从而可以实现骨髓间充质干细胞的快速成脂转化。

【技术实现步骤摘要】
一种骨髓间充质干细胞成脂转化促进剂
本专利技术属于干细胞
，尤其涉及一种骨髓间充质干细胞成脂转化促进剂。
技术介绍
间充质干细胞是一类在体内和体外具有自我更新和多向分化潜能的细胞，在特定的诱导条件下，间充质干细胞可以分化为脂肪细胞，成骨细胞和软骨细胞等，是组织工程中理想的种子细胞。由于间充质干细胞经连续传代及低温保存后仍然具有多向分化的潜能，因此，间充质干细胞被广泛的应用于组织工程与再生医学领域。然而，调控间充质干细胞命运（细胞增殖，细胞分化或细胞凋亡）的分子机制目前尚不清楚，因此还有待于进一步的深入研究。长链非编码RNA是核苷酸长度大于200bp，并且缺少开放阅读框的一类RNA。按照其在基因组上的定位，长链非编码RNA分为：正义长链非编码RNA、反义长链非编码RNA、内含子长链非编码RNA、基因间长链非编码RNA、启动子长链非编码RNA。最初，长链非编码RNA被认为是基因组转录的“噪音”，但是随着研究的不断深入，研究人员发现，长链非编码RNA在细胞的发生发展过程中具有重要的作用，而且长链非编码RNA的表达水平或者是功能异常与众多的疾病紧密联系。最新的研究发现，长链非编码RNA在干细胞多潜能分化中也具有重要的功能，目前对于间充质干细胞脂向分化机制的研究多集中在微小RNA上，对于长非编码RNA在脂向分化过程中的作用尚且知之甚少。因此，研究LINC01607在间充质干细胞中的作用，对于间充质干细胞的进一步开发利用具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于促进骨髓间充质干细胞成脂转化的促进剂。为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：一种骨髓间充质干细胞成脂转化促进剂，所述促进剂为长链非编码RNALINC01607基因抑制剂。优选地，所述LINC01607基因抑制剂为shRNA、siRNA或化学修饰siRNA。优选地，所述LINC01607基因抑制剂为shRNA。优选地，所述shRNA的正义链为：5’-CACCGTGCTTTGTGGATGTATTATGCGAACATAATACATCCACAAAGCAC-3’；所述shRNA的反义链为：5’-AAAAGTGCTTTGTGGATGTATTATGTTCGCATAATACATCCACAAAGCAC-3’。5.LINC01607基因抑制剂在制备骨髓间充质干细胞成脂转化促进剂中的用途。6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述基因抑制剂为shRNA；所述shRNA的正义链为5’-CACCGTGCTTTGTGGATGTATTATGCGAACATAATACATCCACAAAGCAC-3’；所述shRNA的反义链为5’-AAAAGTGCTTTGTGGATGTATTATGTTCGCATAATACATCCACAAAGCAC-3’。此外，本专利技术提供了一种LINC01607基因抑制剂，所述基因抑制剂用于制备骨髓间充质干细胞成脂转化促进剂。除此之外，本专利技术提供了一种长链非编码RNA，所述长链非编码RNA为LINC01607；所述LINC01607在骨髓间充质干细胞成脂转化过程中下调；所述LINC01607的基因抑制剂用于制备骨髓间充质干细胞成脂转化促进剂。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供了一种新的用于骨髓间充质干细胞成脂转化的促进剂，通过该促进剂可以有效的加快骨髓间充质干细胞的成脂转化，从而可以实现骨髓间充质干细胞的快速成脂转化。附图说明图1骨髓间充质干细胞成脂分化过程中LINC01607的表达变化。图2LINC01607基因抑制剂的抑制效果。图3油红O染色检测结果。图4LINC01607基因抑制剂对于PPARγmRNA表达量的影响。图5LINC01607基因抑制剂对于C/EBPαmRNA表达量的影响。图6LINC01607基因抑制剂对于aP2mRNA表达量的影响。图7LINC01607基因抑制剂对于PPARγ、C/EBPα和aP2蛋白表达量的影响。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。如无特别说明，本专利技术所涉及的技术均为分子生物学或细胞生物学常规技术手段，其中涉及的酶、试剂以及反应条件均可根据本领域技术人员的经验进行合理选择，其中涉及试剂耗材属于市售的普通产品，其中涉及的检测手段以及仪器也均为本领域技术人员所熟知并熟练掌握。实施例11.成脂诱导分化（1）将骨髓间充质干细胞接种于6孔板中，当细胞生长密度达到80%时，将旧培养基弃去，PBS清洗两遍，加入脂肪细胞分化诱导培养基，放入37℃细胞恒温培养箱中；（2）细胞分化2天后，将脂肪分化诱导培养基换成脂肪细胞分化维持培养基；（3）在过2天后，将脂肪维持培养基换成完全培养基，之后一直使用完全培养基进行培养。2.RNA提取（1）分别在第0天，7天和14天提取RNA，检测LINC01607的表达情况。（2）去除6孔板中的培养基，用PBS洗涤细胞，每孔加入500μlTrizol裂解液，反复吹打细胞，室温放置5min，使细胞充分裂解；（3）将Trizol转移至1.5ml离心管中，加入100μl氯仿，将离心管置于涡旋振荡器上混匀15s，冰上放置10min；（4）4℃离心机，12000g，离心15min；（5）溶液分为三层，吸取上层水相至新的离心管中，加入1倍体积的预冷异丙醇，放置10min；（6）将离心管置于低温高速离心机中，12000转离心10min，小心去除上清；（7）将500μl75%乙醇加入到沉淀中，颠倒混匀后，将离心管置于低温高速离心机中，8000转，4℃，离心5min；（8）小心去除上清，静置5-10min至乙醇完全蒸发，加入DEPC水溶解沉淀，测定RNA纯度和浓度。3.逆转录反应逆转录反应参照TAKARA反转录试剂盒。逆转录反应体系：5×PrimeScriptRTmastermix2μl；RNA模板0.5μg；RNaseFree水to10μl。逆转录反应条件：37℃15min；85℃5s；4℃冷却。4.实时荧光定量PCR实时荧光定量PCR按照TAKARAqPCR（SYBR）试剂盒进行扩增，反应条件：95℃120s；95℃30s，65℃15s,40个循环;72℃10min。按照2-△△Ct方法处理实时定量PCR数据，计算LINC01607的表达变化，实验结果如图1所示。引物序列LINC01607Forwardprimer5'-TGCAGGCATCAGAATCACCTGGAGGA-3'（SEQIDNO.1）Reverseprimer5'-AGAGCCAGGTTTCTCCATCAGCA-3'（SEQIDNO.2）GAPDH...

【技术保护点】
1.一种骨髓间充质干细胞成脂转化促进剂，其特征在于，所述促进剂为长链非编码RNALINC01607基因抑制剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种骨髓间充质干细胞成脂转化促进剂，其特征在于，所述促进剂为长链非编码RNALINC01607基因抑制剂。


2.根据权利要求1所述的促进剂，其特征在于，所述LINC01607基因抑制剂为shRNA、siRNA或化学修饰siRNA。


3.根据权利要求1所述的促进剂，其特征在于，所述LINC01607基因抑制剂为shRNA。


4.根据权利要求3所述的促进剂，其特征在于，
所述shRNA的正义链为
5’-CACCGTGCTTTGTGGATGTATTATGCGAACATAATACATCCACAAAGCAC-3’；
所述shRNA的反义链为
5’-AAAAGTGCTTTGTGGATGTATTATGTTCGCATAATACATCCACAAAGCAC-3’。


5.LINC01607基因抑制剂在制...

【专利技术属性】
技术研发人员：殷勤伟，马真艳，赵焰，
申请(专利权)人：山东殷氏干细胞有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37