一种运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法技术

本发明专利技术公开了一种运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，所述方法具体步骤如下：将产胺菌与植物乳杆菌同时接种于含有20～40g/L氯化钠的无菌液体培养基中，共同培养；其中，所述产胺菌为摩氏摩根氏菌(Morganella morganii)或霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)，所述产胺菌和植物乳杆菌的菌落数比例为1:1～1:2。与对照组相比，本发明专利技术使得所述产胺菌培养液中的生物胺含量显著降低，总抑制率达到75.3％～95.6％。本发明专利技术运用栅栏技术，采用盐度及植物乳杆菌组合的方式，形成对产胺菌株的多重抑制，从而降低生物胺含量。

【技术实现步骤摘要】
一种运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法
本专利技术属于发酵
，涉及一种运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法。
技术介绍
生物胺是一类较为特殊且具有生物活性的有机物质，由微生物分泌的氨基酸脱羧酶催化氨基酸脱羧形成。当其适量存在于人体内时，可有效的促进生理代谢，但在人体内过量积累时，则会引发一系列诸如头痛、痉挛、恶心呕吐等中毒症状，严重时甚至会危及生命。它们广泛存在于食品，尤其是蛋白质含量较高的发酵食品中，常见的如发酵香肠，鱼制品，肉制品，乳制品及发酵酒类等。鱼制品在加工、运输及贮藏期间易受微生物污染，从而导致生物胺积累。大量研究表明，鱼制品中的生物胺主要由摩根氏菌属、肠杆菌属和发光细菌产生，其中摩根氏菌属是主要的产组胺细菌，常见的包括Morganellamorganii和Morganellapsychrotolerans，发光细菌在一些鱼制品中产组胺，肠杆菌属是主要的产尸胺与腐胺细菌。因此，抑制产生物胺细菌的生长，能有效降低鱼制品中的生物胺含量，提高产品安全性。栅栏因子理论认为，有效提高食品安全性，则在食品加工过程中其内部必须存在能够抑制微生物生长繁殖的因素，通过多个因素之间相互作用以保证食品质量，这些因素统称为栅栏因子。然而，目前通过不同栅栏因子组合的形式抑制产胺菌积累生物胺的实施例鲜有报道，运用栅栏技术，协同降低鱼制品生物胺含量的方法也未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，将产胺菌与植物乳杆菌同时接种于含有20～40g/L氯化钠的无菌液体培养基中共同培养；其中，所述产胺菌为摩氏摩根氏菌(Morganellamorganii)或霍氏肠杆菌(Enterobacterhormaechei)，所述产胺菌和植物乳杆菌的菌落数添加比例为1:1～1:2。2019100254208的专利技术专利申请《一株植物乳杆菌及其在降低鱼茶生物胺含量中的应用》记载了一种植物乳杆菌Yc-2；本专利技术涉及的植物乳杆菌可选用该菌体。优选方式下，所述运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，包括步骤：将液体培养基中加入氯化钠，所述氯化钠的添加量为20～40g/L，灭菌，得添加氯化钠的无菌液体培养基；向所述添加氯化钠的无菌液体培养基中加入浓度为107～108CFU/mL的植物乳杆菌菌悬液和浓度为107～108CFU/mL的产胺菌菌悬液，混合均匀，培养；其中，所述产胺菌菌悬液和植物乳杆菌菌悬液总菌落数的添加比例为1:1～1:2；所述添加氯化钠的无菌液体培养基、植物乳杆菌菌悬液和产胺菌菌悬液的体积比为8:1:1～7:2:1；所述产胺菌为摩氏摩根氏菌(Morganellamorganii)或霍氏肠杆菌(Enterobacterhormaechei)；所述液体培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉3g/L，葡萄糖1g/L，吡哆醛-5’-磷酸0.05g/L，苯丙氨酸1g/L，组氨酸1g/L，精氨酸1g/L，鸟氨酸1g/L，赖氨酸1g/L，色氨酸1g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水。优选方式下，所述培养的温度为20～30℃、时间36～48h；所述产胺菌菌悬液的制备方法为：从生物胺显色培养基上挑取活化的产胺菌株接种至无菌液体培养基中，置于30℃培养18h，用无菌液体培养基稀释至107CFU/mL～108CFU/mL，所述产胺菌为摩氏摩根氏菌(Morganellamorganii)或霍氏肠杆菌(Enterobacterhormaechei)；所述生物胺显色培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉5g/L，NaCl5g/L，碳酸钙1g/L，琼脂20g/L，溴甲酚紫0.06g/L，苯丙氨酸10g/L，组氨酸10g/L，精氨酸10g/L，鸟氨酸10g/L，赖氨酸10g/L，色氨酸10g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水；所述液体培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉3g/L，葡萄糖1g/L，吡哆醛-5’-磷酸0.05g/L，苯丙氨酸1g/L，组氨酸1g/L，精氨酸1g/L，鸟氨酸1g/L，赖氨酸1g/L，色氨酸1g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水。所述植物乳杆菌菌悬液的制备方法如下：从MRS琼脂培养基上挑取活化的植物乳杆菌接种至无菌MRS肉汤培养基，置于37℃培养18h，用无菌MRS肉汤培养基稀释至107CFU/mL～108CFU/mL。优选方式下，运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，包括步骤：取液体培养基，添加NaCl至浓度为40g/L，121℃、15min灭菌，得添加氯化钠的无菌液体培养基；向所述添加氯化钠的无菌液体培养基中加入107CFU/mL的植物乳杆菌Yc-2菌悬液和浓度为107CFU/mL的摩氏摩根氏菌菌悬液，混合均匀，30℃培养48h；所述加氯化钠的无菌液体培养基、植物乳杆菌Yc-2菌悬液和摩氏摩根氏菌菌悬液的体积比为8:1:1；其中，所述植物乳杆菌Yc-2菌悬液的制备方法为：从MRS琼脂培养基上挑取活化的植物乳杆菌Yc-2接种至无菌MRS肉汤培养基，置于37℃有氧培养18h，用MRS肉汤培养基稀释至107CFU/mL，得植物乳杆菌Yc-2菌悬液；所述摩氏摩根氏菌菌悬液的制备方法为：从生物胺显色培养基上挑取活化的摩氏摩根氏菌菌株接种至无菌液体培养基中，置于30℃培养18h，用无菌液体培养基稀释至107CFU/mL；所述生物胺显色培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉5g/L，NaCl5g/L，碳酸钙1g/L，琼脂20g/L，溴甲酚紫0.06g/L，苯丙氨酸10g/L，组氨酸10g/L，精氨酸10g/L，鸟氨酸10g/L，赖氨酸10g/L，色氨酸10g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水；所述液体培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉3g/L，葡萄糖1g/L，吡哆醛-5’-磷酸0.05g/L，苯丙氨酸1g/L，组氨酸1g/L，精氨酸1g/L，鸟氨酸1g/L，赖氨酸1g/L，色氨酸1g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水。优选方式下，运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，包括步骤：取液体培养基，加入NaCl至浓度为20g/L，121℃、15min灭菌，得添加氯化钠的无菌液体培养基；向所述添加氯化钠的无菌液体培养基中加入108CFU/mL的植物乳杆菌Yc-2菌悬液和浓度为108CFU/mL的霍氏肠杆菌菌悬液，混合均匀，30℃培养48h；所述添加氯化钠的无菌液体培养基、植物乳杆菌Yc-2菌悬液和霍氏肠杆菌菌悬液的体积比为8:1:1；其中，所述植物乳杆菌Yc-2菌悬液的制备方法为：从MRS琼脂培养基上挑取活化的植物乳杆菌Yc-2接种至无菌MRS肉汤培养基，置于37℃有氧培养18h，用MRS肉汤培养基稀释至108CFU/mL，得植物乳杆菌Yc-2菌悬液；所述霍氏肠杆菌菌悬液的制备方法为：从生物胺显色培养基上挑取活化的霍氏肠杆菌菌株接种至无本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，其特征在于，将产胺菌与植物乳杆菌同时接种于含有20～40g/L氯化钠的无菌液体培养基中，共同培养；其中，所述产胺菌为摩氏摩根氏菌Morganella morganii或霍氏肠杆菌Enterobacter hormaechei，所述产胺菌和植物乳杆菌的菌落数比例为1:1～1:2。/n

【技术特征摘要】
1.一种运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，其特征在于，将产胺菌与植物乳杆菌同时接种于含有20～40g/L氯化钠的无菌液体培养基中，共同培养；其中，所述产胺菌为摩氏摩根氏菌Morganellamorganii或霍氏肠杆菌Enterobacterhormaechei，所述产胺菌和植物乳杆菌的菌落数比例为1:1～1:2。


2.根据权利要求1所述运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，其特征在于，包括步骤：
将液体培养基中加入氯化钠，所述氯化钠的添加量为20～40g/L，灭菌，得添加氯化钠的无菌液体培养基；向所述添加氯化钠的无菌液体培养基中加入浓度为107～108CFU/mL的植物乳杆菌菌悬液和浓度为107～108CFU/mL的产胺菌菌悬液，混合均匀，培养；
其中，所述产胺菌菌悬液和所述植物乳杆菌菌悬液中菌落总数的比例为1:1～1:2；所述添加氯化钠的无菌液体培养基、植物乳杆菌菌悬液和产胺菌菌悬液的体积比为8:1:1～7:2:1；所述产胺菌为摩氏摩根氏菌或霍氏肠杆菌；
所述无菌液体培养基的成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉3g/L，葡萄糖1g/L，吡哆醛-5’-磷酸0.05g/L，苯丙氨酸1g/L，组氨酸1g/L，精氨酸1g/L，鸟氨酸1g/L，赖氨酸1g/L，色氨酸1g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水。


3.根据权利要求1所述运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，其特征在于，所述培养的温度为20～30℃、时间36～48h。


4.根据权利要求1所述运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，其特征在于，所述产胺菌菌悬液的制备方法为：从生物胺显色培养基上挑取活化的产胺菌株接种至无菌液体培养基中，置于30℃培养18h，用无菌液体培养基稀释至107CFU/mL～108CFU/mL，所述产胺菌为摩氏摩根氏菌或霍氏肠杆菌；
所述生物胺显色培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉5g/L，NaCl5g/L，碳酸钙1g/L，琼脂20g/L，溴甲酚紫0.06g/L，苯丙氨酸10g/L，组氨酸10g/L，精氨酸10g/L，鸟氨酸10g/L，赖氨酸10g/L，色氨酸10g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水；
所述液体培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉3g/L，葡萄糖1g/L，吡哆醛-5’-磷酸0.05g/L，苯丙氨酸1g/L，组氨酸1g/L，精氨酸1g/L，鸟氨酸1g/L，赖氨酸1g/L，色氨酸1g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水。


5.根据权利要求1所述运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，其特征在于，所述植物乳杆菌菌悬液的制备方法如下：从MRS琼脂培养基上挑取活化的植物乳杆菌接种至无菌MRS肉汤培养基，置于37℃培养18h，用无菌MRS肉汤培养基稀释至107CFU/mL～108CFU/mL。


6.根据权利要求1所述运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，其特征在于，包括步骤：
取液体培养基，添加NaCl至浓度为40g/L，121℃灭菌15min...

【专利技术属性】
技术研发人员：纪超凡，张黎明，林心萍，梁会朋，张素芳，
申请(专利权)人：大连工业大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21