一种杀灭沙门氏菌的噬菌体混合制剂的制备及试验方法技术

本发明专利技术公开了一种杀灭沙门氏菌的噬菌体混合制剂的制备及试验方法，涉及兽医学杀菌制剂技术领域。本发明专利技术的制备方法，包括步骤：S01、温和沙门噬菌体的诱导及鉴定；S02、沙门噬菌体的纯化；S03、悬液保存；S04、制作噬菌体鸡尾酒；试验方法包括步骤：T1、制作液体培养基；T2、稀释菌液；T3、混合制备；T4、参照试验。本发明专利技术对于不同浓度的沙门菌，该制剂皆有良好的杀菌效果，能够提高其较抗生素的杀菌能力且减少细菌抗性的产生，代替抗生素的使用而应用于环境杀菌的混合制剂。

【技术实现步骤摘要】
一种杀灭沙门氏菌的噬菌体混合制剂的制备及试验方法
本专利技术属于兽医学杀菌制剂
，特别是涉及一种杀灭沙门氏菌的噬菌体混合制剂的制备方法以及一种杀灭沙门氏菌的噬菌体混合制剂的试验方法。
技术介绍
沙门氏菌(Salmonella)是一类重要的肠道致病菌，会导致动物的腹泻、肠炎、败血症及母畜流产，同时也会感染人，是导致人食物中毒最主要的病原，对畜禽养殖及公共卫生意义重大。沙门氏菌包含肠道沙门氏菌和邦戈尔沙门氏菌2个种，以及7个亚种和2500多种血清型，我国已报道其中的292种血清型，绝大多数都具有致病性。在我国，因沙门氏菌而引起的食物中毒更是居于榜首。另外对于猪及禽类养殖危害尤为严重，可引起猪霍乱、猪伤寒、鸡白痢、鸡副伤寒等疾病。给畜牧业造成巨大经济损失。大量抗生素被用于沙门氏菌的防治，随着抗生素的发展，不少养殖户随意滥用抗生素，对养殖业的发展造成了严重的阻碍，抗生素的残留也对人体健康造成威胁。据统计，在我国每年生产的21万吨抗生素中大部分被用于畜牧养殖业，比例较大为四环素类抗生素。每年饲料添加剂中的抗生素使用量大约有6000吨，200本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种杀灭沙门氏菌的噬菌体混合制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS01、温和沙门噬菌体的诱导及鉴定：/n通过用丝裂霉素C试剂法诱导不同血清型的沙门菌，其终浓度为1μg/mL，避光诱导3h后，用0.22μm的滤器过滤诱导液，滤液编号置于4℃冰箱保存；应用点滴法鉴定滴于LB平板上的噬菌体悬液产生了澄清透亮的空斑，初步判定噬菌体是否诱导成功并进行标记记录，根据标记记录产生空斑的噬菌体编号及其所对应的指示菌；通过透射电镜观察及效价测定，确定效价最高的长尾噬菌体pP14；/nS02、沙门噬菌体的纯化：/n将上述经标记的噬菌体pP14应用双层平板法：噬菌体pP14原液用SM缓冲液做倍比稀释，...

【技术特征摘要】
1.一种杀灭沙门氏菌的噬菌体混合制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S01、温和沙门噬菌体的诱导及鉴定：
通过用丝裂霉素C试剂法诱导不同血清型的沙门菌，其终浓度为1μg/mL，避光诱导3h后，用0.22μm的滤器过滤诱导液，滤液编号置于4℃冰箱保存；应用点滴法鉴定滴于LB平板上的噬菌体悬液产生了澄清透亮的空斑，初步判定噬菌体是否诱导成功并进行标记记录，根据标记记录产生空斑的噬菌体编号及其所对应的指示菌；通过透射电镜观察及效价测定，确定效价最高的长尾噬菌体pP14；
S02、沙门噬菌体的纯化：
将上述经标记的噬菌体pP14应用双层平板法：噬菌体pP14原液用SM缓冲液做倍比稀释，选取10-5，10-6，10-7等适当的稀释倍数的稀释液与培养至对数期的指示菌1:1(各200ul)混合，吹打混匀后37℃孵育15分钟，取混合液300μL于5mL融化后预热的50℃半固体培养基中，铺双层平板，待半固体凝固后倒置于37℃温箱培养4-6h；将上述纯化步骤重复三次，得到大小均一稳定噬菌斑；
S03、悬液保存：将所诱导的经纯化的温和噬菌体pP14和实验室已分离的烈性噬菌体pSQC73以悬液形式4℃保存；
...

【专利技术属性】
技术研发人员：马喆，范亚娟，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32